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铁包金不同萃取物的抗炎镇痛作用研究



全 文 :药 物 研 究
The medicine study
铁包金不同萃取物的抗炎镇痛作用研究
石 妍
内蒙古科技大学包头医学院第一附属医院药剂科,内蒙古 包头 014010
【摘 要】 目的:观察铁包金提取物的镇痛抗炎作用。方法:铁包金提取物按 0. 2g /kg和 0. 4gg /kg 的剂量对巴豆油所导致的小鼠出
现耳廓肿胀以及由醋酸所致的小鼠扭体分别进行实验。结果:铁包金中的提取物样品可以对因为巴豆油而导致的小白鼠的耳廓肿胀有明显
的抑制作用;对醋酸引起的小鼠扭体的次数有了明显的减少。结论:铁包金的提取物具有镇痛抗炎作用。
【关键词】 铁包金;抗炎;镇痛
【中图分类号】R285 【文献标志码】A 【文章编号】1007 - 8517 (2014)05 - 0022 - 02
铁包金是鼠李科勾儿茶属铁包金 Berchemia lineate (L. )
DC. 的茎藤或根,也称之为老鼠耳、乌龙根、勾儿茶、小
叶铁包金等,收载于 1990 年版《广西中药材标准》。铁包
金味道微苦、微涩,具有镇咳、止痛止血、消滞散瘀、祛
除风湿、消肿解毒的功效,对多种类型炎症性疾病和肿瘤
等都具有较好的疗效[1]。本研究将铁包金药材利用不同溶
剂进行萃取后,对所提取物进行抗炎镇痛的实验研究。现
结果如下。
1 材料与仪器
1. 1 药物与试剂 铁包金选取不同的溶剂对其萃取,氯仿
层萃取物的设为样品 1,石油醚层萃取物列做样品 2,在醋
酸乙酯层萃取物列做为样品 3,从正丁醇层萃取物列做为样
品 4,样品均由广西中医学院制药厂提供;阿司匹林片
(武汉远大制药,批号:041209);地塞米松 (天津药业集
团,批号:050720)。
1. 2 动物 选用昆明种清洁级小白鼠,重量 19g ~ 22g,雌
雄各半。分别置于不同的空调饲养室,饲养室温度要控制
在 20℃至 24℃之间,室内温度也要在 55%与 65%间。严格
控制小白鼠的喂养饲料,采用标准的颗粒饲料。
1. 3 仪器 棱光 - 722 型可见分光光度计 (精密科学仪器
有限公司);FA1004 型万分之一电子天平 (精密科学仪器
有限公司)。
1. 4 统计学分析 SPSS 10 统计软件,通过对数据进行分
析所得到的数据用x ± s进行表示,组间对比采用 t检验。
2 方法与结果
2. 1 抗炎实验[2] 取鼠 100 只,雌性小白鼠 50 只,雄性
小白鼠 50 只,随机组成对照组 (10 只)、地塞米松组 (10
只)、铁包金样品组 (80 只)。其中铁包金样品组又分为 2
大组,每一大组有 4 小组,编号别为 1 至 4 号,一个大组
的给药剂量为 0. 2g /kg,另外一大组的给药剂量为 0. 4g /kg。
每组小白鼠的给药频率均为每日一次,给药时间均为 5d。
对照组给予等体积蒸馏水,对照组给予蒸馏水的时间为 5
天,在最后一次给予蒸馏水 30 分钟以后,取 2%巴豆油溶
液 0. 05ml涂抹在小白鼠的右耳,4 个小时后,将小白鼠处
死,沿小白鼠左右耳廓相同位置取材,后置于 FA1004 型万
分之一电子天平上称重,左右耳的重量值之差表示肿胀程
度指标,以 mg作为重量单位,同时算出抑制率 (%)。结
果见表 1。
由表 1 可知,0. 2、0. 4g /kg 的样品 1、2、3 以及地塞
米松组对巴豆油所致小白鼠耳廓肿胀有较好的抑制效果,
抑制率最高达到 29. 8%;0. 2g /kg样品组和 0. 4g /kg样品组
与正常对照组进行比较发现,差异较为明显,具有统计学
意义 (P < 0. 05);地塞米松组的抑制率高于 0. 2、0. 4g /kg
的样品 2、3、4 组,组间比较存在差异,有统计学意义 (P
< 0. 05)。
表 1 铁包金提取物对小白鼠耳廓肿胀的影响 (x ± s )
组别 n 剂量 C /g·kg -1肿胀度 (m/mg) 抑制率 (%)
对照组 10 - 19. 5 ± 3. 0 -
地塞米松 10 0. 005 15. 0 ± 3. 6* 23. 1
样品 1 (大) 10 0. 4000 13. 7 ± 4. 7** 29. 8
样品 2 (大) 10 0. 4000 16. 3 ± 2. 6* 16. 4
样品 3 (大) 10 0. 4000 16. 4 ± 3. 0* 15. 9
样品 4 (大) 10 0. 4000 17. 1 ± 3. 2 12. 3
