全 文 ：心肌病变为原发病的心力衰竭以及强心药物的研究。实验结
果表明 GG能纠正戊巴比妥钠对心脏的抑制作用，使减慢的 HR
显著加快，降低的 LVSP和 dp /dt max显著增加，升高的 LVEDP
显著降低。说明 GG 能够改善心力衰竭心脏的收缩和舒张功
能，部分对抗戊巴比妥钠所致的心力衰竭。
本实验采用 Langendorff离体心脏灌流法观察了 GG对离体
心脏心肌收缩性能的变化，实验排除了神经内分泌的干扰，直
接反映了药物对离体心脏的心肌收缩性能的作用。GG 增加左
室收缩压(LVSP) ，并且浓度依赖性地降低 LVEDP;高浓度的
GG还能增加 + dp /dt max。说明 GG 在增加心脏收缩功能的同
时，还能降低心脏的前负荷。
GG有效增强正常大鼠心肌收缩功能，同时能够改善心力
衰竭心脏的收缩和舒张功能，具有对抗心力衰竭的作用，有可
能成为一种新的治疗心功能不全的药物。
参考文献
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The cardiac systolic and diastolic effects of genipin-1-β-D-gentiobioside in the experimental heart failure
Chen Long1，3，Luo Zhuoka1，Peng Guoping2，Li Xuehua1，Liu Lei1，Sheng Xiaobo1，Wang Zhongyue3
(1 Department of Pharmacology;2 Department of Pharmaceutical Engineering，School of Pharmacy，Nanjing University of
Chinese Medicine，Nanjing 210046;3 Institute of Chinese Medicine of Taizhou China Medical City，Taizhou 225300)
Objective:This study was to investigate the cardiac systolic and diastolic effects of Genipin-1-β-D-gentiobioside (GG)in the experi-
mental heart failure and normal rats． Methods:in vivo experimental heart failure model experiments:the heart rate (HR) ，the peak systolic
pressure (LVSP) ，left ventricular end-diastolic pressure (LVEDP) ，peak rate of rise of left ventricular pressure (+ dp /dt max) ，and peak
rate of fall of left ventricular pressure (-dp /dt max)were measured by a polyethylene tube inserted into the left ventricle via the right carotid
artery． in vitro normal isolated rat heart experiments:the HR，LVSP，LVEDP and ± dp /dt max were measured by the conventional Lange-
ndroff method． Results:GG (40 mg /kg)significantly decreased the LVEDP and increased the HR，LVSP，+ dp /dtmax and -dp /dt max in
heart failure rats induced by pentobarbital sodium． Moreover，GG (1，10，100 μmol /L)significantly enhanced the LVSP and + dp /dt max
