全 文 ：表 1　青霉素皮试液不同浓度时旋光度
编号 毫升数 mL相当于青霉素含量 u·mL -1 测得旋光度 a a
1 4.5 450
0.152
0.150
0.148
0.150
2 5.0 500
0.180
0.179
0.179
0.179
3 5.5 550
0.199
0.200
0.200
0.200
4 6.0 600
0.220
0.218
0.219
0.219
5 6.5 650
0.239
0.240
0.240
0.240
表 2　回收率结果
编号 投入量 测得值 回收率
mg·mL -1 u·mL -1 u·mL-1 %
1 0.3006 501.1 500.8 99.94
2 0.2992 498.8 497.0 99.64
3 0.3001 500.3 502.0 100.34
4 0.2984 497.4 496.0 99.78
平均回收率 99.92%, CV=0.30%
表 3　青霉素皮试液放置不同时间的含量变化(%)
编号 1h 2h 3h 4h 5h 6h 7h
1 100.0 99.80 99.80 99.21 99.41 99.01 98.62
2 100.41 100.00 99.79 99.79 99.38 99.17 98.55
4　小结
《中国药典》(2000 版)规定青霉素皮试注射液浓度为
500u·m L-1 , 指经皮下注射作青霉素皮肤过敏试液所要求的
浓度。以前临用时 , 常由医院注射室护士自行配制 , 即在 80
万 u 的青霉素钠盐安瓿中多次的注入 0.9%氯化钠注射液 ,
再抽取稀释 , 直至所需浓度 ,即理论计算所得的大概值。在操
作中 , 常因读数不准 ,操作不规范 ,如溶解不完全等 , 导致不仅
工作繁琐 , 而且含量不均 , 出现所配制的皮试液浓度时高时
低 , 在行皮肤过敏试验中易发生假阴性 、假阳性。现在改由药
剂人员在 10 万级流层净化操作台上进行 , 不仅符合环境卫生
要求 , 达到无菌操作 ,而且每次由专业药剂人员严格按操作规
程 , 认真配制 ,保证了所配青霉素皮试液的质量。另外 ,经本
试验测定表明 , 配制的青 、霉素皮试注射液的浓度在 450u·
mL -1～ 650u·m L-1时 , 其浓度与旋光度呈直线关系 , 相关系
数 r=0.9999 , 且平均回收率达 99.92%, 如允许绝对误差为
±1%时 ,则该皮试液于 20℃放置 6h 内较稳定。因此 , 用旋
光法测定青霉素皮试注射液的含量 , 既快速 , 又简便 , 可作为
医院制剂中心药检室的快速分析 。由于青霉素水溶液的稳定
性受其存放时间和温度的影响都较大 ,本实验只做了存放时
间对其的影响 , 而未进行不同温度状态下的其稳定性的比较 ,
有待今后再行讨论。
参考文献
〔1〕姚明辉.药理学〔M〕.第一版.北京:人民卫生出版社会社 , 2001.
〔2〕国家药典委员会编.中华人民共和国药典(2000版 ,一部)〔S〕.北
京:化学工业出版社 , 2000.
〔3〕刘文英.药物分析〔M〕.第五版,北京:人民卫生出版社 , 2005.
定心藤中总黄酮的超声波提取工艺研究
柯永建1 ,乐仁昌2(1.福建龙华药业有限责任公司 福州 350001;2.福建生物工程职业技术学院 福州 350002)
摘要:目的　探讨定心藤总黄酮的提取及鉴别方法 ,为定心藤进一步研究和资源开发利用提供一定的科学依据。方法　采用超声波乙醇浸提
法从定心藤中提取黄酮类物质 ,对所提取的黄酮类物质进行验证 ,并用分光光度法测定含量。结果　测得样品中总黄酮的含量C=0.5667mg·
mL-1 ,回收率为 99.8%,其纯度和产率均较高。结论　该方法采用全物理过程 ,无任何污染 ,是提取定心藤黄酮类物质的有效途径。
关键词:超声波提取;定心藤;总黄酮;鉴别
中图分类号:　文献标识码:A　文章编号:1006-3765(2008)-010-0065-03
作者简介:柯永建 ,男(1973.10-)。执业中药师。从事中药成分提取 ,联系电话:13075963685
Study on the extract ion process of total flavonoids from Mappianthu-
siodides Hand.Mazz by ultrasonic wave
KEYong-jian1 ,LERen-chang2(1.Fujian Longhua Pharmaceutical Co.Ltd , Fuzhou 350001 , China;2.Fujian Bio-
·65·
Strait Pharmaceutical Journal Vol 20 No.10 2008
engineering Professional Technology Inst itute ,Fuzhou 350002 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To establish methods of ext raction and identification for total flavonoids f rom Mappi-
anthusiodides Hand.Mazz.METHODS　The flavonoids were ex trated w ith ethanol as the solvent f rom Mappi-
anthusiodides Hand.Mazz.by ultrasonic w ave.Spect ropho tometry w as used to determine the flavonoids of Mappi-
anthusiodides Hand.Mazz.RESULTS　By this method the content of to tal f lavonoids of Mappianthusiodides
Hand.Mazz.was C=0.5667mg·mL-1 and the rate of recovery was 99.8%.This text provides the ext raction and
purification methods for the total flavanoids and the puri ty is high.CONCLUSION 　This method is a purely
phy sical process and has no pollution.It is an ideal w ay to ex tract the f lavonoids from M appianthusiodides Hand.