样品 1 (小) 10 0. 2000 14. 8 ± 4. 3** 23. 8
样品 2 (小) 10 0. 2000 16. 5 ± 2. 9* 15. 4
样品 3 (小) 10 0. 2000 16. 6 ± 3. 2* 14. 9
样品 4 (小) 10 0. 2000 17. 5 ± 4. 6 10. 3
注:与对照组比较* P < 0. 05;**P < 0. 05
2. 2 镇痛实验[3] 取耳廓肿胀小鼠 100 只,雌性小白鼠 50
只,雄性小白鼠 50 只,随机组成对对照组 (10 只)、地塞
米松组 (10 只)、铁包金样品组 (80 只)。其中铁包金样
品组又分为 2 大组,每一大组有 4 小组,一个大组的给药
剂量为 0. 2g /kg,另外一大组的给药剂量为 0. 4g /kg。每组
小白鼠的给药频率均为每日一次,给药时间均为 5d。对照
组给予等体积蒸馏水,对照组给予蒸馏水的时间为 5 天,
在最后一次给予蒸馏水 1 小时以后,每只小白鼠腹腔注射
0. 7%醋酸溶液 0. 2ml,对 20 分钟以内小白鼠的扭体次数进
行观察并记录。结果见表 2。
表 2 铁包金提取物对小鼠镇痛作用的影响 (x ± s)
组别 n 剂量 C /g·kg -1 20min内的扭体的次数
对照组 10 - 16. 7 ± 5. 3
阿司匹林 10 0. 2 11. 8 ± 4. 3*
样品 1 (大) 10 0. 4 10. 8 ± 5. 2*
样品 2 (大) 10 0. 4 9. 1 ± 4. 7**
样品 3 (大) 10 0. 4 4. 8 ± 3. 6***
样品 4 (大) 10 0. 4 10. 0 ± 5. 2*
样品 1 (小) 10 0. 2 11. 8 ± 4. 2*
样品 2 (小) 10 0. 2 9. 4 ± 5. 3**
样品 3 (小) 10 0. 2 5. 2 ± 3. 9***
样品 4 (小) 10 0. 2 11. 4 ± 4. 1*
注:与对照组比较,* P < 0. 05;**P < 0. 01;***P < 0. 001
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中国民族民间医药
Chinese journal of ethnomedicine and ethnopharmacy
药 物 研 究
The medicine study
色谱条件测定峰面积。以峰面积的自然对数为纵坐标,以
进样量的自然对数为横坐标作线性回归,绘制标准曲线,
得回归方程:Y = 1. 6726X + 6. 8279 (r = 0. 9994),结果表
明,盐酸水苏碱在 1. 2 ~ 6. 0μg范围内的自然对数值与峰面
积的自然对数值呈良好线性关系。
2. 2. 6 精密度试验 分别精密吸取同一盐酸水苏碱对照品
溶液各 10?l,按测定方法重复进样 8 次,测定峰面积值。
RSD为 0. 98%。
2. 2. 7 稳定性试验 取同一供试品 (批号:111111)溶
液,分别于 0h、2h、4h、8h、12h 各进样 10μl,按上述色
谱条件进行测定,结果 5 次盐酸水苏碱峰面积值的 RSD =
2. 615%,表明供试品溶液在 10 小时内稳定。
2. 2. 8 重复性试验 取批号为 111111 的益母颗粒 6 份,按
供试品制备方法,平行制备 6 份,依法测定盐酸水苏碱含
量,盐酸水苏碱含量分别为 4. 3067、4. 3476、4. 5227、
4. 5422、4. 5366、4. 5686mg· g,平均值为 4. 4707mg· g,
RSD为 2. 53% (n = 6)。
2. 2. 9 加样回收率试验 取已知含量的益母颗粒 (批号:
111111,盐酸水苏碱含量:4. 4707mg /g)样品 6 份,每份
约 0. 5g,精密称定,分别精密加入盐酸水苏碱对照品,按
2. 2. 3 项下的方法制备供试品溶液,测定盐酸水苏碱含量,
计算回收率,结果 (见表 1)表明,本法有良好的回收率。
表 1 加样回收率试验结果
试验
次数
样品量
(g)
样品中含
量 (mg)
添加量
(mg)
实测量
(mg)
回收率
(%)
平均回收
率 (%)
RSD
1 0. 5156 2. 3051 2. 1 4. 3759 98. 61
2 0. 5119 2. 2886 2. 1 4. 4404 102. 47
3 0. 5005 2. 2376 2. 1 4. 4120 103. 54
