全 文 ：中药新药与临床药理 2013年 5月第 24卷第 3期
收稿日期：2012-10-24
作者简介：张寒，女，硕士，讲师，研究方向：中药有效成分提取分离及药理药效的研究。Email：zhanghan11nini@163.com。
基金项目：陕西省教育厅自然科学专项基金（2010JK814）。
白蔹甲醇提取物对骨髓瘤细胞SP20增殖及凋亡的影响
张 寒 1，梁晓莉 2，贾 敏 1，孙艳平 1，汪兴军 1（1. 西安医学院，陕西 西安710021；2. 陕西步长制药有限公
司，陕西 咸阳 712000）
摘要：目的 研究白蔹甲醇提取物不同极性萃取部位对骨髓瘤细胞 SP20增殖及凋亡的影响。方法 体外培养
骨髓瘤 SP20细胞，光学显微镜观察加入白蔹甲醇提取物不同萃取部位后的细胞形态的变化；MTT法检测白蔹
甲醇提取物不同极性萃取部位对骨髓瘤细胞增殖的影响。结果 光学显微镜观察到给药后骨髓瘤 SP20细胞出
现典型的细胞凋亡形态改变。药物作用 48 h后，5-氟尿嘧啶组、氯仿组、乙醚组、乙酸乙酯组对细胞增殖均
有抑制作用，与溶剂空白组比较，差异有统计学意义（P < 0.05，P < 0.01）；正丁醇组抑制率最小，与溶剂空白
组比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。白蔹甲醇提取物不同极性萃取部位对骨髓瘤细胞存活的抑制率，从大
到小依次是：乙酸乙酯组 > 乙醚组 > 氯仿组。结论 白蔹甲醇提取物对体外培养的骨髓瘤细胞的生长有明显
的抑制作用，并促其凋亡。
关键词：白蔹甲醇提取物；骨髓瘤细胞；抗肿瘤
中图分类号：R285.5文献标志码：A 文章编号：1003-9783（2013）03-0239-03
doi：10.3969/j.issn.1003-9783.2013.03.007
Influence of Methanol Extract of Radix Ampelopsis on Proliferation of Myeloma Cell Line SP20
ZHANG Han1，LIANG Xiaoli2，JIA Min1，SUN Yanping1，WANG Xingjun1（1. Xian Medical College，Xian 710021
Shaanxi，China；2. Buchang Pharmaceutical Co. Ltd. of Shaanxi，Xianyang 712000 Shaanxi，China）
Abstract：Objective To study the influence of methanol extract of Radix Ampelopsis with different polarity on
myeloma cell line SP20.Methods After culturing myeloma cells SP20 in vitro，the cell morphological changes were
observedunderopticalmicroscope，andinfluenceofmethanolextractionpartsofRadixAmpelopsiswithdifferentpolarity
on SP20 myeloma cells proliferation was detected by MTT assay.Results After co-cultured with the different polar
extraction parts of Radix Ampelopsis for 48 hours，SP20 cells showed apoptotic morphological changes under optical
microscope. Chloroform，5-fluorouracil，ethyl ether and ethyl acetate part had inhibition on the proliferation of SP20
（P < 0.05，P < 0.01），and normal butanol part had the lowest inhibition ratio（P > 0.05）compared with he solvent
blank group. Inhibition ratio of ethyl acetate，ethyl ether and chloroform parts of Radix Ampelopsis was in decreasing
sequence on the survival of SP20.Conclusion Radix Ampelopsis methanol extract can significantly inhibit the growth
of SP20 myeloma cells and promote the apoptosis of SP20.
