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榴莲壳内皮果胶多糖和黄酮对重金属吸附作用的研究



全 文 :129
王晓波,车海萍,陈海珍,刘冬英,王 梅
(广东药学院公共卫生学院,广东广州 510310)
摘 要:目的:从榴莲壳内皮中提取果胶多糖和黄酮,并评价果胶多糖和黄酮对重金属的吸附作用。方法:以榴莲壳内
皮为原料,采取水提乙醇沉淀法从榴莲壳内皮中提取高酯果胶及黄酮,采用碱化法将高酯果胶转化为低酯果胶,并用
原子吸收光谱法测定高酯果胶、低酯果胶及黄酮对重金属的吸附率,从而评价其吸附能力。结果:在模拟胃液及肠液
条件下,高酯果胶、低酯果胶和黄酮对铅的吸附能力:高酯果胶 >低酯果胶 >黄酮,对镉的吸附能力:低酯果胶 >高酯
果胶 >黄酮;对钙、铁及锌离子均无吸附能力。结论:榴莲壳内皮中提取物果胶及黄酮对重金属元素有一定的选择性
吸附作用,具有进一步研究和开发价值。
关键词:榴莲壳内皮,果胶多糖,黄酮,吸附作用
Study on pectin polysaccharides and flavonoids extraction of
durian inner shell on adsorption capacity of heavy metals
WANG Xiao-bo,CHE Hai-ping,CHEN Hai-zhen,LIU Dong-ying,WANG Mei
(School of Public Health,Guangdong Pharmacy College,Guangzhou 510310,China)
Abstract:Objective:Study on pectin polysaccharides and flavonoids from durian inner shell and the adsorption
capacity of the heavy metal. Methods:The durian inner shell as raw materials to ethanol precipitation,water
extraction were directly extracted,high ester pectin and flavonoids,using alkaline method into the high - ester
pectin with low ester pectin,to evaluate their adsorption capacity by atomic absorption spectrometry.Results:In
simulated gastric and intestinal fluid conditions,the high ester pectin,low ester pectin and flavonoids adsorption
capacity of Pb2 +:high ester pectin > low ester pectin > flavonoids,the adsorption capacity of Cd2 +:low ester pectin
> high ester pectin > flavonoids.There was no significant influence on Fe2 +,Zn2 +,Ca2 + absorption. Conclusion:The
pectin and flavonoids extraction from durian inner shell had a certain heavy metal adsorption capacity,with
research and development value.