Mazz.
KEY WORDS:Ultrasonic wave treatment;Mappianthusiodides Hand.Mazz.;Total flavonoids;Identification
　　定心藤为广西瑶医常用药材铜钻 , 为茶茱萸科植物定心
藤 Mappianthusiodides Hand.MaZZ.的干燥藤茎。 瑶语称铜
钻 ,亦称黄钻 、黄麻骨风。用于治疗黄疸型肝炎 ,风湿痹痛 ,月
经不调 ,跌打损伤〔1〕。定心藤内含有黄酮等多种化学成分 ,目
前未见深入研究报道。
黄酮类物质具有抗肿瘤 、护肝 、抗炎 、抗病毒 、调解内分泌
系统等功效〔2〕。目前国际上对黄酮类化合物的研究开发十分
活跃 , 其产品的种类很多 ,在国际上的年销售额已达 10 亿美
元以上〔3〕。因此 ,本文对定心藤中黄酮类化合物超声波提取
工艺的研究 ,旨在为定心藤进一步研究和资源开发利用提供
一定的科学依据。
1　材料
1.1　仪器　KQ5200DB 型数控超声波清洗器(超声工作频率
40KHz ,江苏省昆山市超声仪器有限公司);T U 1901 型双光
束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司);
RE 52 型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);JA1003N 型电
子天平(上海精密科学仪器有限公司)。
1.2　试药　定心藤购自桂林药材市场 , 其藤茎自然风干后 ,
置于真空干燥箱 ,于 60℃干燥至恒重 , 粉碎后过 20 目筛。芦
丁对照品(中国药品生物制品检定所提供);蒸馏水 , 试剂均为
分析纯。
2　方法与结果〔4〕
2.1　总黄酮成分提取　取定心藤粉末约8g , 加 100m L 95%
乙醇 ,超声波提取 3h , 抽滤。滤渣再加100mL 95%乙醇 ,超声
波提取 3h ,抽滤。合并两次滤液 , 减压回收乙醇至滤液仅剩
25m L左右为止 , 放置 250mL 容量瓶中 , 用 60%乙醇稀释至
刻度 ,得样品液。
2.2　测定方法依据　以芦丁为对照品测定定心藤中总黄酮
的含量 , 加入铝离子试剂 , 同时控制适宜 pH 值 , 使黄酮化合
物与铝盐形成络合物 ,在可见光区能得到稳定的特征吸收峰。
2.3　总黄酮的含量测定
2.3.1　对照品的制备:精密称取芦丁对照品 25mg , 加乙醇适
量 ,使之充分溶解 , 用乙醇定容到 50mL 容量瓶中 , 摇匀。精
密量取 10m L ,置于 25m L 容量瓶中 , 用水稀释至刻度 , 摇匀 ,
即得(即每 1mL 含芦丁对照品 0.2mg)。
2.3.2　测定波长选择:精密量取芦丁对照液 4mL , 置于
25mL 容量瓶 , 加 5%亚硝酸钠溶液 1.0m L , 使混匀 , 放置
6min , 加 10%硝酸铝溶液 1.0m L , 摇匀 , 放置 6min , 加 1%氢
氧化钠溶液 10.0mL , 再加水至刻度 , 摇匀 , 放置 15min , 置于
比色皿中 , 在 400-600nm 波长之间测定吸收峰 , 确定最大吸
收波长为 510nm。
2.3.3　标准曲线的绘制:精密量取对照品溶液 0.0、1.0、
2.0 、3.0 、4.0 、5.0 、6.0m L , 分别置于 25mL 容量瓶 , 加水至
