全 文 ：验中，交换后的树脂在酸化后，如用水洗至中性再用
乙醇洗脱，总蒽醌的收率下降近１／３，故选择酸化后
直接用乙醇洗脱，在酸性条件下回收乙醇，苷被水解
成苷元，在制剂中可用药剂学手段使苷元发挥苷在
制剂中的药效［１２－１４］。
参考文献：
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［收稿日期］２０１４－１１－２５
［基金项目］湖南省“十二五”重点建设学科经费资助（编号：２０１１－４２）　［作者简介］向德标，男，硕士，副教授，研究方向：动物生理、中草药药理
学，电话：０７４５－２８５１０３７，Ｅ－ｍａｉｌ：ｃｎｘｄｂｈｈ＠１６３．ｃｏｍ
地锦草醇提物对兔离体小肠平滑肌作用及机制研究
向德标１，２，阳漾１，刘小娟１，石胜超１　 （１．怀化学院生物与食品工程学院，湖南 怀化４１８００８；２．怀化学院民族药用植物
资源研究与利用湖南省重点实验室，湖南 怀化４１８００８）
［摘要］　目的：研究地锦草醇提物对家兔离体小肠平滑肌的作用及机制。方法：将离体家兔小肠平滑肌置于恒温平滑肌槽
中，通过ＢＬ－４２０Ｓ生物机能实验系统，观察记录地锦草醇提物对正常小肠平滑肌自主收缩活动的影响，应用受体阻断剂硫酸
阿托品、苯海拉明、酚妥拉明研究地锦草醇提物对小肠平滑肌作用的机制。结果：地锦草醇提物能显著抑制家兔小肠平滑肌
自发性收缩的振幅（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１），但对其收缩频率的影响不大。用阿托品、苯海拉明、酚妥拉明分别阻断胆碱能 Ｍ受
体、组胺 Ｈ１ 受体及肾上腺素能α受体后，地锦草醇提物仍能显著降低离体小肠平滑肌的收缩振幅（Ｐ＜０．０１）。结论：地锦草
醇提物对家兔离体小肠平滑肌的收缩振幅具明显的抑制作用，其机制可能与兴奋肾上腺素能α受体，阻断胆碱能 Ｍ受体、组
胺 Ｈ１ 受体有关。
［关键词］　地锦草醇提物；小肠平滑肌；胆碱能 Ｍ受体；组胺 Ｈ１ 受体；肾上腺素能α受体
［中图分类号］Ｒ９６１．１　［文献标识码］Ａ　［文章编号］１００１－５２１３（２０１５）１５－１３７１－０５　ＤＯＩ：１０．１３２８６／ｊ．ｃｎｋｉ．ｃｈｉｎｈｏｓｐｐｈａｒｍａｃｙｊ．２０１５．１５．０８
Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　ｅｔｈａｎｏｌ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｆｒｏｍＥｕｐｈｏｒｂｉａ　ｈｕｍｉｆｕｓａ（ＥＥＥＨ）ｏｎ　ｓｍｏｏｔｈ　ｍｕｓｃｌｅ　ｏｆ
ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｓｍａｌ　ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ　ｉｎ　ｒａｂｂｉｔｓ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ
ＸＩＡＮＧ　Ｄｅ－ｂｉａｏ１，２，ＹＡＮＧ　Ｙａｎｇ１，ＬＩＵ　Ｘｉａｏ－ｊｕａｎ１，ＳＨＩ　Ｓｅｎｇ－ｃｈａｏ１（１．Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｆｏｏｄ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ
Ｈｕａｉｈｕａ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈｕｎａｎ　Ｈｕａｉｈｕａ　４１８００８，Ｃｈｉｎａ；２．Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｈｕｎａｎ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ　ｆｏｒ　Ｓｔｕｄｙ　ａｎｄ　Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｅｔｈｎｉｃ
Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　Ｐｌａｎｔ　Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ，Ｈｕａｉｈｕａ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈｕｎａｎ　Ｈｕａｉｈｕａ　４１８００８，Ｃｈｉｎａ）