Key words:durian inner shell;pectin polysaccharides;flavonoids;adsorption capacity
中图分类号:TS255.1 文献标识码:A 文 章 编 号:1002-0306(2011)12-0129-04
收稿日期:2010-11-24
作者简介:王晓波(1961-) ,硕士,教授,研究方向:食物营养与安全。
近年来,重金属污染日趋严重,严重危害人们的
身体健康。铅和镉是常见的环境重金属污染物,在
人体内有蓄积作用,具有多器官毒性[1]。由于铅、镉
在体内的蓄积时间长,排泄慢,所以驱铅、镉是预防
及治疗重金属中毒的主要手段,研制开发安全有效
的驱铅、镉的食品添加剂,预防其对人体的损害,是
国内外目前研究的重点课题之一。果胶和黄酮作为
植物中重要的化学物质,具有螯合重金属的作用[2],
随着功能性多糖的开发,果胶不仅可以开发为水溶
性膳食纤维,还被应用为去除环境中重金属污染的
添加剂,越来越受到各个行业的关注。榴莲壳作为
一种农业废弃物,国内近年来已尝试利用其作为宝
贵的材料来源,国外近年发现可以用榴莲壳制备成
本低的炭吸附剂,从水溶液中去除酸性染料[3]。本研
究旨在以榴莲壳内皮干粉为原料提取果胶及黄酮,
通过模拟胃、肠实验研究榴莲壳内皮中提取的果胶
及黄酮对混合溶液中重金属的吸附作用,为榴莲壳
深度开发利用提供一定理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
榴莲 购于广州市果品市场,取榴莲壳内皮,放
入鼓风电热恒温干燥箱 70℃干燥至恒重,过 60 目
筛,装密封袋备用;铁、锌、钙、镉、铅标准储备液(GSB
G 62025-90(3001) 购自国家钢铁材料测试中心钢
铁研究总院;盐酸、氢氧化钠、氯化钠、亚硝酸钠、硝
DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2011.12.157
130
酸铝、浓硫酸、苯酚、无水乙醇等 均为国产分析纯;
实验用水 为购买的怡宝蒸馏水。
AA-6200 原子吸收分光光度计 日本岛津公
司;Z-2000 型石墨原子吸收分光光度计 日本株式
会日立高新技术那河事业所;MP120-2 电子分析天
平 上海天平仪器厂;DL-228 多功能食物搅拌机
广州隆特电子有限公司;KA-1000 离心机 上海安
亭科学仪器厂;SH2-D(Ⅲ)循环水式真空泵 巩义
市予华仪器责任有限公司;RE-52AA 旋转蒸发器
上海亚荣生化仪器厂;722 型分光光度计 上海棱光
技术有限公司;101A-1ET电热恒温鼓风干燥箱 上
海实验仪器厂有限公司。
1.2 实验方法
1.2.1 果胶多糖及黄酮提取
1.2.1.1 高酯果胶的提取 参照文献[4-5]:榴莲壳
干粉→酸提→过滤→收集滤液→减压浓缩至胶状→醇沉→洗
涤沉淀→干燥→高酯果胶
1.2.1.2 低酯果胶的提取 参照文献[6]:榴莲壳干粉
→酸提→过滤→收集滤液→减压浓缩至胶状→醇沉→洗涤沉
淀→高酯果胶溶液→碱化→低酯果胶
1.2.1.3 黄酮的提取 参照文献[7]:榴莲壳干粉→提
取→离心→收集上清液→沉淀物复提一次→离心→收集上清
液→合并上清液→减压浓缩至膏状→干燥→粗黄酮
1.2.2 高酯果胶、低酯果胶及黄酮对金属离子吸附能
力 根据文献[8]的方法,选择人体胃液(pH = 1.2)
和人体肠液(pH =7.5)的 pH进行体外模拟实验。分
别用怡宝蒸馏水配制 Pb2 + 1mg /mL、Cd2 + 1mg /mL、
Fe2 + 10mg /mL、Zn2 + 10mg /mL、Ca2 + 20mg /mL 标准
液,取标准液用怡宝蒸馏水配制成(Pb2 + 1μg /mL、
Cd2 + 0.1μg /mL、Fe2 + 20μg /mL、Zn2 + 20μg /mL、Ca2 +
25μg /mL)浓度的金属离子混合液。分别取 1mL 金