6mL , 加 5%亚硝酸钠 1.0mL ,使混匀 , 放置 6min ,加硝酸铝溶
液 1 0mL ,摇匀 , 放置 6min , 加 1%氢氧化钠 10.0mL , 再加水
至刻度 , 摇匀 ,放置 15min ,在 510nm 波长处测定吸收度。结
果见表 1。
表 1　分光光度法测定芦丁对照液结果
C(mg·mL -1) 吸光度
0 0
0.2 0.006
0.4 0.012
0.6 0.017
0.8 0.024
1 0.031
1.2 0.035
根据上表以芦丁浓度(x)与吸光度(Y)进行线性回归得
方程:Y=0.0298X-4×10-5(r=0.9997)。结果表明 , 芦丁
检测浓度在 0.2 ～ 1.2mg·mL-1范围内与吸光度呈良好的线
性关系。
2.3.4　提取物含量的测定:精密吸取样品液 1.0m L , 置
10mL 容量瓶中 ,按标准曲线的制备方法测得吸光度 , 并计算
样品中总黄酮的含量 C=0.5667mg·mL-1 。
2.3.5　回收率试验:精密量取样品液 2.0mL , 加入标准对照
品 2m L(0.20mg·mL-1), 同前样品测定方法操作测定吸光
度 , 求出回收率为 99.8%。
2.4　定性实验-总黄酮的鉴别〔5〕
2.4.1　颜色反应
紫外光下呈色反应:取该样品溶液点在滤纸上 , 在可见光
下呈灰黄色 , 在紫外光下呈灰褐色并有荧光斑点。
·66·
海峡药学　2008年　第 20卷 第 10期
钠汞齐反应:取该样品溶于乙醇溶液中 , 加入钠汞齐 , 加
热 ,过滤 , 滤液用盐酸酸化 ,显红色。
浓氨水反应:取该样品溶液点在滤纸上 , 将滤纸在氨水上
方熏 0.5min ,立即在紫外光下观察 , 呈极明显的黄褐色荧光
斑点。
三氯化铝反应:取样品溶液点在滤纸上 , 滴加 1%三氯化
铝乙醇溶液 ,吹干。在可见光下呈灰黄色 , 在紫外光下呈黄色
荧光斑点。
乙酸镁反应:取样品溶液点在滤纸上 , 滴加 1%乙酸镁甲
醇溶液 ,吹干 , 紫外光下呈黄色斑点。
盐酸-镁粉反应:取乙醇提取液 1m L 于试管中加镁粉 , 再
加入浓盐酸数滴(1 次加入), 在泡沫处呈紫红色。
2.4.2　纸层析:取样品溶液 10μL 点在滤纸上。用正丁醇∶
醋酸∶水=4∶1∶5(体积比)为展开剂 , 上行展开 5h , 取出 , 晾
干。喷 1%三氯化铝乙醇溶液。 吹干后于紫外光下 , 可见荧
光斑点。
3　讨论
本实验结果表明 , 本方法工艺简单 , 回收率达 99.8%, 超
声波提取可强化乙醇浸提法 ,达到省时 , 高效 ,节能的目的 , 还
可避免高温对提取成分的影响 ,因此用超声波提取定心藤中
总黄酮类物质 , 简单 ,可行。
参考文献
〔1〕周丽娜 ,藏斌.瑶药铜钻(定心藤)的生药鉴定〔J〕.广西中医药 ,
2002 , 25(2):48-50.
〔2〕蔡健 ,华景清 ,王薇等.黄酮提取工艺研究进展〔J〕.淮阴工学院
学报 , 2003 , 12(5):82.
〔3〕曾立 ,尹文清 ,王安伟等.正交试验优选定心藤中总黄酮提取与纯
化工艺〔J〕.中国药房 , 2008 , 19(6):418-420.
〔4〕黄锁义 ,罗建华 ,张丽丹等.香附总黄酮的超声波提取工艺研究
〔J〕.时珍国医国药 , 2008 , 19(1):141-142.