and decreased the LVEDP in a concentration dependent manner without remarkably affecting the HR and -dp /dt max． Conclusion:Effects of
Genipin-1-β-D-gentiobioside on protecting against heart failure of rats induced by pentobarbital sodium were mediated by enhancing rat heart
inotropy and lowering the preload of heart．
Key words genipin-1-β-D-gentiobioside(京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷) ;cardiac inotropy;heart failure
芒柄花素对兔离体肠平滑肌运动的影响及机制研究
*
高 雅1，邵正威1，贾晓宁1，王巧云2＊＊
(1滨州医学院口腔学院;2滨州医学院基础学院，烟台 264000)
摘 要 目的:观察芒柄花素( formononetin) 对兔离体肠平滑肌肌张力的影响，并探讨其作用机制。方法:试验采用经典的离
体小肠灌流技术，观察芒柄花素对肠平滑肌自主收缩活动以及乙酰胆碱( acetylcholine，Ach) 、氯化钡( Bacl2 ) 及组胺( Histamine) 所致
14中药药理与临床 2013;29(2)
* 基金项目: 2009 年山东省高等学校优秀青年教师国内访问学者项目 ( No． 2009GN003 ) ; 2011 年滨州医学院大学生科技创新项目 ( No．
BY2011DKCX12) ＊＊通讯作者
痉挛性收缩肠平滑肌的影响。结果:20 ～ 100μmol / L芒柄花素能剂量依赖性的抑制家兔离体小肠平滑肌自发性收缩，对乙酰胆碱，
组胺和氯化钡所致的兔离体肠痉挛性收缩也具有剂量依赖性抑制作用，且与肠平滑肌自发性收缩比较差异有显著性。在无钙台式
液中，芒柄花素可明显抑制 Ach 引起的肠平滑肌收缩，亦能使 CaCl2 量效曲线下移，对 Bay K8644( 0． 5 μmol /L) 引起的肠平滑肌收
缩有明显抑制作用。结论:芒柄花素明显抑制了家兔离体小肠平滑肌的收缩活动，其机制与抑制外钙内流及内钙释放有关。
关键词 芒柄花素;小肠平滑肌;钙离子
芒柄花素属异黄酮类化合物，近年来有较多的研究证明黄
芪中的黄酮类成分有增强免疫、抗心肌缺血、保肝、抗炎、抗突
变、清除自由基等药理作用［1］，而芒柄花素也可以在一定程度
上降低高脂血症金黄地鼠血清 TC、TG 和 LDL-C，升高 HDL-C;
改善肝脂肪化、减轻炎性细胞浸润;抑制胸主动脉壁内膜下泡
沫细胞形成和中膜平滑肌增生，具有抑制肝脏脂肪沉积和预防
动脉粥样硬化的作用［2 ～ 4］。作为一种异黄酮类化合物，芒柄花
素亦有植物雌激素的特征，在体内具有雌激素样作用，可用于
更年期综合征的防治［5］。但芒柄花素对胃肠平滑肌运动功能
的影响报道很少，本实验通过离体家兔十二指肠平滑肌灌流方
法，观察不同浓度的芒柄花素对离体肠平滑肌收缩活动的影响
及作用机制，从而为芒柄花素的药效学研究和临床应用提供指
导。
1 材料
1． 1 药品 芒柄花素，南京泽朗医药科技有限公司，纯度为
98%，批号 ZL20091211，实验时将芒柄花素用 DMSO 配成药液
备用。
1． 2 动物 家兔 (2． 5 ± 0． 4)kg，雌雄各半，由滨州医学院动
物中心提供。动物合格证号:SCXK(鲁)2008-0010。
1． 3 试剂 Bay K8644 购自 Sigma 公司;氯化乙酰胆碱(Ach，
批号 091201，中科院上海生物化学研究所试剂厂)。磷酸组胺
(中国科学院上海生物化学研究所)。氯化钡(BaCl2，自贡市张
家坝盐华有限公司)。二甲基亚砜(Dimethyl sulfoxide，DMSO)。
实验用 Tyrode＇s 液(台式液，g /L) :NaC1 8． 0，CaCl2 0． 2，KCl 0． 2，
MgCl2 0． 1，NaHCO3 1． 0，KH2PO4 0． 05，葡萄糖 1． 0。无钙 Tyrode
＇s 液以 EDTA代替 CaCl2 外，其余成分相同。
1． 4 仪器 BL-420F生物信号处理系统(成都泰盟科技有限
公司) ，JH-2 型肌张力传感器(中国北京航天医学工程研究所产
品)。