属混合液置于六个 25mL 试管中,分别加入 0.00、
0.4、0.8、1.2、1.6、2.0mg /mL 高酯果胶、低酯果胶及黄
酮水溶液,调整 pH 为模拟胃液(1.2 ± 0.1)和肠液
(7.5 ± 0.1) ,定容,放入 37℃恒温水浴箱,搅拌吸附
4h,0.45μm聚乙烯滤膜过滤,滤液于原子吸收分光光
度计测定 Pb2 +、Cd2 +、Fe2 +、Zn2 +、Ca2 +的吸光度,根据
其标准曲线计算模拟胃液和模拟肠液条件下榴莲壳
内皮提取物(高酯果胶、低酯果胶和黄酮)对金属的
吸附率[9]:
吸附率(%)=(C0-C)/C0 × 100%
式中,C0 -未加样品溶液中各离子的浓度;C-加
样后溶液中各离子的浓度。
2 结果与分析
2.1 对 Zn2 +、Fe2 +、Ca2 +的吸附能力
检测从榴莲壳内皮提取的低酯、高酯果胶及黄
酮中的钙、铁、锌、铅及镉含量,结果显示高酯及低酯
果胶中含有钙,含量为 0.5mg /g,其他元素未检测到。
在模拟人体胃液及肠液 pH的条件下,未加榴莲
壳内皮提取物的空白管 Zn2 +、Fe2 +、Ca2 +吸光度值及
榴莲壳内皮提取物采用五个不同的浓度(0.4、0.8、
1.2、1.6、2.0mg /mL)每个浓度测定三次,榴莲壳内皮
提取物对 Zn2 +、Fe2 +、Ca2 +的吸附能力,结果见表 1、
表 2。
表 1 模拟胃液榴莲壳内皮提取物
对 Fe2 +、Zn2 +、Ca2 +的吸附能力
加入样品
含量
(mg /mL)
Zn2 +吸光度 Fe2 +吸光度 Ca2 +吸光度
空白 0.058 ± 0.0012 0.055 ± 0.0010 0.111 ± 0.0009
低酯果胶
0.4 0.289 ± 0.0026 0.053 ± 0.0017 0.169* ± 0.0035
0.8 0.288 ± 0.0043 0.054 ± 0.0006 0.226* ± 0.0070
1.2 0.288 ± 0.0026 0.054 ± 0.0010 0.284* ± 0.0118
1.6 0.286 ± 0.0023 0.056 ± 0.0012 0.334* ± 0.0159
2.0 0.286 ± 0.0031 0.057 ± 0.0010 0.396* ± 0.0202
高酯果胶
0.4 0.288 ± 0.0026 0.053 ± 0.0029 0.178* ± 0.0015
0.8 0.286 ± 0.0021 0.054 ± 0.0015 0.236* ± 0.0030
1.2 0.285 ± 0.0026 0.054 ± 0.0006 0.302* ± 0.0044
1.6 0.285 ± 0.0026 0.055 ± 0.0012 0.363* ± 0.0040
2.0 0.287 ± 0.0026 0.057 ± 0.0006 0.419* ± 0.0040
黄酮
0.4 0.284 ± 0.0042 0.053 ± 0.0015 0.115 ± 0.0021
0.8 0.286 ± 0.0047 0.053 ± 0.0026 0.112 ± 0.0023
1.2 0.282 ± 0.0034 0.053 ± 0.0012 0.119 ± 0.0020
1.6 0.282 ± 0.0044 0.054 ± 0.0017 0.114 ± 0.0025
2.0 0.286 ± 0.0035 0.056 ± 0.0017 0.114 ± 0.0021
注:* 表示差异显著;表 2 同。
实验结果表明,在模拟胃液条件下,空白对照管
中锌、铁、钙的吸光度值分别为 0.058、0.055 和 0.111,
加入低酯、高酯果胶及黄酮样品后,混合金属锌、铁
吸光度值无明显差异,结果表明,低酯、高酯果胶及
黄酮在胃液条件下对 Fe2 +、Zn2 +无吸附作用;而低酯、
高酯果胶使混合金属中钙离子增高,说明在模拟胃