〔5〕匡海学主编.中药化学〔M〕.第 1版.北京:中国中医药出版社 ,
2003:146.
少林正骨精微生物限度检查方法验证试验
詹志红(福建漳州片仔癀药业股份有限公司 漳州 363000)
摘要:目的　建立少林正骨精微生物限度检查方法。方法　采用人工感染五种阳性菌株的方法 ,对少林正骨精进行细菌 、霉菌及酵母菌的计
数检验以及控制菌的检验。结果　细菌 、霉菌及酵母菌采用离心沉淀集菌法+稀释法的回收率均不低于 70%;控制菌采用离心沉淀集菌法检
验呈阳性。结论　少林正骨精的微生物限度检查细菌 、霉菌及酵母菌可采用离心+稀释法;控制菌可采用离心沉淀集菌法。
关键词:少林正骨精;方法验证实验;稀释法;离心沉淀集菌法
中图分类号:R927.12　文献标识码:A　文章编号:1006-3765(2008)-010-0067-03
作者简介:詹志红 , 女(1965-)。工程师。 1986 年毕业于国立华侨
大学化工系生化工程专业。联系电话:0596-2301605
　　少林正骨精是由接骨仙桃草 、当归 、五加皮 、羌活 、三棱
(醋制)、莪术(醋制)、土鳖虫 、艾叶 、延胡索(醋制)、花椒 、寻骨
风 、血竭 、乳香 、伸筋草 、活络草 、苏木 、薄荷脑 、樟脑 、冰片等二
十味中药组成的中药制剂 ,主要功能为活血祛瘀 , 消肿止痛 ,
祛风散寒。用于跌打损伤 , 积瘀肿痛 , 腰肢麻木 , 风湿骨痛。
由于中成药成分复杂 、有的还具有一定的抑菌性 , 因此 , 有必
要建立微生物限度检查方法 ,用于测定制剂中的微生物感染
程度 ,以保用药的有效性和安全性。实验结果表明 , 该方法简
便 ,结果准确 , 可用于少林正骨精的微生物限度检查。
1　实验材料
1.1　少林正骨精　由漳州片仔癀药业股份公司提供。
1.2　实验用菌种　枯草杆菌 CMCC(B)63501(第三代),金黄
色葡萄球菌 CMCC(B)26003(第三代),大肠埃希菌 CMCC(B)
44102(第三代),白色念珠菌 CMCC(F)98001(第三代), 黑曲
霉 CMCC(F)98003(第三代),沙门氏菌 CMCC(B)50094(第三
代)省药检所提供。
2　方法和结论
2.1　细菌 、霉菌计数方法〔1〕
2.1.1　菌液制备:①接种金黄色葡萄球菌 、大肠埃希菌 、枯草
芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中 , 经 30 ～ 35℃培
养 18～ 24h 后 , 分别取金黄色葡萄球菌 、大肠埃希菌 、枯草杆
菌的肉汤培养物 1mL+9m L 0.9%无菌氯化钠溶液 , 10 倍稀
释至 10-6 ～ 10-7 , 细菌数约为 50 ～ 100cfu·mL -1 , 做活菌计
数备用。 ②接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基
中 , 经 23 ～ 28℃培养 24 ～ 48h 后 , 取白色念珠菌液体培养物
1mL+9mL 0.9%无菌氯化钠溶液 , 10 倍稀释至 10-4～ 10-7 ,
菌数约为 50 ～ 100cfu·m L-1 , 做活菌计数备用。 ③接种黑曲
霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中 , 经 23 ～ 28℃
培养 5 ～ 7d 后 ,取黑曲霉斜面培养物 ,加 3 ～ 5mL 0.9%无菌
氯化钠溶液将孢子洗脱 , 吸出孢子悬液 1mL+9mL 0.9%无
菌氯化钠溶液 , 10 倍稀释至 10-4 , 菌数约为 50 ～ 100cfu·
mL
-1 , 做活菌计数备用。
2.1.2　供试液制备　取供试品 10m L ,加 pH7.0 无菌氯化钠-
蛋白胨水缓冲液至 100mL ,混匀 ,作为 1∶10 供试液 ,备用。
2.1.3　细菌 、霉菌计数:①常规法:取供试液 1mL , 置直径约
·67·
Strait Pharmaceutical Journal Vol 20 No.10 2008