1． 5 方法 家兔禁食 24 h 后，用木槌猛击兔头枕部致死。迅
速打开腹腔，取回肠立刻置于 4℃台式液中，剪成 2 ～ 3cm 的肠
段，以台式液洗净肠内容物，备用。取标本，两端对角穿线，将其
置于盛有 20ml 台式液的恒温平滑肌槽内，上端连于张力换能
器，下端固定于 L 形钩上，同时持续缓慢通气(95% O2 + 5%
CO2)。静息张力负荷为 1． 0g，平衡 1h，期间每 20min换液一次，
待肠收缩活动稳定后开始实验。对照组采用等容积的 DMSO。
1． 5． 1 芒柄花素对小肠平滑肌收缩活动的影响 实验分 4 组，
DMSO对照组及芒柄花素 20 、60、100μmol /L 组，观察其对家兔
小肠平滑肌自发收缩活动的影响。用区间测量法测量给药前 1
min及给药后第 5 min 的张力，以给药前的值为 100%，按公式
计算给药后小肠舒张百分率［6］。
舒张百分率( % ) =给药前平均张力 －给药后平均张力给药前平均张力
× 100%
1． 5． 2 芒柄花素对 Ach、氯化钡及组胺所致致肠痉挛性收缩的
影响 首先给予乙酰胆碱(0． 1μmol / L)刺激肠平滑肌收缩达
坪台，然后分别加入 20 、60、100μmol / L芒柄花素，观察药物对
平滑肌的影响。芒柄花素对氯化钡(10mg /L)或组胺(5 mg /L)
引起刺激收缩的影响步骤同乙酰胆碱。
1． 5． 3 芒柄花素对兔肠平滑肌内钙释放的影响 肠平滑肌标
本在无钙的台式液中平衡 20 min，待标本稳定后，加入 Ach
(10μmol / L) ，平滑肌细胞肌浆网内钙释放而引起肠平滑肌条
收缩。药物处理组标本在无钙的台式液中平衡 20 min，加入芒
柄花素(100μmol /L)孵育 10min后，再加入 10μmol /LAch。
1． 5． 4 芒柄花素对肠平滑肌 CaCl2 量效曲线的影响 CaCl2
能够引起无钙台式液中肠平滑肌收缩，其机制是细胞外 Ca2 +内
流。加入 100μmol /L 芒柄花素孵育后，每隔 5min 逐步加人
CaCl2(0． 1，0． 5，1． 0 ，1． 5，2． 0，2． 5 mmol /L)。同时设 DMSO
对照组，制作 CaCl2 的收缩曲线。
1． 5． 5 BayK8644 对芒柄花素作用的影响 待离体小肠平滑
肌标本收缩活动稳定后，分四组进行实验，芒柄花素组和
BayK8644 组，分别加入 60μmol /L 芒柄花素和 0． 5μmol /L
BayK8644 观察肠平滑肌的收缩活动;芒柄花素 + BayK8644 组，
预先加入芒柄花素 60μmol /L，10min 后加入 Bay K8644(0．
5μmol /L)观察小肠平滑肌自发收缩活动的变化;对照组采用
相等容积的 DMSO。
2 结果
2． 1 芒柄花素对家兔离体肠平滑肌收缩活动的影响 芒柄
花素能够剂量依赖性抑制小肠平滑肌自发收缩，使舒张作用增
强。对组胺、乙酰胆碱以及氯化钡所致肠平滑肌痉挛性收缩亦
均有一定的抑制作用，但强度不同。芒柄花素浓度为 100μmol /
L 时，对组胺痉挛性收缩的抑制百分率为 85． 29%;氯化钡次之，
抑制百分率为 81． 88%，而对乙酰胆碱引起痉挛性收缩抑制百
分率为 73． 16%左右;但对肠平滑肌自发收缩活动抑制作用较
弱，仅为 57． 84%，见表 1。
表 1 芒柄花素对兔离体小肠平滑肌的影响(珋x ± s，n = 8)
组别
剂量
(mg /L)
芒柄花素
20μmol /L 60μmol /L 100μmol /L
对照 20． 47 ± 8． 16 46． 78 ± 3． 72 62． 12 ± 7． 02
组胺 5 63． 96 ± 10． 67＊＊ 76． 51 ± 8． 28＊＊ 85． 13 ± 5． 51＊＊
氯化钡 10 35． 01 ± 10． 71＊＊ 57． 40 ± 13． 49＊＊ 77． 90 ± 12． 20＊＊
乙酰胆碱 0． 1μmol /L 52． 10 ± 11． 39＊＊ 64． 18 ± 7． 70＊＊ 70． 63 ± 8． 48*
与对照组比较 * P ＜0． 05，＊＊ P ＜0． 01(下同)
2． 2 芒柄花素对无钙台式液中乙酰胆碱收缩肠平滑肌效应的
影响 在无钙台式液中 Ach(0． 1μmol /L)能够引起肠平滑肌的
显著收缩，其收缩机制是细胞内钙的释放。100μmol / L 芒柄花