ＡＢＳＴＲＡＣＴ：ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ＥＥＥＨ　ｏｎ　ｓｍｏｏｔｈ　ｍｕｓｃｌｅ　ｏｆ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｓｍａｌ　ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ　ｉｎ　ｒａｂｂｉｔｓ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｍｅｃｈ－
ａｎｉｓｍ．ＭＥＴＨＯＤＳ　Ｓｍａｌ　ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ　ｗａｓ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ａｎｄ　ｋｅｐｔ　ｉｎ　ａ　ｃｏｎｓｔａｎｔ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｓｍｏｏｔｈ　ｍｕｓｃｌｅ　ｔｒｏｕｇｈ．Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ＥＥＥＨ
ｏｎ　ｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｍａｌ　ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ　ｗｅｒｅ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ａｎｄ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｂｙ　ＢＬ－４２０Ｓ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｓｉｇｎａｌ　ｒｅｃｏｒｄｉｎｇ　ｓｙｓｔｅｍ．Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ
ＥＥＥＨ　ｗａｓ　ｓｔｕｄｉｅｄ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　Ａｔｒｏｐｉｎｅ，Ｄｉｐｈｅｎｈｙｄｒａｍｉｎｅ　ａｎｄ　Ｐｈｅｎｔｏｌａｍｉｎｅ．ＲＥＳＵＬＴＳ　ＥＥＥＨ　ｒｅｄｕｃｅｄ　ｔｅｎｓｉｏｎ　ｏｆ　ｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎ
ｏｆ　ｒａｂｂｉｔｓ　ｓｍａｌ　ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ　ｓｍｏｏｔｈ　ｍｕｓｃｌｅ（Ｐ＜０．０５　ｏｒ　Ｐ＜０．０１），ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ　ｗａｓ　ｎｏｔ　ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ　ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｄ．Ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ａｔｒｏｐｉｎｅ，
ｄｉｐｈｅｎｈｙｄｒａｍｉｎｅ　ａｎｄ　ｐｈｅｎｔｏｌａｍｉｎｅ　ｔｏ　ｂｌｏｃｋ　ｃｈｏｌｉｎｅｒｇｉｃ　Ｍ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ｈｉｓｔａｍｉｎｅ　Ｈ１ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ａｎｄ　ａｄｒｅｎｅｒｇｉｃαｒｅｃｅｐｔｏｒ，ｒｅｓｐｅｃ－
·１７３１·中国医院药学杂志２０１５年８月第３５卷第１５期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，Ａｕｇ　２０１５，Ｖｏｌ　３５，Ｎｏ．１５