4 0. 5022 2. 2452 2. 1 4. 3840 101. 85
5 0. 5021 2. 2447 2. 1 4. 4132 103. 26
6 0. 5109 2. 2841 2. 1 4. 4788 104. 51
102. 37 2. 01%
2. 2. 10 样品测定 取 3 个批号的益母颗粒样品,分别按
2. 2. 3项下方法制备供试品溶液,测定盐酸水苏碱含量,结
果见表 2。
表 2 益母颗粒盐酸水苏碱含量测定结果
序号 批号 盐酸水苏碱含量 (mg·g - 1)
1 120401 5. 33
2 120402 4. 34
3 120403 4. 37
3 讨论
3. 1 当归、川芎的薄层鉴别,曾参照《中国药典》项下当
归、川芎[2]的鉴别方法试验,经过试验比较,提取溶剂选
用乙酸乙酯比选用乙醚提取的效果好,斑点更清晰。从安
全、环保方面考虑,药典方法中的展开剂正己烷 -乙酸乙
酯 (4:1)调整为毒性较小环己烷 -乙酸乙酯 (9 ∶ 1)点
板,效果好且缺当归、川芎的阴性没有干扰,专属性强,
特征斑点明显,故采用。
3. 2 曾进行木香薄层鉴别试验,采用石油醚 (60 ~ 90℃)、
乙酸乙酯、乙醇等不同提取溶剂提取制备供试品;以石油
醚 (30 ~ 60℃) -乙酸乙酯 (9:1)、环己烷 -乙酸乙酯
(9∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以 5%香草醛硫酸
溶液,在 105℃加热至显色清楚。试验结果:对照药材色谱
显一蓝色主斑点,供试品色谱中均未检视到与对照药材相
应的蓝色主斑点。
3. 3 曾参照文献 [3],选择高效液相法 -紫外检测器进行
盐酸水苏碱的含量测定研究,测定波长:192nm,流速:
1. 000ml /min,柱温:25℃,流动相曾试过:乙腈 -水 (90
∶10)、甲醇 -水 (90∶ 10)、乙腈 - 0. 2%乙酸 (80∶ 20)、乙
腈 - 0. 2%冰醋酸 (80 ∶ 20),结果采用乙腈 - 0. 2 冰醋酸
(80∶20)分离度较好,但由于重复性试验结果较差 (RSD
= 5. 7%),故未采用。
参考文献
[1]中华人民共和国卫生部药典委员会. 中华人民共和国卫生部药品标准:
中药成方制剂第九册 [S]. 北京:中华人民共和国卫生部药典委员会,
1994:157.
[2]国家药典委员会. 中华人民共和国药典 (一部)[M]. 北京:中国医药
科技出版社,2010.
[3]李政海,苏作林,廖展苇,等. HPLC 法测定益母草颗粒 (无蔗糖型)
中盐酸水苏碱的含量[J]. 中国医药导报,2011,8 (26):70 - 72.
(收稿日期:2013. 12. 20
檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾
)
(上接第 22 页)
由表 2 可知,给药组镇痛效果明显,0. 2g /kg、0. 4g /kg
组与正常对照组相比较,差异比较显著,P < 0. 05、P <
0. 01,具有统计学意义。同时阿司匹林组在 20min 内的扭
体次数低于 0. 2g /kg 样品中的四个小组和 0. 4g /kg 的样品
2、3 组,组间比较存在差异,有统计学意义 (P < 0. 05)。
3 讨论
铁包金在广西范围内的分布较为广泛,用于治疗肺结
核、疔疮肿毒等疾病治疗效果显著。通过实验结果分析,
用药样品组与正常对照组相比较,铁包金提取物给药组对
巴豆油引起小白鼠耳廓肿胀,具有显著的抑制作用,表现
出较强的消炎作用;同时铁包金提取物给药组对醋酸导致
的扭体反应有着非常明显的抑制作用,表现出了具有较强
镇痛作用。表明铁包金其具有镇痛抗炎作用,为铁包金的
临床应用及化学成分研究提供了参考。同时由于本次实验
所选研究对象较少,对其应用效果还需进行深入的研究和
探讨。
参考文献
[1]广西壮族自治区卫生厅. 广西中药材标准 [S]. 南宁:广西科学技术出
版社,2011:79.
[2]王璐,高菊珍,张红宇,等. 雪上一枝蒿速效止痛搽剂的抗炎镇痛作用
研究 [J]. 中药药理与临床,2010,21 (4):52.
[3]吴虹,魏伟,宋礼华. 栀子总苷的抗炎镇痛作用 [J]. 中国中医药信息
杂志,2011,13 (7):31.
(收稿日期:2013. 12. 19)
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