全 文 ：表 2　处方优化的评分结果
处方
号
A因
素
B因
素
C因
素
pH值
下降值
pH值变化
得分 /分
含量下
降值
含量变化
得分 /分
颜色
得分 /分
是否析出
得分 /分
总分
/分
① 2 1 2 0.55 2 5.51 11 5 0 18
② 3 1 3 0.75 3 5.83 12 5 0 20
③ 1 3 2 0.48 2 0.96 2 5 0 9
④ 2 3 3 0.51 2 0.52 1 5 0 8
⑤ 1 1 1 0.40 2 3.87 8 5 0 15
⑥ 2 2 1 0.43 2 1.32 3 5 0 10
⑦ 1 2 3 0.30 1 3.09 6 5 0 12
⑧ 3 3 1 0.64 2 0.54 1 0 0 3
⑨ 3 2 2 0.76 3 2.87 4 5 0 12
　　由表 2可知 , 80℃高温放置 10d后 ⑧号药颜色
最浅(颜色相当于黄色 8号标准比色液),得 0分;其
余药液颜色均深于黄色 9号浅于黄色 10号标准比色
液 ,均得 5分 。① ～ ⑨号药 4 ℃保存 1个月均无沉淀
析出现象。 9种处方组合中得分数最低者(即最佳处
方组合)为⑧号处方。
2.2　方差分析和多重比较(见表 3、表 4)
由表 3可知 , 3个因素中主效因素应为 B因素
(P<0.05),这表明抗氧剂对该缓释剂的稳定性影响
最大;3个因素间均无交互效应(自由度 <2)。
由表 4可知 , 水平 1, 2和 1, 3之间差异显著
(P<0.05),水平 2, 3之间差异不显著(P>0.05),这
说明 Na2S2O3的用量不能少于 0.1%。
表 3　正交试验的方差分析结果
项目 因素 自由度 均方 F值 P值
A 2 0.111 0.036 0.966
主效应 B 2 91.444 29.393 0.033＊
C 2 14.778 4.750 0.174
A与 B 0 0 0 0
交互效应 B与 C 0 0 0 0
A与 C 0 0 0 0
　　注:同列同项数据肩标＊表示差异显著(P<0.05)。
表 4　B因素各水平间的多重比较
水平(I) 水平(J) 均数差值(I～ J) P值
差值的 95%可信区间
下限 上限
1
2
3
2 6.333 0.048＊ 0.137 12.530
3 11.000 0.017＊ 4.803 17.197
1 -6.333 0.048＊ -12.530 -0.137
3 4.667 0.083 -1.530 10.863
1 -11.000 0.017＊ -17.197 -4.803
2 -4.667 0.083 -10.863 1.530
　　注:同列数据肩标＊表示差异显著(P<0.05)。
3　小结
通过正交试验筛选 、优化处方 ,制备了 10%恩诺
沙星缓释注射液 , 初步确定了 3种附加剂烟酰胺 、
Na2S2O3和 EDTA-2Na的最佳添加比例 , 分别为
5%、0.2%和 0.01%。 (011)
收稿日期:2007-05-31
基金项目:河北省畜牧兽医局资助项目(2006-10)
作者简介:陈福星(1971-), 男 ,讲师 , 硕士.
通讯作者:钟秀会(1957-), 男 ,教授 , 博士 ,博士生导师.