ｔｉｖｅｌｙ，ＥＥＥＨ　ｃｏｕｌｄ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｒｅｄｕｃｅ　ｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎ　ａｍｐｌｉｔｕｄｅ　ｏｆ　ｓｍａｌ　ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ　ｓｍｏｏｔｈ　ｍｕｓｃｌｅ．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ　ＥＥＥＨ　ｏｂｖｉ－
ｏｕｓｌｙ　ｉｎｈｉｂｉｔｓ　ｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎ　ａｍｐｌｉｔｕｄｅ　ｏｆ　ｓｍａｌ　ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ　ｓｍｏｏｔｈ　ｍｕｓｃｌｅ　ｏｆ　ｒａｂｂｉｔｓ．Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｌｐｈａ　ａｄｒｅｎｅｒｇｉｃ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ｉｎｈｉｂｉ－
ｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｍ　ｃｈｏｌｉｎｅｒｇｉｃ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ａｎｄ　Ｈ１ｈｉｓｔａｍｉｎｅ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｍｉｇｈｔ　ｂｅ　ｉｎｖｏｌｖｅｄ．
ＫＥＹ　ＷＯＲＤＳ：ｅｔｈａｎｏｌ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｆｒｏｍＥｕｐｈｏｒｂｉａ　ｈｕｍｉｆｕｓａｅ（ＥＥＥＨ）；ｓｍｏｏｔｈ　ｍｕｓｃｌｅ　ｏｆ　ｓｍａｌ　ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ；ｃｈｏｌｉｎｅｒｇｉｃ　Ｍ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ；
ｈｉｓｔａｍｉｎｅ　Ｈ１ｒｅｃｅｐｔｏｒ；ａｄｒｅｎｅｒｇｉｃαｒｅｃｅｐｔｏｒ
　　地锦草为大戟科植物地锦（Ｅｕｐｈｏｒｂｉａ　ｈｕｍｉ－
ｆｕｓａ　ｗｉｌｄ．）或斑地锦（Ｅｕｐｈｏｒｂｉａ　ｍａｃｕｌａｔａ　Ｌ．）的
干燥全草［１］，分布于全国各地。其化学成分主要有
黄酮类、三萜类、香豆素类、甾醇类、鞣质及酚酸类等
化合物［２］，具有多种药理作用，是中医、侗药中常用
药材。现代药理学研究证明，地锦草及其复方具有
抗菌、抗炎、抗氧化、抗过敏、免疫调节、保肝、止血等
多种作用［３］。近年来，应用地锦草治疗各种皮肤病、
瘙痒、痢疾、腹泻、肠炎、跌打肿痛和糖尿病等疾病，
取得了很好的疗效［４－５］。民间应用单味地锦草治疗
腹泻效果明显，有学者对地锦草止泻作用机制进行
了研究，发现地锦草具有明显的体外抑菌作用［６］。
曹旭［７］报道小叶地锦能显著抑制炭末在小鼠小肠内
的推进率，提示小叶地锦可能具有抑制小肠运动的
作用。至于地锦草对动物离体小肠平滑肌的作用未
见报道，为研究地锦草的止泻作用机制，本研究拟通
过观察地锦草醇提物（Ｅｔｈａｎｏｌ　Ｅｘｔｒａｃｔ　ｆｒｏｍ　Ｅｕ－
ｐｈｏｒｂｉａ　ｈｕｍｉｆｕｓａ，ＥＥＥＨ）对兔离体小肠平滑肌自
发性收缩及工具药诱导下的收缩活动的影响，以探
明其对动物小肠平滑肌的作用及机制，为临床应用
地锦草治疗腹泻提供科学依据。
１　材料
１．１　仪器　ＦＹ１３０药物粉碎机（天津市泰斯特仪
器有限公司）；ＣＴＸＮＷ－１０Ｂ超声循环提取机（北
京弘祥隆生物技术开发有限公司）；旋转蒸发仪
ＲＥ５２－９９（上海亚荣生化仪器厂）；电子天平（北京赛
多利斯仪器系统有限公司）；ＦＮ１０１－２型鼓风干燥
箱（长沙仪器仪表厂）；ＢＬ－４２０Ｓ生物机能实验系
统（成都泰盟科技有限公司）；ＨＷ－４００Ｓ恒温平滑
肌槽（成都泰盟科技有限公司）。
１．２　药品与试剂　地锦草：采集于怀化学院周边，
经怀化学院生命科学系曾汉元教授鉴定为大戟科植
物地锦（Ｅｕｐｈｏｒｂｉａ　ｈｕｍｉｆｕｓａ　ｗｉｌｄ．）。硫酸阿托品
（北 京 梅 尔 森 医 药 技 术 开 发 有 限 公 司，批 号
７１１２０５）；甲磺酸酚妥拉明注射液（１０％）（上海旭东
海普药业有限公司，批号１００１０２）；盐酸苯海拉明片
（山西太原药业有限公司，批号 Ｈ１４０２２４３６）；９５％