Keywords：Methanol extract of Radix Ampelopsis；Myeloma cells；Anti-tumor
白蔹为葡萄科蛇葡萄属植物白蔹（Ampelopsis
japonica（Thumb.） Makino）的干燥块根，有清热解毒、
消痈散结、敛疮生肌等功效，在临床上用于痈疽发
背、疔疮、瘰疬、烧烫伤等症的治疗。现代药理研
究表明该药具有抗菌、免疫调节、抑制毛发生长及
抗肿瘤等作用[1]。目前有关白蔹的研究多集中在化学
成分、抗菌及抗溃疡等方面[3-6]，而其在抗肿瘤活性
方面的相关研究很少。Lee等[2-3]发现白蔹的甲醇提取
物及从中提取纯化的地肤子皂苷（momordin）对激活
蛋白（AP-1）活性及肿瘤细胞的增生有抑制作用，白
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Traditional Chinese Drug Research ＆ Clinical Pharmacology，2013 May，Vol． 24 No． 3
蔹的甲醇提取物和momordin对人肿瘤细胞有细胞毒
作用。但是白蔹甲醇提取物对骨髓瘤细胞的抑制作
用，尚未见相关报道。因此，本文观察白蔹甲醇提
取物各部位对骨髓瘤细胞SP20细胞株生长及其抑制
作用的影响，筛选白蔹抗骨髓瘤细胞的活性部位，
以期为进一步开发和拓宽白蔹的临床应用提供科学
依据。
1 材料与方法
1.1 细胞株 骨髓瘤细胞株SP20由第四军医大学动
物中心提供，37℃，5 %CO2培养箱培养。
1.2 药品及试剂 白蔹，购自西安万寿路药材市场，
经鉴定为葡萄科蛇葡萄属植物白蔹（Ampelopsis
japonica（Thumb.） Makino）的干燥块根。5-氟尿嘧啶，
批号：20120617，上海瀚鸿化工科技有限公司，4℃
冷藏备用；RPMI-1640培养粉，GIBCO公司，使用
时加入 2 g NaHCO3、1×105U·L-1青霉素、1×105
U·L-1链霉素、三蒸水配成体积为 1 L 的溶液，调
pH=7.2，用0.22μm微孔滤器过滤除菌，临用前加入
5 ％小牛血清；小牛血清，杭州四季青生物材料研究
所，56℃水浴30 min灭活，于20℃保存备用；噻唑
蓝（MTT），美国Sigma公司，临用前用PBS平衡盐溶
液配成5 g·L-1溶液，用0.22μm微孔滤器过滤除菌，
于4℃避光保存。
1.3 仪器 301型CO2培养箱，Thermo electron公司；
超净工作台，苏州净化设备；全自动高压灭菌锅，
日本SANYO公司；96孔培养板，美国康宁Costar公
司；精密移液器，吉尔森公司；IX71倒置荧光显微
镜，奥林巴斯公司；DG3022A 型酶联免疫检测仪，
国营华东电子管厂；TGL-16GA型台式高速离心机，
上海安亭科学仪器厂。
1.4 实验方法
1.4.1 白蔹提取物的制备 称取1736.0 g干燥白蔹饮
片，研磨成粗颗粒，加入8倍量的甲醇进行加热回
流提取2次，每次1 h，过滤并合并2次提取液，浓
缩得浸膏。将浸膏悬浮于水中，根据极性依次用氯
仿、乙醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分别得到以上4
个部位，将各部位溶剂挥干后称重，正丁醇部位
10.8 g（得率0.6 %），乙酸乙酯部位3.6 g（得率 0.21
%），乙醚部位2.1 g（得率0.12 %），氯仿部位 1.8 g
（得率 0.11 %）。将各部位提取物混悬于蒸馏水中，
加吐温 80助溶后，定容于500 mL的容量瓶中。精
密量取5 mL上述各部位提取液，临用前用蒸馏水稀
释到100 mL备用。
1.4.2 骨髓瘤细胞培养 将骨髓瘤细胞培养在含10 %
小牛血清、青霉素 100 U·mL-1、链霉素 120 U·mL-1
的 RPMI-1640 中。放入37℃、5 %CO2培养箱常规
培养。1～2 d 传代1 次。轻轻倒掉废液，直接加培
养液两滴管，进行反复多次吹打。分装在每个无菌
培养瓶中进行常规培养。所有实验均在细胞处于对
数生长时期进行。
1.4.3 MTT法测定骨髓瘤细胞 SP20 的增殖 无菌条
件下收集处于对数生长期的骨髓瘤 SP20 细胞，于
1000 r·min-1离心10 min，收集沉淀细胞，用1640培
养液配制成 1×105个·mL-1细胞浓度，直接接种于
96孔培养板中，每孔50μL。氯仿组加入1.4.1项下
的终浓度为 0.18 mg·mL-1的氯仿萃取药液，乙醚组
加入终浓度为 0.21 mg·mL-1的乙醚萃取药液，乙酸
乙酯组加入终浓度为 0.36 mg·mL-1的乙酸乙酯萃取
药液，正丁醇组加入终浓度为 1.08 mg·mL-1的正丁
醇萃取药液，以上4 组中加入的萃取部位的浓度相
当于原药材0.1736 g·mL-1的浓度；溶剂空白组加入
与4种药液等浓度的助溶剂吐温-80（终浓度为0.02
%）；正常对照组加入1640培养液，阳性对照组加入
终浓度为250μg·mL-1的 5-氟尿嘧啶。以上各组药
物每孔各加入100μL，每组8复孔；37℃、5 %CO2
培养箱培养。分别作用24，48 h，于每次结束实验
前 4 h 每孔加入 5 mg· L-1的 MTT，37℃孵育 4 h
