全 文 ：浙 江 农 业 大 学 学 报
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长叶车前花叶病毒 ( R M V ) 单克隆抗体
的研制及初步应用
张永平 李德葆 李 一光
摘 要
植物病毒病近年来越来越严重地影响农业生产 , 因而对病毒病的诊断 、 鉴定 、 防治等工
作显得格外重要 。 然而病毒种类繁多 , 株系复杂 , 分类较乱 , 给植物病毒检疫 , 田间诊断 ,
室内鉴定 , 株系划分等带来许多困难 。 迫切需要一些精确稳定鉴定病毒 , 分析株系的方法 。
免疫学技术是病毒鉴定的重要手段之一 普通抗体由于含有多种抗原决定簇的抗体 , 特异性
差 , 难以区分株系 。 单克隆抗体只针对一个抗原决定簇 , 特异性极高 , 能精确鉴别病毒株系
间的细微差异和株系间的亲缘关系 。 分析病毒的共同抗原决定簇和独特型决定簇 , 研究病毒
表面结构及免疫学等方面的特征 , 单克隆抗体能使抗体制剂统一化 、 试剂化 , 为病毒的多项
研究提供材料 。 研制长叶车前花叶病毒 ( R M V ) 单克隆抗体 , 无论对该病毒的鉴定 、 诊断 、
防治等生产实际问题 , 还是对植物病毒的基础理论研究 , 均具有现实意义 。 到目前为止 , 国
内外尚未见有关 R M V 单克隆抗体的报道 , 本研究是首次报道 。
应用细胞杂交技术 , 融合用长叶车前花叶病毒杭州分离株 ( R M V h a ) 和 烟草花叶病毒
普通株 ( T M V c ) 混合免疫的 B al b/ 。 小鼠脾细胞和 S P Z0/ 一 A g 14 小 鼠 骨 髓 瘤 细 胞 , 经
R M V ha
、
T M V
c和 T M V北京番茄株 ( T M V b e一 )t 混合筛选测定 ,成功地建立了 R m l 、 R m Z、
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、
R m 4和 R m s共 5 株能稳定分泌特异性单克隆抗体 ( M c A b ) 的杂交瘤细胞株 。 体外连
续传代培养三个半月 , 液氮冻存 2 个月复苏后 , 分泌抗体稳定 。 该杂交瘤细胞染色体数目平
均为 97 条。 再经 H A T培养基 , 生长良好 , 在 8一氮鸟嗦吟培养基中迅速死亡 。 证明该杂交
瘤细胞具有两种亲本细胞的特征 , 抗体基 因和次黄嚓吟鸟喋吟磷酸核糖转移酶 ( H G P R T )
基因功能完整 。 将 5株细胞分别种入 B al b / c 小鼠腹腔 , 制备了腹水单克隆抗体 , 其中以细
胞株 R m l腹水抗体的效价为最高 , E LI S A达 1 : 2 5 6 0 0 0 , 琼脂双扩散达 1 : 12 8 。 R m l 属于小
鼠 Ig G , , 其余 4 株均属于 I g G 3 。
R m l明显中和 R M V h a 的侵染活性 , 中和 滴度为 10 “ 5 。 兔抗 R M V h a 抗血清明显阻断 R m l
的反应 , R m l却不能阻断兔抗血清的反应 。 经与 15 个不同 RM V和 T M V毒株特异性测定 , 将
5株单克隆抗体分为 A 、 B 、 C 三组 。 A组能与其中 6 个毒株起反应 , B 组与 9个毒株起反
应 , C 组与 6 个毒株起反应 。 A 、 B 、 C三组单克隆抗体将 15 个毒株分为 6 个血清型 ( S e ~
or t” “ ) 。 血清型 1 与 A 、 B 、 C 三组均起反应 , 血清型 2 与 B 、 C组起反应 , 血清 型 3 仅
与 C组起反应 , 血清型 4 仅与 A 组反应 , 血清型 5 仅与 B组起反应 , 血清型 6 与 A 、 B 、 C
三组均不起反应 。 兔抗 RM V ha 抗血清与 15 个毒株均有不同程度的反应 。 应用这些单克隆抗
本文于 1 9 8 6年 7月 10 日收到
浙 江 农 业 大 学 学 报 12 卷
体将几种普通抗血清不能区分的毒株区另lJ开 , 对 R M V和 T M V株系鉴别起重要作用 。 R m l 在
免疫电镜中能明显吸附 R M V h a 颗粒 , 但是装饰病毒粒子的效果很差 。 实验发现小鼠 I g G : 卜
( R m l ) 在 p H 6 . 0一 10 . 0范围内不与金黄色葡葡球菌 A 蛋白 ( S p A ) 结合 , 烤 G 。 ( R m 4 ) 在
同样条件下与 S p A结合力很强 。 这在应用 S p A 检测小鼠单克隆抗体实验中具有重要意义 。 本
文论述了所获得的 5 株单克隆抗体的稳定性 , 特异性以及在植物病毒诊断 、 鉴定 、 分类方面
的应用价值 ; 讨论了单克隆抗体在免疫电镜中应用的可行性以及存在问题 。
今后继续建立 5 侧: 以上该病毒的杂交瘤细胞株 , 进一步研究病毒表面的抗原结构 , 寻找
更多的抗原决定簇 , 进行病毒血清型的深入研究 。 逐渐收集全国不同地区 , 不 同 寄 主 上的
R M V 病毒 , 同时借助生物鉴定等其它手段 , 进行该病毒的株系研究 , 分布范围及寄主范围
的研究 。 因为该病毒国内尚未划分株系 , 甚至与 T M V 还混淆不清。 普查杭州市郊十字花科
蔬菜和杂草上的 R M V 分布 , 为控制蔬菜 R M V 病毒病提供依据 , 以便制定有效控制毒源的
策略 .
附表 单克隆杭体特异性分析
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4 燕刁 张永平等 长叶车前花叶病毒 ( R M Y )单克隆抗体的研制及初步应用 碑 5 3
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