酒精（分析纯）。台氏液：参照文献［１０］配方。
１．３　动物　选择同批次新西兰大白兔４０只（雌雄
各半），体质量２～２．５　ｋｇ，购自怀化医学高等专科学
校试验动物部［批号ＳＣＸＫ（湘）２００９－０００９］。
２　方法
２．１　地锦草醇提物的制备　将地锦草水洗自然风
干，置于１０１－２ＢＳ型电热鼓风干燥箱中５０℃干燥
约４８　ｈ用超声波循环提取（３００　Ｗ，２０　ｍｉｎ），减压抽
滤回收酒精，用石油醚脱色３次，然后用正丁醇萃取
３次，减压抽滤回收正丁醇，旋转蒸发浓缩，再于６０
℃恒温箱中烘２４　ｈ，制得粉状地锦草提取物，放入４
℃冰箱中保存备用。
２．２　离体肠的制备　将家兔禁食２４　ｈ后，猛击小
脑致晕，用剪刀快速打开腹腔，每只兔取十二指肠同
一段肠管放入盛有混合气（９６％Ｏ２，４％ＣＯ２）的饱和
台氏液中，将十二指肠剪成２．５～３　ｃｍ／段，用台氏
液轻轻漂洗，每只兔选择活动较有规律的３段肠管
进行试验。
２．３　地锦草醇提物对兔离体肠运动的影响　打开
ＢＬ－４２０Ｓ生物机能实验系统，调零，定标，在一通
道输入接口处安装张力换能器。调节恒温平滑肌
槽，水温保持在（３７±０．５）℃，将台式液加入预管内，
药物管加入２５　ｍｌ台氏液。取一肠段，上端连接张
力换能器，下端连于Ｌ型通气钩上，将肠管放入药
物管并固定，调节恒温平滑肌槽，通入混合气９６％
Ｏ２和４％ＣＯ２，标准负荷１　ｇ，平衡３０　ｍｉｎ，待肠管收
缩稳定后，加药。
根据预试验结果将实验动物进行分组：（１）地锦
草醇提物组：终浓度为０．０２５，０．０５０，０．１００，０．２００，
０．４００　ｍｇ·ｍｌ－１；（２）硫酸阿托品（０．０４　ｍｇ·ｍｌ－１）＋
地锦草醇提物（０．２　ｍｇ·ｍｌ－１）；（３）盐酸苯海拉明
（０．５　ｍｇ·ｍｌ－１）＋地锦草醇提物（０．２　ｍｇ·ｍｌ－１）；
（４）甲磺酸酚妥拉明（０．４μｇ·ｍｌ
－１）＋ 地锦草醇提
物（０．２　ｍｇ·ｍｌ－１）。
实验时，先描记肠管的正常运动曲线，然后用微
量移液器向平滑肌槽中加入各种药物，给药前后５
ｍｉｎ，分别记录肠管的运动波形。每次给药完成后，
立即用预热的台氏液冲洗肠管至少３次，待肠管回
复收缩后，再进行下一次给药。记录对兔离体肠平
滑肌收缩频率和振幅的影响（取１０个波的平均值），
并计算各指标抑制百分率。
·２７３１· 中国医院药学杂志２０１５年８月第３５卷第１５期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，Ａｕｇ　２０１５，Ｖｏｌ　３５，Ｎｏ．１５
　　抑制百分率（％）＝（给药前平均张力－给药后
平均张力）÷给药前平均张力×１００％
２．４　统计学方法　试验数据均以珚ｘ±ｓ来表示，应
用ＳＰＳＳ１７．０软件进行单因素方差分析，组内差异
显著性检验应用Ｄｕｎｃａｎ’ｓ新复极差法对给药前后
平滑肌收缩频率和振幅进行比较，Ｐ＜０．０５为差异
显著性检验，Ｐ＜０．０１为差异显著极显著。
３　结果
３．１　地锦草醇提物对兔离体十二指肠平滑肌自发
收缩活动的影响　正常对照组兔离体十二指肠平滑
肌收缩频率、振幅均较稳定，收缩波形无明显变化，
表现为自动节律性收缩。加入地锦草醇提物
（０．０２５，０．０５，０．１，０．２，０．４　ｍｇ·ｍｌ－１）后其收缩幅
度明显降低（图１）。与对照组比较，除０．０２５　ｍｇ·
ｍｌ－１组差异不显著外，其他各组均达到显著或极显
著水平（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１），收缩频率均无明显变
化（Ｐ＞０．０５），见表１。
ａ．对照；ｂ．０．０２５　ｍｇ·ｍｌ－１地锦草醇提物；ｃ．０．０５　ｍｇ·ｍｌ－１地锦草醇
提物；ｄ．０．１　ｍｇ·ｍｌ－１地锦草醇提物；ｅ．０．２　ｍｇ·ｍｌ－１地锦草醇提
物；ｆ．０．４　ｍｇ·ｍｌ－１地锦草醇提物
ａ．ｃｏｎｔｒｏｌ；ｂ．ＥＥＥＨ０．０２５　ｍｇ·ｍｌ－１；ｃ．ＥＥＥＨ０．０５　ｍｇ·ｍｌ－１；ｄ．
ＥＥＥＨ０．１　ｍｇ·ｍｌ－１；ｅ．ＥＥＥＨ０．２　ｍｇ·ｍｌ－１；ｆ．ＥＥＥＨ０．４　ｍｇ·
ｍｌ－１
图１　地锦草醇提物对兔离体十二指肠平滑肌自发收缩活动的影响
Ｆｉｇ　１　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ＥＥＥＨ　ｏｎ　ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ　ｃｏｎｔｒａｃｔｉｖｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｒａｂｂｉｔ
ｓｍａｌ　ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ　ｓｍｏｏｔｈ　ｍｕｓｃｌｅ
３．２　地锦草醇提物对阿托品阻断胆碱能 Ｍ 受体后
小肠收缩活动的影响　待十二指肠收缩曲线稳定
后，向浴槽中加入胆碱能 Ｍ受体阻断剂硫酸阿托品
（０．０４　ｍｇ·ｍｌ－１），其收缩幅度显著降低，平均收缩
幅度从对照的（２．１８±０．２４）ｇ降低到（１．２５±０．１７）
ｇ（ｎ＝８，Ｐ＜０．０１）。在此基础上，加入地锦草醇提
物（０．２　ｍｇ·ｍｌ－１），十二指肠平滑肌收缩幅度进一
步降低至（０．１４±０．０５）ｇ（ｎ＝８，Ｐ＜０．０１）（图２）。
ａ．对照；ｂ．０．０４　ｍｇ·ｍｌ－１阿托品；ｃ．０．２　ｍｇ·ｍｌ－１醇提物
ａ．ｃｏｎｔｒｏｌ；ｂ．ａｔｒｏｐｉｎｅ　０．０４　ｍｇ·ｍｌ－１；ｃ．ＥＥＥＨ０．２　ｍｇ·ｍｌ－１
图２　地锦草醇提物对阿托品阻断胆碱能 Ｍ 受体后小肠收缩活动
的影响（ｎ＝８）
Ｆｉｇ　２　Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　ＥＥＥＨ　ｏｎ　ａｔｒｏｐｉｎｅ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｎ　ｃｏｎｔｒａｃ－
ｔｉｌｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｒａｂｂｉｔ　ｓｍａｌ　ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ　ｓｍｏｏｔｈ　ｍｕｓｃｌｅ（ｎ＝８）
３．３　地锦草醇提物对苯海拉明阻断组胺 Ｈ１ 受体
后小肠收缩活动的影响　加入苯海拉明（０．５　ｍｇ·
ｍｌ－１）阻断组胺 Ｈ１ 受体后，小肠的收缩幅度明显下
降，平均收缩幅度从对照的（１．７８±０．０６）ｇ降低到
（０．４５±０．０３）ｇ（ｎ＝８，Ｐ＜０．０１）。在此基础上加入
地锦草醇提物（０．２　ｍｇ·ｍｌ－１），十二指肠平滑肌收
缩幅度进一步降低至（０．０５±０．０１）ｇ（ｎ＝８，Ｐ＜
０．０１）（图３）。
ａ．对照组；ｂ．０．５　ｍｇ·ｍｌ－１苯海拉明；ｃ．０．２　ｍｇ·ｍｌ－１地锦草醇提物
ａ．ｃｏｎｔｒｏｌ；ｂ．ｄｉｐｈｈｅｎｈｙｄｒａｍｉｎｅ　０．５　ｍｇ·ｍｌ－１；ｃ．ＥＥＥＨ０．２　ｍｇ·
ｍｌ－１
图３　地锦草醇提物对苯海拉明阻断组胺 Ｈ１ 受体后小肠收缩活动
的影响（ｎ＝８）
Ｆｉｇ　３　Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　ＥＥＥＨ　ｏｎ　ｄｉｐｈｈｅｎｈｙｄｒａｍｉｎｅ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｃｈａｎｇｅｓ
ｏｎ　ｃｏｎｔｒａｃｔｉｌｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｒａｂｂｉｔ　ｓｍａｌ　ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ　ｓｍｏｏｔｈ　ｍｕｓｃｌｅ（ｎ＝８）
表１　不同浓度地锦草醇提物对兔离体小肠收缩张力和收缩频率的影响（珚ｘ±ｓ，ｎ＝８）
Ｔａｂ　１　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ＥＥＥＨ　ｏｎ　ａｍｐｌｉｔｕｄｅ　ａｎｄ　ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ　ｏｆ　ｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｓｍａｌ　ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ
ｓｍｏｏｔｈ　ｍｕｓｃｌｅ（珚ｘ±ｓ，ｎ＝８）
组别
振幅／ｇ
给药前 给药后
抑制率
／％
频率／（次／ｍｉｎ）
给药前 给药后
ＥＥＥＨ０．０２５　ｍｇ·ｍｌ－１　 ２．３４±０．４０　 ２．３０±０．４２ －１．７０　 １１±０．５８　 １１±０．４９
ＥＥＥＨ０．０５　ｍｇ·ｍｌ－１　 ２．３０±０．４５　 ２．１５±０．４８ａ －６．５２　 １１±０．４７　 １１±０．５３
