全 文 ：地锦草对老龄小鼠不同组织 SOD和 MDA的影响
陈福星 , 陈文英 , 宫新城 , 钟秀会
(河北农业大学中兽医学院 , 河北 定州 073000)
中图分类号:R285 文献标识码:B 文章编号:0529-6005(2009)01-0053-01
地锦草(Euphorbia humi f usa Willd.)系大戟
科植物 ,为常用中药材 ,具有清热解毒 、凉血止血 、利
湿通乳等功效[ 1-2] 。近10年来 ,人们对地锦草的化学
组成及其生物学活性的研究取得了重大进展。李宝
山等测定了地锦草总黄酮(TFEH)在体外对自由基
的清除率和抑制率 ,结果表明 , TFEH 具有很强的清
除和抑制自由基的作用[ 3] 。本文以老龄小鼠为研究
对象 ,观察了地锦草对小鼠不同器官的抗氧化作用 。
1 材料与方法
1.1 试验材料 中草药地锦草 ,购自河北省定州市
中药大药房 ,经鉴定为真品后备用 。
供试动物:昆明系小鼠 20只 , 30周龄 ,雌雄各
半 ,购自河北医科大学实验动物中心 ,常规饲养3 d ,
观察无异常备用 。
主要试剂:超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒 、
丙二醛(MDA)测定试剂盒(附标准蛋白)均购自南
京建成生物工程研究所。
主要仪器:UV-9100型紫外分光光度计 ,购自
北京瑞利分析仪器公司。
1.2 动物分组及处理 将 20只小鼠随机分成对照
组和试验组 , 每组 10 只 。试验组每天 1 次灌服
100%地锦草水煎液 0.5 mL ,对照组每天灌服等量
的生理盐水 ,连续灌服 7 d。用眼科镊摘除眼球收集
血液 ,分离血清;同时剖检小鼠 ,分别取其肝脏 、脾
脏 、心脏和肾脏。
1.3 组织匀浆的制备 取 200 mg 左右的组织块
在冰冷的生理盐水中漂洗 ,除去血液 ,滤纸拭干 ,用
移液器量取 9 倍于组织块质量的预冷匀浆介质
(0.86%生理盐水)用移液器取总量的 2/3 于烧杯
中 ,用眼科剪尽快剪碎组织块.将剪碎的组织倒入
玻璃匀浆管中 ,再将剩余的 1/3匀浆介质冲洗残留
在烧杯中的组织碎块 ,一起倒入匀浆管中进行匀浆 ,
用匀浆管在冰水中匀浆 15 min ,普通离心机 3 500
r/min离心 15 min ,取上清液备用。
1.4 超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的测
定 按照 SOD和 MDA 试剂盒操作说明进行。
2 结果
2.1 地锦草水煎液对小鼠超氧化物歧化酶(SOD)
的影响 给老龄小鼠灌服地锦草水煎剂后 ,小鼠
血清 、肝中超氧化物歧化酶(SOD)的活性明显高
于对照组 ,差异显著(P<0.05);而脾 、肾 、心等组
织中超氧化物歧化酶(SOD)的活性变化更明显 ,
试验组明显高于对照组 ,差异极显著(P<0.01),
详见表 1 。
表 1 地锦草对小鼠 SOD活力的影响
组别 血清(U/mL) 肝(U/m g) 脾(U/mg) 肾(U/mg) 心(U/m g)
对照组 32.68±18.67 92.60±16.72 19.47±16.78 24.48±16.52 20.52±7.52
试验组 48.77±12.34＊ 110.40±13.35＊ 36.97±11.42＊＊ 46.03±10.22＊＊ 39.83±13.28＊＊
注:＊表示与对照组比较差异显著(P<0.05);＊＊表示与对照组比较差异极显著(P<0.01);U/mL 表示每毫升血清所含的活力单位;U/