素孵育 10min后能够明显抑制 Ach 引起的肠平滑肌收缩，使肠
平滑肌张力由 1． 87 ± 0． 47g降为 0． 36 ± 0． 04g，提示高浓度的芒
柄花素能够显著抑制细胞内钙的释放，结果见表 2。
24 中药药理与临床 2013;29(2)
表 2 芒柄花素(100 mol /L)对无钙台式液中乙酰胆碱收缩肠平滑
肌效应的影响(珋x ± s，n = 6 ～ 8)
组别 张力(g)
无钙台式液对照 0． 57 ± 0． 04
乙酰胆碱 (0． 1μmol / L) 1． 87 ± 0． 47＊＊
芒柄花素(100μmol /L)+ 乙酰胆
碱(0． 1 mol / L)
0． 36 ± 0． 04△△
与对照组比较 ＊＊ P ＜ 0． 01;与乙酰胆碱组比较 △△ P ＜ 0． 01
2． 3 芒柄花素对肠平滑肌 CaCl2 量效曲线的影响 在无钙台
式液中 CaCl2(0． 1 ～ 2． 5 mmol / L)能够引起肠管平滑肌的收缩，
其收缩机制是细胞外钙内流。100μmol / L 的芒柄花素孵育 10
min后能明显抑制 CaCl2 引起的肠管平滑肌收缩，在 0． 5mmol /
L抑制作用最强，与对照组相比，其最大收缩效应由 1． 22 ± 0．
34g降至 0． 65 ± 0． 22g，见图 2。
图 2 100μmol /L芒柄花素对无钙台式液中钙收缩兔离体肠平滑肌的
影响( n = 6 ～ 8)
2． 4 芒柄花素对 Bay K8644 诱发肠平滑肌收缩作用的影响
Bay K8644 是 L型 Ca2 +通道开放剂，Bay K8644(0． 5μmol / L )
使小肠平滑肌自发收缩张力由(1． 03 ± 0． 03)g 增加到(1． 27 ±
0． 09)g;而芒柄花素(100μmol /L )预处理后再加入 Bay K8644
(0． 5μmol /L )收缩张力降为(0． 69 ± 0． 03)g，结果见表 3。
表 3 芒柄花素(100 mol /L)对 Bay K8644 诱发肠平滑肌收缩作用
的影响(珋x ± s，n = 8)
组别 张力(g)
空白对照 1． 03 ± 0． 03
芒柄花素(100μmol /L) 0． 72 ± 0． 04＊＊
BayK8644(0． 5μmol / L ) 1． 27 ± 0． 09＊＊
芒柄花素(100μmol /L)+
BayK8644(0． 5 mol / L )
0． 69 ± 0． 03＊＊△△
3 讨论
胃肠平滑肌的运动受自主神经系统和分布于胃肠管壁内
的壁内神经丛的支配，离体小肠平滑肌尽管失去了外来神经的
支配，但壁内神经丛仍然存在，因此在一定程度上离体小肠能
独立地进行胃肠功能的调控。小肠平滑肌自动节律收缩是由
位于纵形肌与环形之间的 Cajal间质细胞(Interstitial Cell of Ca-
jal，ICC)产生的慢波节律而启动的。ICC 产生起搏电流触发的
慢波电流属于 L2 Ca2 +型电流，因此平滑肌的舒缩活动依赖于
细胞内 Ca2 +浓度的变化，当胞浆内 Ca2 +升高到一定水平(1 ～
50μmol /L)时，与肌钙蛋白或肌调蛋白结合，触发平滑肌收
缩［7］。
肠平滑肌自发收缩活动的产生和传导易受神经递质、离子
环境、胃肠激素等生物活性物质和药物的影响，如乙酰胆碱
(Ach)、组胺及 BaCl2 等。乙酰胆碱(Ach)激动 M 胆碱受体，M
受体耦联 G蛋白(GP) ，使胞内第二信使三磷酸肌醇(IP3)和二
酰基甘油(DG)浓度上升，进而引起 Ca2 +释放和底物蛋白磷酸
化激发平滑肌产生收缩效应。组胺可与肠平滑肌上的 H1 型组
胺受体(H1-R)结合使钙通道开放，胞内游离 Ca2 +浓度升高，促
发胃肠道平滑肌收缩［8］。而 BaCl2 则是通过释放细胞内的
Ca2 +而引起肠管平滑肌痉挛［9］。本实验结果显示，芒柄花素能
剂量依赖性地抑制肠平滑肌的自发性收缩，对乙酰胆碱、组胺或
BaCl2 引起肠平滑肌痉挛性收缩亦具有不同程度的舒张，但对
痉挛收缩肠平滑肌的作用明显强于自发性收缩肠平滑肌。
因乙酰胆碱、组胺以及 BaCl2 引起肠平滑肌痉挛性收缩与
细胞内 Ca2 +增多有关，而肠平滑肌收缩所需的大部分 Ca2 +是在
动作电位发生时从细胞外进入肌细胞内的，小部分来源于肌浆
网，为此本研究进一步探讨了芒柄花素对外钙内流和内钙释放
的影响。
Ach通过 M受体激活受体调控型钙通道引起平滑肌收缩，
