全 文 ：AB
图 1　齐墩果酸 HPLC图
A.齐墩果酸对照品 B.样品
及临床应用进行深入研究 , 使其丰富的资源得到充分利用。
参考文献:
[ 1] 　严仲铠 ,李万林.中国长白山药用植物彩色图志 [ M] .北京:
人民卫生出版社 , 1997:230-231.
[ 2] 　黄文哲 ,李玉环 ,李宗利 , 等.野玫瑰根化学成分的研究 [ J].
佳木斯医学院学报 , 1998, 21(1):17-18.
[ 3] 　黄文哲 ,刘伟强 ,李玉环.刺玫根中齐墩果酸的分离鉴定及含
量测定 [ J] .中国野生植物资源 , 1999, 18(8):30-31.
HPLC测定地锦草中没食子酸和芦丁的含量
林　辉
(福建省龙岩市药品检验所 ,福建龙岩 364000)
收稿日期:2008-07-12
作者简介:林　辉(1976-),男 ,主管药师 ,主要从事天然植物药的分离提取及新药物的开发研究 ,中药材及饮片的真优劣的鉴别 ,中成药
的分析鉴定。 Tel:(0597)2285092E-mail:lin-hui@126.com。
关键词:地锦草;没食子酸;芦丁;HPLC;含量测定
中图分类号:R284.1　　　　　文献标识码:B　　　　　文章编号:1001-1528(2009)09-1465-03
　　地锦草来源于大戟科植物地锦 Euphorbiahumifusa
Willd.或斑地锦 EuphorbiamaculataL.的干燥全草 , 别名血
见愁 、红茎草 、奶汁草 、铺地锦 ,主要分布在山东 、江苏 、浙江 、
江西 、福建 、广东等地。性味辛平 , 具有清热解毒 、活血止血 、
利湿通乳的功效。临床上主要治疗细菌性痢疾 、肠炎 、咳血 、
吐血 、便血 、崩漏 、外伤出血 、湿热黄疸 、乳汁不通 、痈肿疔疮 、
跌打肿痛 [ 7-8] 。化学成分研究表明地锦草中所含的有效成分
主要以有机酸类的没食子酸 , 黄酮类的槲皮素 、芦丁为主。
没食子酸具有收敛止血的作用 [ 6] 。中国药典 2005年版一部
建立了高效液相色谱法测定地锦草中槲皮素的含量。参考
了有关的文献 , 本试验建立高效液相色谱法测定地锦草中没
食子酸和芦丁含量的方法 , 目的是为了更好地控制地锦草药
材的质量 , 保证临床用药安全有效。
1　仪器与试药
日本岛津 LC-2010A高效液相色谱仪 , KQ-500B型超声
波清洗器(昆山市超声仪器有限公司), 甲醇(色谱纯), 冰醋
酸(分析纯), 水为超纯水 , 没食子酸和芦丁对照品(中国药
品生物制品检定所 , 批号分别为:110831-200302, 11080-
200412);地锦草(福建龙岩明通医药公司提供)。
2　测定方法与结果
2.1　色谱条件
色谱柱:岛津 ShimadzuC18(5 μm, 4.6 mm×150 mm);
流动相:甲醇-1%冰醋酸溶液(1∶99);流速:1.0 mL/min;柱
温:40 ℃;检测波长:275 nm;理论板数按没食子酸峰计算应
不低于 1 500,色谱图见图 1。
2.2　对照品溶液的制备
精密称取经五氧化二磷减压干燥至恒重的没食子酸对
照品 13.31 mg, 置 100 mL的量瓶中 , 加 50%甲醇溶解并稀
释至刻度 ,摇匀 , 即得。 (每 1 mL含没食子酸 133.1 μg)。
2.3　供试品溶液的制备
称取本品粉末(过三号筛)约1.5 g, 精密称定 , 置具塞的
锥形瓶中 ,精密加入 50%甲醇 50 mL, 密塞 , 称重 , 超声处理
30min,放冷 、称重 ,加 50%甲醇补足减失的重量 ,摇匀 , 用 0.