m g 表示每毫克蛋白所对应的活力单位
2.2 地锦草水煎液对小鼠 MDA的影响 ,地锦草对
小鼠血清中丙二醛的含量没有影响 ,地锦草水煎液
试验组和生理盐水对照组间比较 ,差异不显著(P >
0.05);而对肾中丙二醛的含量有明显的作用 ,可以
降低其含量 ,差异显著(P<0.05);地锦草水煎液试
验组小鼠肝 、心 、脾中 MDA 的含量更是明显降低 ,
和生理盐水对照组间比较 ,差异极显著(P<0.01)。
3 讨论
3.1 地锦草对小鼠体内 SOD活性的影响 , SOD 是
体内催化歧化反应的一种抗氧化保护酶 ,此酶广泛
收稿日期:2007-06-01
基金项目:河北省畜牧兽医局资助(2006-10)
作者简介:陈福星(1971-),男 ,讲师 ,硕士 ,从事中兽医药物研究
通讯作者:钟秀会
的存在于各种生物中 。SOD 对机体的氧化和抗氧
化平衡起着重要的作用 ,此酶能清除超氧阴离子自
由基(O 2-)保护细胞免受损伤。而超氧阴离子自由
基(O2-)是机体细胞在受到刺激作用后产生的含氧
的自由基 ,由于其外层电子不配对 ,故其化学性质十
分活泼 ,极易对生物大分子发生氧化反应 ,改变或破
坏生物大分子结构的完整性而引起多种疾病[ 4-5] 。试
验结果表明 ,地锦草能显著提高小鼠血清 、心 、肝 、脾 、
肾中 SOD的活性 ,和生理盐水对照组相比 ,差异显著
(P<0.05),且脾 、肾 、心 3项和对照组相比 ,差异极显
著(P<0.01)。说明地锦草能显著增强对超氧阴离子
自由基(O2-)的清除能力 ,保护细胞免受损伤。
3.2 地锦草对小鼠体内 MDA 的影响 , 丙二醛
(MDA)是机体通过酶系统和非酶系统产生氧自由
53 C hinese Journal of Veterinary M edicine 中国兽医杂志 2009年(第 45卷)第 1期
正交法筛选治疗奶牛乳房炎的清热解毒方
纪志辉 , 赵树臣 , 侯振中 , 李叔伟
(东北农业大学动物医学学院 , 黑龙江 哈尔滨 150030)
中图分类号:S858.23 文献标识码:B 文章编号:0529-6005(2009)01-0054-02
乳房炎是奶牛的常见疾病之一 , 给奶牛业造
成巨大的经济损失。尤其是隐性乳房炎 ,发病率
高 ,不易治愈。据报道 , 美国 、日本的发病率为
62.1%[ 1] ,我国为 73.9%[ 2] 。乳房炎主要由于细
菌感染引起 ,主要病原菌包括金黄色葡萄球菌 、无
乳链球菌 、大肠杆菌等[ 3] 。长期使用抗生素不仅
使病原的抗药性增强还带来抗生素残留等食品安
全问题[ 3] 。中药属天然药物 ,毒副作用小 ,不易产
生耐药性 ,保障食品安全 ,具有显著的优势 。本试
验根据奶牛乳房炎的发病机理 、中药药理学和中
药药剂学等理论 ,从复方药物的作用效果方面进
行研究 ,筛选中药组成复方制成透皮制剂 ,为临床
有效防治奶牛乳房炎提供服务 。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 药物 蒲公英 、金银花 、连翘 、紫花地丁 、黄
芩 、板蓝根 、栀子 ,均购自哈尔滨龙卫大药房。
1.1.2 仪器 恒温培养箱 ,超净工作台 ,流通蒸汽
灭菌箱 ,电子分析天平 ,高压灭菌锅 。
1.1.3 培养基 营养肉汤培养基 ,THB肉汤培养基。
1.1.4 试验菌株 大肠杆菌 、金黄色葡萄球菌 、无
收稿日期:2007-09-05
作者简介:纪志辉(1980-),男 ,硕士, 从事奶牛乳房炎治疗方面