地锦草对小鼠不同组织抗氧化作用的研究
陈福星 , 陈文英 , 宫新城 , 钟秀会
(河北农业大学 中兽医学院 , 河北 定州 073000)
中图分类号:S853.75 文献标识码:B 文章编号:1004-7034(2008)06-0091-02
　　地锦草系大戟科植物 ,为常用中药材 ,具有清热
解毒 、凉血止血 、利湿通乳等功效。近年来 ,人们对地
锦草的化学组成及其生物学活性的研究取得了重大
进展。李宝山等人测定了地锦草总黄酮(TFEH)在
体外对自由基的清除率和抑制率 。结果表明 , TFEH
具有很强的清除和抑制自由基的作用。本试验以昆
明系小鼠为研究对象 ,观察了地锦草对小鼠不同组织
的抗氧化作用。
1　材料与方法
1.1　试验材料
1.1.1　供试中草药　地锦草 ,购自河北省定州市中
药大药房 ,经鉴定为真品后备用 。
1.1.2　供试动物　昆明系小鼠 20只 , 30周龄 ,雌雄
各半 ,购自河北医科大学实验动物中心 ,常规饲养
3 d,观察无异常备用 。
1.1.3　主要试剂　超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂
盒和丙二醛(MDA)测定试剂盒(附标准蛋白),购自
南京建成生物工程研究所。
1.1.4　主要仪器　UV-9100型紫外分光光度计 ,购
自北京瑞利分析仪器公司
1.2　试验方法
1.2.1　分组及处理　将 20只小鼠随机分成 2组 ,即
对照组和试验组 , 每组 10只 。试验组每天灌服
0.5 mL地锦草水煎液 ,对照组每天灌服等量的生理
盐水 ,连续灌服 7 d;用眼科镊摘除眼球收集血液 ,分
91
　　　
　《黑龙江畜牧兽医》2008年第 6期
离血清;同时解剖小鼠 ,分别取肝脏 、脾脏 、心脏和肾
脏 。
1.2.2　组织匀浆的制备　取 200 mg左右的组织块
在冰冷的生理盐水中漂洗 ,除去血液 ,滤纸拭干;用移
液器量取 9倍于组织块的预冷匀浆介质(0.86%的氯
化钠溶液),再取总量的 2/3于烧杯中 ,用眼科剪剪
碎组织块;将剪碎的组织块倒入玻璃匀浆管中 ,再用
剩余的 1 /3匀浆介质冲洗残留在烧杯中的组织碎块 ,
一起倒入匀浆管中进行匀浆 ,匀浆 15 min;普通离心
机 3 500 r/min离心 15min,取上清液备用。
1.2.3　SOD和 MDA的测定 　严格按照 SOD和
MDA测定试剂盒的说明书进行测定。
2　结果
2.1　地锦草对小鼠各组织中 SOD活力的影响(见表 1)
表 1　地锦草对小鼠各组织中 SOD活力的影响
组别
血清
/(U·mL-1)
肝脏
/(U·mg-1)
脾脏
/(U·mg-1)
肾脏
/(U·mg-1)
心脏
/(U·mg-1)
对照组 32.68±18.67 92.60±16.72 19.47±16.78 24.48±16.52 20.52±7.52
试验组 48.77＊±12.34 110.40＊ ±13.35 36.97＊＊±11.42 46.03＊＊±10.22 39.83＊＊±13.28
　　注:同列数据肩标＊表示与对照组相比差异显著(P<0.05),
＊＊表示差异极显著(P<0.01)。
由表 1可知 ,给小鼠灌服地锦草水煎液后 ,小鼠
血清 、肝脏中 SOD的活性显著高于对照组 (P<
0.05);而脾脏 、肾脏 、心脏中 SOD的活性极显著高于
对照组(P<0.01)。
2.2　地锦草对小鼠各组织中 MDA含量的影响(见
表 2)
表 2　地锦草对小鼠各组织中 MDA含量的影响
组别
血清
/(nmol·mL-1)
肝脏
/(nmol· mg-1)
脾脏
/(nmol·mg-1)
肾脏
/(nmol·mg-1)
心脏
/(nmol·mg-1)