45 μm的滤膜过滤 , 取续滤液即得。
2.4　线性关系考察
精密吸取上述对照品溶液 2、 4、 8、 12、16、 20 μL, 在选择
的色谱条件下分别进样 , 以没食子酸峰面积(Y)对进样量
(X)进行回归分析 , 得到回归方程和相关系数为:Y=
408 090.9X+4 237.31, r=0.999 9(n=6)。结果表明 ,没食子
酸在 0.266 2 ～ 2.662 μg浓度范围内与峰面积线性关系良好。
1465
2009年 9月
第 31卷　第 9期
中 成 药
ChineseTraditionalPatentMedicine
September2009
Vol.31　No.9
没食子酸对照品
地锦草供试品
图 1　地锦草中没食子酸高效液相色谱
2.5　精密度实验
精密吸取上述对照品溶液 10 μL, 分别进样 6次 , 测定
结果没食子酸峰面积积分值 RSD为 0.06%, 结果表明精密
度良好。
2.6　重复性试验
称取同一来源的地锦草粉末 6份 , 每份约 1.5 g,精密称
定 , 按 2.3项下方法制备供试品溶液 , 在上述色谱条件下进
行分析测定 , RSD=0.4%(n=6), 结果表明该条件下重现性
良好。
2.7　稳定性试验
取重复性试验用的同一样品溶液 ,分别放置 2、 4、8、16、
48 h后 , 分别进样 10 μL,进行分折 , 结果色谱图峰面积几乎
无变化 , RSD为 0.8%,说明地锦草溶液在 48 h内稳定性良
好。
2.8　回收率试验
取已知没食子酸含量的地锦草约 1.5 g,精密称定 , 平行
称取 6份 ,各精密加入一定量的没食子酸对照品 , 按照 2.3
项下方法制备供试品溶液 , 进样 10 μL, 在上述色谱条件下
测定峰面积 ,计算回收率 ,结果平均回收率为 98.8%, RSD=
1.1%(n=6)。
2.9　样品含量测定
分别取不同产地的地锦草粉末 , 按 2.3项下方法制备供
试品溶液 ,进样 10μL在上述色谱条件下进行分析测定 , 测
定结果见表 1。
表 1　 不同产地地锦草含量测定(n=3)
序号 产地 没食子酸含量 /%
平均含
量 /%
RSD
/%
芦丁含
量 /%
平均含
量 /%
RSD
/%
0.111 0.845
1 福建 0.116 0.114 2.2 0.839 0.842 0.36
0.114 0.842
0.120 0.798
2 广东 0.134 0.128 5.5 0.785 0.791 0.84
0.129 0.789
0.160 0.673
3 江西 0.159 0.161 1.3 0.661 0.675 2.2
0.163 0.690
0.115 0.926
4 浙江 0.121 0.117 3.2 0.911 0.922 1.1
0.113 0.930
3　芦丁测定方法与结果
3.1　色谱条件
色谱柱:大连依利特 C18(5 μm, 4.6 mm×150 mm);流
动相:甲醇-水-冰醋酸溶液(30∶70∶0.5);流速:1.0 mL/min;
柱温:40 ℃;检测波长:254nm;理论板数按芦丁峰计算应不
低于 2 000,色谱图见图 2。
芦丁对照品 地锦草供试品
图 2　地锦草中芦丁高效液相色谱
3.2　对照品溶液的制备
精密称取经五氧化二磷减压干燥至恒重的芦丁对照品
10.18mg,置 100mL的量瓶中 , 加甲醇溶解并稀释至刻度 ,
摇匀 , 即得。 (每 1 mL含芦丁 101.8 μg)。
3.3　供试品溶液的制备
称取本品粉末(过三号筛)约 1.5 g,精密称定 , 置具塞的
锥形瓶中 , 精密加入甲醇 50 mL, 密塞 , 称重 , 超声处理 30
min,放冷 、称重 , 加甲醇补足减失的重量 , 摇匀 , 用 0.45 μm
的滤膜过滤 , 取续滤液即得。
3.4　线性关系考察
精密吸取上述对照品溶液 1、2、4、6、 8、 10 μL, 在选择的
色谱条件下分别进样 ,以芦丁峰面积(Y)对进样量(X)进行
回归分析 , 得到回归方程和相关系数为:Y=285 612.7X+
6 120.56, r=0.999 8(n=6)。结果表明 , 芦丁在 0.101 8 ～
1.018μg浓度范围内与峰面积线性关系良好。
3.5　精密度实验
1466
2009年 9月
第 31卷　第 9期
中 成 药
ChineseTraditionalPatentMedicine
September2009
Vol.31　No.9
精密吸取上述对照品溶液 10 μL, 分别进样 6次 ,测定结
果芦丁峰面积积分值 RSD为 0.45%,结果表明精密度良好。
3.6　重复性试验
称取同一来源的地锦草粉末 6份 , 每份约 1.5 g, 精密称
定 , 按 3.3项下方法制备供试品溶液 , 在上述色谱条件下进