ＥＥＥＨ０．１　ｍｇ·ｍｌ－１　 ２．１９±０．４３　 １．７３±０．３７ｂ －２１．０１　 １１±０．６７　 １１±０．５５
ＥＥＥＨ０．２　ｍｇ·ｍｌ－１　 ２．０３±０．５０　 １．２２±０．１９ｂ －３９．９１　 １１±０．４２　 １１±０．４１
ＥＥＥＨ０．４　ｍｇ·ｍｌ－１　 １．８５±０．４７　 １．０３±０．１４ｂ －４４．３２　 １１±０．３９　 １１±０．５１
注：与给药前比较，ａＰ＜０．０５，ｂ　Ｐ＜０．０１
·３７３１·中国医院药学杂志２０１５年８月第３５卷第１５期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，Ａｕｇ　２０１５，Ｖｏｌ　３５，Ｎｏ．１５
３．４　地锦草醇提物对酚妥拉明阻断肾上腺素能α
受体后小肠收缩活动的影响　加入酚妥拉明（０．４
μｇ·ｍｌ
－１）阻断肾上腺素能α受体后，小肠的收缩幅
度明显增加，平均收缩幅度从对照组的（１．２４±
０．０５）ｇ提高到（１．３８±０．０３）ｇ（ｎ＝８，Ｐ＜０．０５）。
在此基础上加入地锦草醇提物（０．２　ｍｇ·ｍｌ－１），收
缩幅度下降至（０．６８±０．０２）ｇ（ｎ＝８，Ｐ＜０．０１）（图
４）。
ａ．对照组；ｂ．０．４μｇ·ｍｌ－１苯海拉明；ｃ．０．２　ｍｇ·ｍｌ－１地锦草醇提物
ａ．ｃｏｎｔｒｏｌ；ｂ．ｐｈｅｎｔｏｌａｍｉｎｅ　０．４μｇ·ｍｌ－１；ｃ．ＥＥＥＨ０．２　ｍｇ·ｍｌ－１
图４　地锦草醇提物对酚妥拉明阻断肾上腺素能α受体后小肠收缩
活动的影响（ｎ＝８）
Ｆｉｇ　４　Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　ＥＥＥＨ　ｏｎ　ｐｈｅｎｔｏｌａｍｉｎｅ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｎ
ｃｏｎｔｒａｃｔｉｌｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｒａｂｂｉｔ　ｓｍａｌ　ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ　ｓｍｏｏｔｈ　ｍｕｓｃｌｅ（ｎ＝８）
４　讨论
实验结果表明，不同质量浓度的地锦草醇提取
物对家兔离体小肠平滑肌自发收缩活动具有明显的
抑制作用。由此推断，地锦草醇提取能抑制胃肠痉
挛，缓解肠胃疼痛，对治疗胃肠动力疾病如腹泻，腹
痛，胃肠痉挛等有一定疗效。
胃肠道上存在的胆碱能 Ｍ 受体，属 Ｇ蛋白耦
联家族，是一种糖蛋白。乙酰胆碱（Ａｃｈ）与其结合
后使胞内三磷酸肌醇（ＩＰ３）和二酰基甘油（ＤＧ）浓度
上升，进而引起Ｃａ２＋释放和底物蛋白磷酸化激发平
滑肌产生收缩效应［８］。阿托品为胆碱能 Ｍ 受体阻
断剂，与 Ｍ受体结合后占领位点，竞争性拮抗 Ａｃｈ
的激动作用。本试验观察到先加入阿托品阻断胆碱
能 Ｍ受体使家兔离体小肠平滑肌的收缩幅度明显
下降，再加入地锦草醇提物其收缩幅度进一步下降，
这提示地锦草醇提物可能也是通过阻断胆碱能 Ｍ
受体而发挥能小肠平滑肌收缩的抑制作用。
组胺受体有４种亚型，即 Ｈ１ 型受体、Ｈ２ 型受
体、Ｈ３ 型受体和Ｈ４ 型受体。Ｈ１、Ｈ２ 受体分布在中
枢组胺能神经元中及外周的胃肠、气管、子宫、血管
平滑肌、心脏、皮肤等组织。通常认为 Ｈ１、Ｈ２ 受体
是胞膜成分，激动 Ｈ１ 受体时能使磷脂酰肌醇（Ｉｎ－
ｓｐ）增加，且能改变 Ｎａ＋、Ｃａ２＋的通透性，Ｃａ２＋流入
细胞内并从线粒体、肌小胞体和胞浆膜内贮存的
Ｃａ２＋动员出来，从而使 Ｃａ２＋ 浓度显著提高，致
ｃＡＭＰ水平上升引起平滑肌收缩等效应［９］。苯海拉
明是组胺 Ｈ１ 受体阻断剂，能阻断组胺与 Ｈ１ 受体的
结合，从而引起小肠平滑肌舒张［１０］。本实验观察
到，先加入苯海拉明后加入地锦草醇提取物，地锦草
醇提取物能使离体家兔小肠平滑肌进一步舒张，提
示地锦草醇提取物可能也是一种组胺 Ｈ１ 受体阻断
药，能通过阻断组胺 Ｈ１ 受体而发挥舒张小肠平滑
肌的效应。
肾上腺素能受体是一种Ｇ蛋白结合受体，根据
其药理学特征、耦联的Ｇ蛋白性质及选择性配体种
类，用ＤＮＡ技术已克隆出９个亚型：α１ａ、α１ｂ、α１ｄ、
α２ａ、α２ｂ、α２ｃ、β１、β２、β３
［１１］。肾上腺素能受体兴奋，
引起ｃＡＭＰ水平升高，ｃＡＭＰ通过依赖于ｃＡＭＰ蛋
白激酶产生膜效应，调制了膜离子通道，减少Ｃａ２＋
内流，因而使动作电位消失而引起平滑肌松弛。肾