这种收缩既有细胞外 Ca2 +内流的作用，也有细胞内钙储库 Ca2 +
释放的参与。在无钙台式液中，Ach 诱导的肠平滑肌收缩主要
依赖细胞内钙的释放(依内钙性收缩)。芒柄花素使无钙台式
液中 Ach所致肠平滑肌收缩作用减弱，与对照组比较有显著性
差异(P ＜ 0． 01) ，表明芒柄花素抑制了 Ach 引其内钙释放。外
钙的流入需钙通道的开放，芒柄花素降低外钙的流入而使
CaCl2 量效曲线下移，因而芒柄花素可能有 Ca
2 +通道阻滞的作
用。因肠平滑肌中主要的钙通道是 L 型电压依赖性钙通道(L-
Ca2 +) ，实验中进一步使用 L 型钙通道的开放剂 Bay K8644，大
量的钙离子通过 L型钙通道进入平滑肌细胞内，使其自发收缩
力提高。而给予芒柄花素后，这种效应被明显抑制(P ＜ 0． 01) ，
由此推断芒柄花素可能阻断了 L 型钙通道，抑制 Bay K8644 引
起的外钙内流，从而抑制了小肠平滑肌的收缩。
综上所述，芒柄花素明显抑制了家兔离体小肠平滑肌自发
性及痉挛性收缩活动，其机制与抑制外钙内流及内钙释放有关。
此实验研究亦为芒柄花素用于肠痉挛性疾病治疗提供了实验
依据。
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34中药药理与临床 2013;29(2)
Influences of formononetin on contraction of small intestine smooth muscle of
rabbits in vitro and its mechanism
Gao Ya1，Shao Zhengwei1，Jia Xiaoning1，Wang Qiaoyun2
(1 Stomatology Insititute，2 Fundamental Insititute，Binzhou Medical University，Yantai 264003)
Aim:To observe the influences of Formononetin on the contraction of small intestine smooth muscle of rabbits in vitro and explore the
echanism．Methods:With the isothermal perfusion of smal1 intestine in vitro，the relaxant effects and related mechanism of Formononetin
were studied on the spontaneous contraction of small intestine and contraction induced by Ach，histamine and Bacl2 ． Results:Formononetin
(20 ～ 100μmol / L)reduced the contractivity of small intestine smooth muscle antonomic and agonized by acetylcholine 、BaCl2 and histamine
(P ＜ 0． 01)． Formononetin were found to inhibit the contraction induced bv acetychline in the Ca2 + -free Tyrode＇s solution and the CaCl2 cu-
mulative dose-response curves with a lower maximal response． And it can also depress the contraction agonized by Bay K8644 in smal1 intes-
tine smooth muscle． Conclusions :Formononetin inhibits the contraction of small intestine smooth muscle of rabbits in vitro． The mechanism
may be related to inhibits extracellular Ca2 + inflowing via cell membrane and intracellular Ca2 + releasing via sarcoplasmic reticulum．