液条件下果胶中的钙有部分溶出进入溶液中。
表 2 模拟肠液模拟榴莲壳内皮提取物
对 Fe2 +、Zn2 +、Ca2 +的吸附能力
加入样品
含量
(mg /mL)
Zn2 +吸光度 Fe2 +吸光度 Ca2 +吸光度
空白 0.285 ± 0.0011 0.055 ± 0.0010 0.028 ± 0.0010
低酯
0.4 0.294 ± 0.0026 0.058 ± 0.001 0.035* ± 0.0031
0.8 0.293 ± 0.0043 0.059 ± 0.0006 0.047* ± 0.0069
1.2 0.293 ± 0.0026 0.062 ± 0.0010 0.055* ± 0.0109
1.6 0.291 ± 0.0023 0.063 ± 0.0012 0.065* ± 0.0156
2.0 0.292 ± 0.0031 0.061 ± 0.0010 0.079* ± 0.0210
高酯
0.4 0.303 ± 0.0026 0.057 ± 0.0029 0.036* ± 0.0015
0.8 0.301 ± 0.0021 0.060 ± 0.0015 0.045* ± 0.0025
1.2 0.300 ± 0.0026 0.060 ± 0.0006 0.052* ± 0.0041
1.6 0.300 ± 0.0026 0.059 ± 0.0012 0.061* ± 0.0040
2.0 0.302 ± 0.0026 0.062 ± 0.0006 0.068* ± 0.0038
黄酮
0.4 0.299 ± 0.0042 0.058 ± 0.0015 0.029 ± 0.0021
0.8 0.301 ± 0.0047 0.058 ± 0.0026 0.033 ± 0.0023
1.2 0.297 ± 0.0034 0.057 ± 0.0012 0.031 ± 0.0020
1.6 0.297 ± 0.0045 0.057 ± 0.0021 0.029 ± 0.0025
2.0 0.301 ± 0.0035 0.058 ± 0.0016 0.029 ± 0.0021
实验结果表明,在模拟肠液条件下,空白对照管
中锌、铁、钙的吸光度值分别为 0.285、0.055、0.028,加
入低酯、高酯果胶及黄酮样品后,不同浓度中锌、铁
131
的吸光度无明显差异,但是混合溶液中钙离子浓度
增高,说明低酯、高酯果胶在肠液条件下对锌、铁无
吸附作用,同时可以增加果胶中钙的溶出。
2.2 对重金属元素 Pb2 +、Cd2 +的吸附能力
在模拟人体胃液及肠液 pH的条件下,采用五个
不同的样品浓度(0.4、0.8、1.2、1.6、2.0mg /mL)来测定
样品对重金属元素的吸附能力,以样品浓度为横坐
标,对铅和镉的吸附率为纵坐标。
由图 1 可知,在 0.4~2.0mg /mL浓度范围内,模拟
胃液条件下低酯果胶、高酯果胶及黄酮均能够有效
地吸附重金属铅,且吸附率与样品浓度呈剂量关系,
即随着样品浓度的增大,其吸附能力逐渐增强。三
种物质中高酯果胶对铅的吸附能力最强,黄酮的吸
附能力最弱,当样品浓度为 2.0mg /mL 时,高酯果胶
的吸附率为 47.02%,低酯果胶的吸附率为 45.11%,
黄酮的吸附率为 31.74%。
图 1 模拟胃液条件下黄酮、高酯
及低酯果胶对铅的吸附能力
由图 2 可知,在 0.4~2.0mg /mL浓度范围内,模拟
肠液条件下低酯果胶、高酯果胶及黄酮均能够有效
地吸附重金属铅,且吸附率与样品浓度呈剂量关系,
随着浓度的增大,其吸附能力逐渐增强。三种物质
中高酯果胶对铅的吸附能力最强,黄酮的吸附能力
最弱,当样品浓度为 2.0mg /mL 时,高酯果胶的吸附
率为 81.09%,低脂果胶的吸附率为 75.22%,黄酮的
吸附率为 58.48%。
图 2 模拟肠液条件下黄酮、高酯
及低酯果胶对铅的吸附能力