对照组 12.53±3.58 47.42±8.17 50.39±8.33 33.52±2.62 76.06±14.96
试验组 12.11±2.43 32.51＊＊±4.34 36.01＊＊±11.91 28.46＊ ±7.43 47.07＊＊±10.71
　　注:同列数据肩标＊表示与对照组相比差异显著(P<0.05);
＊＊表示差异极显著(P<0.01)。
由表 2可知 ,地锦草水煎液对小鼠血清中 MDA
含量没有影响 , 试验组与对照组相比差异不显著
(P>0.05);试验组小鼠肾脏中 MDA含量降低 ,与对
照组相比差异显著(P<0.05);试验组小鼠肝脏 、心
脏 、脾脏中 MDA含量降低 ,与对照组相比差异极显
著(P<0.01)。
3　讨论
3.1　地锦草对小鼠各组织中 SOD活性的影响
SOD对机体的氧化和抗氧化平衡起着重要的作
用 ,能清除超氧阴离子自由基(O2 -),保护细胞免受
损伤。O2 -是机体细胞在受到刺激后产生的含氧自
由基 ,由于其外层电子不配对 ,故其化学性质十分活
泼 ,极易与生物大分子发生氧化反应 ,改变或破坏生
物大分子结构的完整性而引起多种疾病 。因此 , SOD
活力的高低与衰老 、肿瘤 、炎症 、自身免疫疾病 、血液
疾病 、心血管疾病 、肾脏疾病 、消化系统疾病密切相
关 。如能找到对此类疾病进行治疗的理想的抗氧化
药物将非常有益。本试验结果表明 ,地锦草能提高小
鼠血清 、心脏 、肝脏 、脾脏 、肾脏中 SOD的活性 ,这说
明地锦草能增强 SOD对 O2 -的清除能力 ,保护细胞
免受损伤 。李宝山等人研究发现 ,地锦草在体外试验
中具有很强的清除和抑制自由基的作用 ,抗氧化的强
度为地锦草 >蓝盆花 >蕊芭 >广枣 >多叶棘豆 。曹
瑞珍等 [ 1]的研究发现 ,地锦草可以通过提高体内过
氧化氢酶的活性进一步将 SOD歧化 O2 -产生的
H2O2转变为 H2O和 O2 ,避免毒性更大的 OH-的产
生 ,减轻和阻断脂质过氧化作用的一级引发 ,保护机
体免受有机氢过氧化物的侵害 ,延缓细胞的衰老 ,从
而防止自由基引发的疾病。
3.2　地锦草对小鼠各组织中 MDA含量的影响
生物膜是生命系统中最容易发生脂质过氧化的
场所 ,当生物膜的脂质发生过氧化作用后 ,其流动性
必然发生改变 ,严重时其生物活性丧失 。脂质过氧化
作用的最后产物主要是 MDA,因此 MDA的含量常被
作为脂质过氧化的量度 。MDA能与蛋白质分子的氨
基发生作用导致多肽链的链内交联和链间交联;还能
与蛋白质的巯基反应 ,使修饰蛋白质和酶失去生物活
性 ,导致代谢异常 ,甚至死亡;同时也能引起膜蛋白共
价交联与聚合 ,使膜蛋白处于永久性的缔合状态 ,严
重限制了膜蛋白在膜平面上的运动性 ,导致膜功能的
异常。因此 ,测定 MDA含量非常有意义 ,其含量常
可以反应机体内脂质过氧化的程度 ,进而反应细胞损
伤的程度 。本试验结果表明 ,地锦草能抑制 MDA的
产生 ,尤其是在肝脏 、脾脏和心脏中明显低于对照组 ,
差异极显著(P<0.01),这说明地锦草具有抗氧化能
力 ,可使小鼠的细胞膜免受损伤。由此可见 ,如将地
锦草用于治疗由过氧化损伤引起的各种疾病 ,将有很
大的应用前景 。
参考文献:
[ 1] 　曹瑞珍 ,张国文 ,薛燕 ,等.地锦草提取物对小鼠血液过氧化氢
酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性的影响 [ J] .时珍国医国药 ,
2002, 13(12):724. (011)
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HeilongjiangAnimalScience　
　　　 andVeterinaryMedicine　　　№ 6 2008