Key words formononetin(芒柄花素) ;small intestines smooth muscle;calcium
丁香苷对免疫功能低下小鼠的免疫调节作用
宋媛媛1，周 越1，孙守兵1，宋晓琳1，金泰宇2，李 明1
(1 连云港市中医院药学部，连云港 222000;2 连云港市第二人民医院，连云港 222000)
摘 要 目的:研究丁香苷( Syringin) 对免疫低下小鼠免疫功能的调节作用。方法:采用环磷酰胺( cyclophosphamide，Cy)
50mg /kg腹腔给药，每天 1 次，连续 2 天，诱导小鼠免疫低下模型。应用碳廓清实验、溶血素生成实验、ConA及 LPS诱导小鼠脾淋巴
细胞增殖反应和迟发型变态反应( DTH) ，考察丁香苷对免疫低下小鼠非特异性免疫、体液免疫和细胞免疫的调节作用。结果:丁香
苷 15 和 30mg /kg可不同程度提高 Cy致免疫低下小鼠的廓清指数 K值和吞噬指数 α值，提高免疫低下小鼠巨噬细胞的吞噬功能;
丁香苷 15 和 30mg /kg不同程度提高免疫低下小鼠血清 IgM及脾细胞溶血素的生成;同时提高免疫低下小鼠的脾淋巴细胞增殖反
应;丁香苷 15 和 30mg /kg可明显促进免疫低下小鼠 DTH反应，提高 CD4 +、CD8 +细胞数，使 CD4 + /CD8 +细胞比值上升。结论:丁香
苷通过提高免疫低下小鼠非特异性免疫、体液免疫和细胞免疫，而增强免疫低下小鼠的免疫功能。
关键词 丁香苷;非特异性免疫;体液免疫;细胞免疫
丁香苷(Syringin)是从刺五加根茎中提取分离得到的一种
典型的酚苷类化合物，也是祖师麻、救必应、天女木兰、关东丁香
等中药的主要成分，是药材及其制剂含量测定的指标成分之
一。从其化学结构分析，丁香苷的苷元为芥子醇，其衍生物属于
苯丙醇类物质，具有抗氧化活性。前期实验证实丁香苷具有抗
炎镇痛作用，而炎症与免疫是一个问题的两个方面，存在着内
在的联系，全面考察一个药物的抗炎作用不能忽略其免疫学方
面的研究，本实验观察了丁香苷对免疫功能低下小鼠的免疫调
节作用。
1 材料与方法
1． 1 试验药物 丁香苷(Syringin)由中山博文医药科技有限公
司提供，纯度≥99． 8%，临用前用 0． 5%羧甲基纤维素钠(CMC-
Na)配成所需浓度的混悬液。
1． 2 动物 清洁级 ICR 小鼠，雌雄各半，体重(18 ± 2)g;SD
大鼠，雌雄各半，体重(180 ± 20)g，由扬州大学比较医学中心提
供，质量合格证号:SCXK(苏)2002-0009。动物于实验前适应环
境 1 周，自由摄食和饮水，自然光照，控制室温 20 ± 2℃。
1． 3 试剂 左旋咪唑(levamisole，LMS) ，南京白敬宇制药厂，
批号:20091201;环磷酰胺(cyclophosphamide，Cy) ，江苏恒瑞医
药股份有限公司，批号:20100608;二硝基氟苯(DNFB) ，上海生
物化学试剂公司分装;刀豆蛋白 A(ConA) ，脂多糖(LPS) ，溴化-
3 (4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑(MTT)均由美国 Sig-
ma 公司提供;RPMI 1640 培养液，Gibco公司;小牛血清，杭州四
季青生物工程有限公司，批号:20090802。
1． 4 仪器 Bio-Rad550 型酶标仪，日本 Bio-Rad 公司;24、96 孔
细胞培养板，美国 CORNING 公司;MODEL 550 台式冷冻离心
机，德国 Eppendorf公司;Napco二氧化碳培养箱，Jouang公司。
1． 5 方法
1． 5． 1 环磷酰胺诱导免疫低下小鼠碳廓清实验［1］ 小鼠 72
只，雌雄各半，随机分为 6 组，即正常组、模型组(环磷酰胺免疫
低下组)、丁香苷剂量组(7． 5、15、30 mg /kg)、阳性药组(左旋咪
唑 30mg /kg)。灌胃给药，每天 1 次，连续 7 天。正常组及模型
组给予相应体积的 0． 5% CMC-Na。第 3 天除正常组每只小鼠
腹腔注射环磷酰胺 50mg /kg，每天 1 次，连续 2 天。第 7 天每鼠
尾静脉注入离心后 20% 的印度墨汁(0． 10ml /10g) ，2min 和
44 中药药理与临床 2013;29(2)