上腺素能在受体兴奋时引起ｃＧＭＰ水平升高，有人
提出ｃＧＭＰ可能是神经因索诱发平滑肌细胞产生
超极化的细胞内介质；ｃＧＭＰ还介导了一氧化氮
（ＮＯ）信号传递转导，一氧化氮（ＮＯ）刺激肠内肌间
丛的非交感非胆碱能的抑制性神经元都可出现膜超
极化，慢波节律降低及ｃＧＭＰ升高等效应；ｃＧＭＰ
与ｃＡＭＰ相同，其介导平滑肌舒张机制还表现在对
肌醇脂质水解的抑制，使ＩＰ３减少，并通过依赖于
ｃＧＭＰ蛋白激酶对钙泵的活化而引起胞浆Ｃａ２＋水
平下降［１２］。胞浆内Ｃａ２＋浓度的恢复使肌球蛋白轻
链激酶（ＭＬＣＫ）失活，肌球蛋白轻链磷酸酶（ＭＬ－
ＣＰ）使肌球蛋白脱磷酸化，肌肉舒张［１３］。酚妥拉明
是肾上腺素能α受体阻断剂，可以阻断肾上腺素类
物质的作用，使小肠平滑肌收缩。本试验观察到先
加入酚妥拉明后加入地锦草醇提取物，离体家兔小
肠平滑肌先出现收缩幅度增加而后下降的现象，提
示地锦草醇提取物可与酚妥拉明竟争α受体的结合
胖点，从而兴奋肾上腺素能α受体抑制肠平滑肌的
收缩［１４］。
综上所述，本研究结果表明地锦草醇提取物可
能抑制小肠离体平滑肌的收缩活动，其作用机制可
能与阻断胆碱能 Ｍ 受体、组胺 Ｈ１ 受体，兴奋肾上
腺素能α受体有关。
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作用［Ｊ］．中国农业科学，２０１２，４５（１７）：３６６９－３６７６．
［收稿日期］２０１４－１０－０２
［作者简介］杨方，男，博士研究生，研究方向：药物新剂型，医用高分子材料，Ｅ－ｍａｉｌ：ｙａｎｇｆａ＠ｓｔａｆｆ．ｕｎｉ－ｍａｒｂｕｒｇ．ｄｅ　［通讯作者］史琛，女，主管
药师，研究方向：医院药学，药物新剂型及有效性，电话：１５８０７１３８４０５，Ｅ－ｍａｉｌ：２９１３６９０９＠ｑｑ．ｃｏｍ
无稳定剂修饰的汉防己甲素ＰＬＧＡ纳米粒制备及体外评价
杨方１，张硕２，郑思维２，诺尔贝特－汉普１，史琛２　 （１．菲利普马尔堡大学生物应用物理化学组，德国 马尔堡３５０３２；２．
华中科技大学同济医学院附属协和医院药剂科，湖北 武汉４３００２２）
［摘要］　目的：制备无稳定剂修饰的汉防己甲素ＰＬＧＡ纳米粒，研究其理化性质及细胞毒和细胞摄取特性。方法：以聚乳酸－
羟基醋酸共聚物（ＰＬＧＡ）为载体材料，采用无稳定剂修饰的纳米沉淀法制备汉防己甲素纳米粒；通过单因素试验考察不同制
备工艺对纳米粒理化性质的影响；通过载药量、包封率、累积释药量等指标考察其载药特性；采用 ＭＴＴ比色法检测其对人肺
腺癌细胞株Ａ５４９的细胞毒性；采用共聚焦显微镜技术考察其细胞摄取特性。结果：无稳定剂修饰的汉防己甲素ＰＬＧＡ纳米
粒平均粒径１６９．３　ｎｍ，与有稳定剂的汉防己甲素ＰＬＧＡ纳米粒相比外观无明显改变。在一定范围内，随着ＰＬＧＡ用量的增
加，纳米粒的粒径呈上升趋势；随着投药量的增加，纳米粒的载药量显著增加，包封率下降。在ｐＨ７．４的释放介质中，纳米粒
释慢释药，９６　ｈ累积释药率６０．４４％。细胞毒试验显示，当培养时间为８　ｈ时，汉防己甲素组的细胞毒性大于汉防己甲素纳米
粒组；当培养时间延长至２４　ｈ时，汉防己甲素纳米粒组的细胞活性明显低于纯药物组；高剂量的空白纳米粒组始终表现较低
的细胞毒性。激光共聚焦电镜断层扫描显示汉防己甲素纳米粒能够较好的被细胞摄取。结论：制备的无稳定剂修饰的汉防
己甲素ＰＬＧＡ纳米粒大小均一，包封率高，体外释药表现出较好的缓释效果，易被细胞摄取，对Ａ５４９细胞的增殖有明显的抑
制作用。
［关键词］　汉防己甲素；ＰＬＧＡ纳米粒；无稳定剂修饰；细胞摄取
［中图分类号］Ｒ９４３．１　［文献标识码］Ａ　［文章编号］１００１－５２１３（２０１５）１５－１３７５－０６　ＤＯＩ：１０．１３２８６／ｊ．ｃｎｋｉ．ｃｈｉｎｈｏｓｐｐｈａｒｍａｃｙｊ．２０１５．１５．０９
Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｔａｂｉｌｉｚｅｒ－ｆｒｅｅ　ＰＬＧＡ　ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ　ｌｏａｄｉｎｇ　ｔｅｔｒａｎｄｒｉｎｅ
ＹＡＮＧ　Ｆａｎｇ１，ＺＨＡＮＧ　Ｓｈｕｏ２，ＺＨＥＮＧ　Ｓｉ－ｗｅｉ　２，Ｎｏｒｂｅｒｔ　Ａ．Ｈａｍｐｐ１，ＳＨＩ　Ｃｈｅｎ２（１．Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ
ＡＧ　Ｈａｍｐｐ，Ｐｈｉｌｉｐｐｓ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｍａｒｂｕｒｇ，Ｍａｒｂｕｒｇ　３５０３２，Ｇｅｒｍａｎｙ；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｕｎｉｏｎ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｔｏｎｇｊｉ
Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｅｇｅ，Ｈｕａｚｈｏｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｈｕｂｅｉ　Ｗｕｈａｎ　４３００２２，Ｃｈｉｎａ）
ＡＢＳＴＲＡＣＴ：ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ　Ｔｏ　ｐｒｅｐａｒｅ　ｓｔａｂｉｌｉｚｅｒ－ｆｒｅｅ　ＰＬＧＡ　ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ　ｏｆ　ｔｅｔｒａｎｄｒｉｎｅ（Ｔｅｔ－ＰＬＧＡ　ＮＰｓ）ａｎｄ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ
ｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｓ，ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ　ａｎｄ　ｐａｒｔｉｃｌｅ　ｃｅｌｕｌａｒ　ｕｐｔａｋｅ．ＭＥＴＨＯＤＳ　Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ　ｏｆ　ｔｅｔｒａｎｄｒｉｎｅ　ｗｅｒｅ
ｐｒｅｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ＰＬＧＡ　ａｓ　ｃａｒｒｉｅｒ　ｕｓｉｎｇ　ｓｔａｂｉｌｉｚｅｒ－ｆｒｅｅ　ｎａｎｏｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ．Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｗａｓ　ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ　ｗｉｔｈ　ｍｅｔｈｏｄ
ｏｆ　ｓｉｎｇｌｅ－ｆａｃｔｏｒ　ｄｅｓｉｇｎ．Ｄｒｕｇ　ｌｏａｄｉｎｇ，ｅｎｔｒａｐｍｅｎｔ　ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ　ａｎｄ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｄｒｕｇ　ｒｅｌｅａｓｅ　ｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ　ｔｏ　ｅｖａｌｕａｔｅ　ｄｒｕｇ－ｌｏａｄｉｎｇ
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ｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ　ｏｆ　Ｔｅｔ－ＰＬＧＡ　ＮＰｓ　ｗａｓ　ｇｒｅａｔｅｒ　ｔｈａｔ　ｏｆ　Ｔｅｔ　ａｆｔｅｒ　２４　ｈｏｕｒｓ　ｏｆ　ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ．Ａｌｓｏ　ｂｌａｎｋ　ＰＬＧＡ　ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ（ＮＰｓ）ａｔ
ｈｉｇｈ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｗａｓ　ａｖｉｒｕｌｅｎｔ　ｔｏ　Ａ５４９．Ｚ－ｓｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ　ｗｉｔｈ　ＣＬＳＭ　ｓｕｇｇｅｓｔｅｄ　ｔｈａｔ　Ｔｅｔ－ＰＬＧＡ　ＮＰｓ　ｗｅｒｅ　ｗｅｌ
·５７３１·中国医院药学杂志２０１５年８月第３５卷第１５期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，Ａｕｇ　２０１５，Ｖｏｌ　３５，Ｎｏ．１５