研究
通讯作者:侯振中
乳链球菌由本实验室分离鉴定。
1.2 药物制备 各味中草药组方 ,用水浸泡 1 h
后 ,加蒸馏水至中药完全浸没 ,置于电炉上急火煮沸 ,
沸腾时开始计时 ,文火煎熬 30 min ,后倒出药汁 ,再加
水同样煮沸 1次 ,将两次的煎液混到一起 ,纱布过滤
后 ,制成含药量为 1 g/mL 的煎剂 ,储存备用。
1.2.1 正交表[ 5] 的选用 此正交表有 7个试验因
子 ,每个因子有 2个水平数 ,共8个水平组合 ,如表 1。
1.2.2 菌种 从乳房炎患病奶牛乳样中提取分离
鉴定后的金黄色葡萄球菌 、大肠杆菌 、无乳链球菌。
按照不同菌种的培养条件 , 37℃培养 18 ～ 20 h 后 ,
用分光光温度计在 625 nm 处比色 ,稀释浓度调整
吸光度为 0.08 ～ 0.1间(含细菌数约为 1 ～ 2×108)
后备用 。
1.2.3 组方抑菌试验 采用试管二倍稀释法[ 4] 测
定上述每组中药组方对金黄色葡萄球菌 、大肠杆菌 、
无乳链球菌的抑菌程度。取灭菌试管 10支 ,编号 ,
依次排列 ,每管各加无菌肉汤培养基 1 mL ,然后于
第1管中加入100%试验药液1 mL ,混匀后吸取1 mL
加入第 2管中 ,依次向后 9 管 ,依法进行稀释 ,自第
9管中弃去 1 mL 。第 10 管不加药液为细菌对照。
由后向前 ,于上述各试管中加入试菌液 0.05 mL ,置
37℃恒温箱中培养 24 h。依次取其摇匀之试验液
各 1环 ,转种于固体培养基 ,37℃培养 24 h 后 ,在细
菌对照管长菌“ ++++”的情况下 ,判定药物抗菌
基 ,而氧自由基攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸 ,引
发脂质过氧化作用 ,并因此生成的脂质过氧化物 。
生物膜是生命系统中最容易发生脂质过氧化的场
所 ,生物膜主要是由磷脂组成的 ,而多不饱和脂肪酸
又是磷脂的主要组分 。当生物膜的脂质发生过氧化
作用后 ,其流动性必然发生改变 ,严重时其生物活性
丧失 ,如能量转换 ,物质运送 ,信息传递 ,细胞分裂和
融合等都不能正常发挥[ 4] 。脂质过氧化作用的最后
产物主要是丙二醛(MDA),因此丙二醛的量常被用
作做脂质过氧化的量度。并且丙二醛还可以与蛋白
质分子的氨基发生作用导致多肽链的链内交联和链
间交联 ,还能与蛋白质的巯基反应 ,修饰了的蛋白质
和酶将失去他们的生物活性 ,导致代谢异常 ,甚至死
亡[ 4-5] ,从试验结果看来 , 地锦草能显著抑制 MDA
的产生 ,尤其是在肝 、脾 、心的组织中 ,明显低于对照
组 ,差异极显著(P <0.01)。说明地锦草具有明显
的抗氧化能力 ,使小鼠的细胞膜免受损伤 ,其中一个
主要的原因可能就是 SOD活力显著提高 ,大大增强
了清除和抑制氧自由基的能力 ,从而使 MDA 的产
生减少 。可见地锦草如能应用于临床治疗由于过氧
化损伤引起的各种疾病 ,将有很大的应用前景。
参考文献:
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[ 2] 马清钧.常用中药现代研究与临床[ M] .天津:天津科技翻译出
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54 中国兽医杂志 2009年(第 45卷)第 1期 Chinese Journal of Veterinary Medicine