后，取出吸弃上清液后，加入DMSO150μL，轻微震
荡使结晶溶解后，以酶标仪490 nm波长处测定各孔
吸光度（A）值，实验重复 3 次，按下列公式计算细胞
生长抑制率[7]。抑制率=（溶剂空白组A值－实验组A
值）/溶剂空白组A值×100 %。
1.5 统计学处理方法 采用SPSS 11.5 软件进行统计
学处理，实验结果以 x± s表示，采用单因素方差分
析法。
2 结果
2.1 荧光显微镜下观察骨髓瘤 SP20 细胞生长情况
结果见图1。正常对照组骨髓瘤SP20细胞形态规则，
排列紧密，细胞核完好清晰，染色质均匀分布于细
胞核内。而5-氟尿嘧啶组、乙醚组、乙酸乙酯组骨
髓瘤 SP20 细胞间隙增大，出现凋亡的典型形态改
变，核固缩，染色质边集于核膜下，形成新月形小体，
核膜消失或突起呈小泡样，核质浓缩，发生碎裂。
2.2 MTT 法测定骨髓瘤细胞增殖的变化 见表 1。
药物作用24 h 后，5-氟尿嘧啶组对细胞增殖已产生
抑制作用，抑制率达25.5 %，与溶剂空白组比较，差
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中药新药与临床药理 2013年 5月第 24卷第 3期
异有统计学意义（P < 0.01）。随着作用时间延长，各
组增殖抑制率升高。48 h后， 5-氟尿嘧啶组、氯仿
组、乙醚组、乙酸乙酯组对细胞增殖均有抑制，其
中5-氟尿嘧啶组、乙醚组和乙酸乙酯组与溶剂空白
组比较，差异有统计学意义（P < 0.01）；氯仿组与溶
剂空白组比较，差异有统计学意义（P < 0.05）。正丁
醇组抑制率最小，与溶剂空白组比较，差异无统计
学意义（P > 0.05）。白蔹甲醇提取物的不同极性萃取
部位的抑制率从大到小依次是：乙酸乙酯组>乙醚
组>氯仿组。
表 1 白蔹不同极性部位对骨髓瘤细胞增殖的抑制作用（x± s）
Table 1 The inhibition of different polarity fraction of extract from
Ampelopsis on myeloma cell proliferation
注：与溶剂空白组比较，△P < 0.05，△△P < 0.01。
3 讨论
多发性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）是骨髓内
浆细胞异常增生的一种血液系统恶性肿瘤。随着人
口的老龄化，MM 的发病有逐年递增的趋势，由于
其发病机制还不清楚且缺乏有效的治疗手段，MM
的治疗反应较差。迄今为止，该病仍被视为不可治
愈的疾病。故寻找新的药物和治疗方法就显得尤为
必要[8]。中药应用于治疗肿瘤，无论是在减轻临床症
状，提高生存质量，防止复发转移，延长生存期，
还是在与放化疗配合，增效减毒等方面都显示出很
好的治疗效果和应用前景[9-10]。
现代研究发现白蔹有抗肿瘤作用[9]，但其作用的
物质基础尚不明确。为了进一步确定其抗肿瘤的有
效部位及物质基础，本文研究了白蔹甲醇提取物不
同极性萃取部位对骨髓瘤SP20细胞株生长及其抑制
作用的影响。在本研究中，白蔹甲醇提取物的乙醚
萃取物和乙酸乙酯萃取物对体外培养的SP20骨髓瘤
细胞的生长有明显的抑制作用，这与文献[1，9]记载的
白蔹抗肿瘤的活性部位结果一致。通过显微镜观察
发现，骨髓瘤细胞SP20出现凋亡的典型形态改变，
核固缩，染色质边集于核膜下，形成新月形小体，
核膜消失或突起呈小泡样，核质浓缩，发生碎裂。
通过MTT实验结果发现，白蔹4种有机溶剂萃取物
中的乙醚萃取物和乙酸乙酯萃取物对SP20骨髓瘤细
胞增殖有显著的抑制作用，其对骨髓瘤细胞存活的
抑制率，从大到小依次是：乙酸乙酯组 > 乙醚组 >
氯仿组，提示白蔹甲醇提取物对体外培养的骨髓
瘤细胞的生长有明显的抑制作用，并促其凋亡，
值得进一步研究。
参考文献：
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（编辑：邓响潮）
正常对照组 溶剂空白组 5-氟尿嘧啶组 氯仿组 乙醚组 乙酸乙酯组 正丁醇组
图 1 48 h各组骨髓瘤 SP20细胞生长形态（×400）
Figure 1 The cell morphology in all groups after culturing for 48 h
组别
正常对照组
溶剂空白组
5-氟尿嘧啶组
白蔹的氯仿提取部位组
白蔹的乙醚提取部位组
白蔹的乙酸乙酯提取部位组
白蔹的正丁醇提取部位组
药物浓度
/mg·mL-1
-
-
0.25
0.18
0.21
0.36
1.08
A
0.154±0.025
0.151±0.028
0.115±0.020
0.141±0.037
0.157±0.030
0.153±0.023
0.157±0.027
抑制率/%
_
_
25.5△△
_
_
_
_
A
0.189±0.013
0.175±0.016
0.117±0.026△△
0.143±0.029△
0.137±0.030△△
0.135±0.030△△
0.147±0.038
抑制率/%
-
-
38.1
18.3
21.7
22.6
-
24 h 48 h
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