行分析测定 , RSD=0.82%(n=6), 结果表明该条件下重现
性良好。
3.7　稳定性试验
取重复性试验用的同一样品溶液 , 分别放置 2、4、 8、 16、
48 h后 ,分别进样 10μL, 进行分析 ,结果色谱图峰面积几乎
无变化 , RSD为 0.68%,说明地锦草溶液在 48 h内稳定性良
好。
3.8　回收率试验
取已知芦丁含量的地锦草约 1.5 g, 精密称定 , 平行称取
6份 ,各精密加入一定量的芦丁对照品 ,按照 3.3项下方法制
备供试品溶液 , 进样 10 μL, 在上述色谱条件下测定峰面积 ,
计算回收率 , 结果平均回收率为 97.9%, RSD=1.2%(n=
6)。
3.9　样品含量测定
分别取不同产地的地锦草粉末 , 按 3.3项下方法制备供
试品溶液 , 进样 10 μL在上述色谱条件下进行分析测定 , 测
定结果见表 1。
4　讨论
4.1　提取方法和溶剂的选择　考察了冷浸法 ,回流法 ,超声
法 3种提取方法对地锦草中没食子酸和芦丁含量测定的影
响 , 结果表明 , 3种提取方法的提取效率相近 , 因超声提取操
作简便 、快速 ,故选择超声提取。根据没食子酸和芦丁的溶
解性 , 在实验中采用过甲醇 、 95%乙醇 、70%甲醇 、50%甲醇 、
30%甲醇等溶剂 , 结果发现没食子酸用 50%甲醇作溶剂提取
率最高 , 测得峰面积最大 ,而芦丁用甲醇作溶剂提取率最高 ,
测得峰面积最大。
4.2　检测波长的确定　称取少量的没食子酸对照品 , 加
50%甲醇溶解 , 溶液经紫外光谱扫描 ,在 275nm波长处有最
大吸收 , 故选择 275nm作为检测地锦草中没食子酸的波长。
4.3　流动相的选择　经查阅文献和有关标准 [ 1-4] , 在实验中
采用了甲醇-1%冰醋酸(90∶10)、(50∶50)、(10∶90)、(1∶99)
等各种不同比例的流动相 , 结果发现甲醇比例越大 , 没食子
酸的出峰时间越快 , 分离效果越差 , 最终确定甲醇-1%冰醋
酸(1∶99)作为本方法的流动相 ,结果分离效果非常好 , 峰形
漂亮 , 保留时间适宜 ,没有其它峰的干扰 , 可见高效液相色谱
图 1。加酸的目的是能使地锦草中的没食子酸游离出来 ,使
没食子酸峰的分离度和峰面积达到最好的效果。
4.4　经查阅文献和有关标准 [ 5-8] , 芦丁在 254 nm处有最大
吸收 , 经实验研究以 254nm为检测波长 , 甲醇-水-冰醋酸(30
∶70∶0.5)为流动相来测定地锦草中芦丁的含量 ,结果分离效
果很好 , 没有其它杂质峰的干扰 , 可见高效液相色谱图 2。
参考文献:
[ 1] 　国家药品标准 YBZ18072005 [ S].
[ 2] 　刘起中 ,张家国 ,李京平.HPLC法测定猴耳环炎片中没食子酸
的含量 [ J] .中成药 , 2001, 23(9):687-688.
[ 3] 　徐　莱 ,朱俊彦 ,曾　娜.HPLC法测定冠通胶囊中没食子酸的
含量 [ J] .中成药 , 2007, 29(9):附 15.
[ 4] 　王晓飞 ,金向群.高效液相色谱法测定百夏塔热胶囊中没食子
酸的含量 [ J] .时珍国医国药, 2006, 17(2):194-195.
[ 5] 　关丽萍 ,金晴昊 ,郑云花.反高效液相色谱法测定珍珠梅中芦
丁的含量 [ J] .时珍国医国药, 2005, 16(8):717-718.
[ 6] 　肖培根主编.新编中药志 [ M].第 3卷.北京:化学工业出版
社 , 2002:96-102.
[ 7] 　江苏新医学院编.中药大辞典 [ M] .上海:上海科学技术出版
社 , 1986:827-828.
[ 8] 　中国药典 [ S] .一部 , 2005:84.
辽宁启动国内外医药专利信息检索平台
由辽宁省知识产权局建立的 、涵盖 6万余件国内外医药专利信息的本溪生物医药产业基地专利信息服
务平台日前正式启动 。
据介绍 ,本溪生物医药产业基地专利信息服务平台采用三级导航结构 ,其中有国内专利约 4万件 、国外
专利 2万余件 ,涉及生物医药的种植技术 、加工方法 、制备工艺等 34个领域 , 68个检索表达式。
据本溪市政府市长助理于海介绍 ,这一专利信息服务平台是由辽宁省知识产权局依托中外专利数据资
源 ,利用现代信息查询技术建立的检索系统。通过检索使用 ,可以及时 、便捷 、准确地了解国内外生物医药专
利信息 ,了解国内外行业技术发展趋势 ,避免侵权纠纷及核心技术重复研究 ,为提高企业自主创新能力提供
可靠的信息保障 ,具有很高的实用价值。
(信息由新华社提供)
1467
2009年 9月
第 31卷　第 9期
中 成 药
ChineseTraditionalPatentMedicine
September2009
Vol.31　No.9