由图 3 可知,在 0.4~2.0mg /mL浓度范围内,模拟
胃液条件下低酯果胶、高酯果胶及黄酮均能够有效
地吸附重金属镉,且吸附率与样品浓度呈剂量关系,
随着浓度的增大,其吸附能力逐渐增强。其中低酯
果胶对镉的吸附能力最强,黄酮的吸附能力最弱,当
样品浓度为 2.0mg /mL 时,高酯果胶的吸附率为
26.7%,低脂果胶的吸附率为 33.35%,黄酮的吸附率
为 22.61%。
由图 4 可知,在 0.4~2.0mg /mL浓度范围内,模拟
图 3 模拟胃液条件下黄酮、
高酯及低酯果胶对 Cd的吸附率
肠液条件下低酯果胶、高酯果胶及黄酮均能够有效
地吸附重金属镉,且吸附率与样品浓度呈剂量关系,
随着浓度的增大,其吸附能力逐渐增强。其中低酯
果胶对镉的吸附能力最强,黄酮的吸附能力最弱,当
样品浓度为 2.0mg /mL 时,低酯果胶的吸附率为
30%,高脂果胶的吸附率为 27.93%,黄酮的吸附率为
24.53%。
图 4 模拟肠液条件下高酯果胶、
低酯果胶及黄酮对 Cd的吸附能力
榴莲壳内皮提取的高酯果胶、低酯果胶及黄酮,
在锌、铁、钙及重金属铅及镉共同存在的情况下,在
模拟胃、肠液条件下均能够选择性地吸附重金属铅
及镉,不影响铁、锌离子的浓度,这种选择性吸附作
用机制可能的原因:a.与果胶结构有关,果胶上有官能
团,如羧酸、羟基,这些对金属离子具有高的亲和力。
b.果胶中的钙与重金属铅、镉进行离子交换的化学吸
附作用有关[10]。c.在多种金属离子共存的混合液中,
果胶和黄酮对各种金属离子的吸附存在竞争关系[11]。
3 结论
从榴莲的废弃物中提取果胶和黄酮,研究其对
混合金属离子溶液中重金属的吸附作用,国内外尚
未见报道。本文研究结果表明,榴莲壳内皮中提取
的高酯果胶、低酯果胶及黄酮在锌、铁、钙及重金属
铅及镉共同存在情况下,在模拟胃、肠液条件下均能
够选择性地吸附重金属铅及镉,而且不影响铁、锌离
子的浓度,在 0.4~2.0mg /mL 的浓度范围内,吸附率
与样品浓度呈剂量关系,随着浓度的增大,其吸附能
力逐渐增强。对铅吸附能力高酯果胶 >低酯果胶 >
黄酮;对镉的吸附能力:低酯果胶 > 高酯果胶 > 黄
酮。本文研究结果提示,来自榴莲壳内皮的提取物,
具有对重金属的选择吸附特性,其中果胶和黄酮类提
取物具有开发去除铅、镉重金属的功能食品添加剂的
潜能,有可能作为一种具有较高吸附潜力的吸附剂
(下转第 135 页)
135
图 4 胃蛋白酶对抗菌肽抗菌活性影响
性的水解酶,可水解任何蛋白质的肽键,两个抗菌肽
随着酶作用时间的延长,抗菌活性显著下降,60min
后,两个肽已经基本失去抗菌活性,说明抗菌肽对蛋
白酶 K的作用不稳定。
图 5 蛋白酶 K对抗菌肽抗菌活性影响
3 结论
衍生肽 BF2- A /B 都有很强的广谱抗菌活性,
BF2-B对细菌的抑菌活性普遍强于 BF2-A。BF2-B
杀菌过程迅速剧烈,BF2-A 则非常缓慢。浓度的提
高对 BF2-A的活性没有明显的影响,而 BF2-B是个
浓度依赖性的肽。两个肽均没有体外溶血活性,而
且 BF2-A几乎没有抑肿瘤活性,但 BF2-B在
100μg /mL 时,能抑制大约 20% 的肿瘤细胞生长。
BF2-A /B都能与脂多糖亲和结合从而中和内毒素,
BF2-B亲和结合脂多糖的能力强于 BF2-A。BF2-
A /B经胃蛋白酶和胰蛋白酶处理后,抗菌活力都略
有下降,而经蛋白酶 K处理一段时间后,就完全丧失
了抗菌活性。
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7-16.
(上接第 131 页)
来源。该实验结果亦为使用农业废弃物提取果胶提
供了一个方法,作为一个替代活性炭的来源,对当前
循环经济的发展及环保具有一定的实际意义,值得
进一步研究。
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