全 文 ：·228· Evaluation and analysis of drug-use in hospitals of China 2014 Vol． 14 No． 3 中国医院用药评价与分析 2014 年第 14 卷第 3 期
櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵
总之，经过方法学考察，结果表明，此方法简便、准确、无阴
性干扰，能有效控制黄龙止咳颗粒的质量。
参考文献
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* 副主任药师。研究方向:药品质量分析。E-mail:zhaoqinghua918
@ sina． com
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gongweicn@ foxmail． com
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地锦喷雾剂的质量标准研究Δ
赵庆华1* ，孙 旭1，赵 豫2，王瑜真3，陈 瑶1，张振兴1，王爱武4，巩 伟1#(1．济南军区联勤部药品仪器检验
所，济南 250022;2． 解放军 72433 部队门诊部，济南 251000;3． 济南军区总医院药剂科，济南 250031;
4．山东大学附属省立医院药剂科，济南 250021)
中图分类号 Ｒ927. 11 文献标志码 B 文章编号 1672 － 2124(2014)03 － 0228 － 04
摘 要 目的:建立地锦喷雾剂的质量标准。方法:采用薄层色谱法鉴别地锦草、丁香、紫花地丁、白鲜皮;采用高效液相色谱法测
定芦丁和槲皮素的含量。结果:薄层色谱特征明显，斑点清晰，分离度好;芦丁在 6. 103 1 ～ 195. 299 0 μg /ml范围内线性关系良好
(r = 0. 999 9，n = 6) ，平均回收率为 98. 81%(ＲSD = 1. 10%，n = 9) ;槲皮素在 6. 176 0 ～ 197. 632 0 μg /ml范围内线性关系良好(r =
1. 000 0，n = 6) ，平均回收率为 98. 35%(ＲSD = 1. 02%，n = 9)。结论:本文所建立的方法操作方便、结果准确、专属性强，可用于地
锦喷雾剂的质量控制。
关键词 地锦喷雾剂;质量标准;薄层色谱法;高效液相色谱法;芦丁;槲皮素
Study on the Quality Standard of Euphorbia Humifusa Spray
ZHAO Qing-hua1，SUN Xu1，ZHAO Yu2，WANG Yu-zhen3，CHEN Yao1，ZHANG Zhen-xing1，
WANG Ai-wu4，GONG Wei1#(1． Institute for Drug and Instrument Control，Joint Logistics Department
of the Jinan Military Ｒegion，Ji’nan 250022，China;2． The Outpatient Department of No． 72433 Force
of PLA，Ji’nan 251000，China;3． Dept． of Pharmacy，General Hospital of Jinan Military Ｒegion，Ji’nan
250031，China;4． Dept． of Pharmacy，Shandong Provincial Hospital Affiliated to Shandong University，
Ji’nan 250021，China)
ABSTＲACT OBJECTIVE:To establish the quality standard of Euphorbia Humifusa Spray． METHODS:Euphorbiae
Humifusae Herba，Caryophylli Flos，Viola Yedoensis and Dictamni Cortex were identified by TLC． The contents of
eldrin and quertetin were determined by HPLC． ＲESULTS:The TLC was characteristic and well-separated with clear
spots． Eldrin showed a good linear relationship at a range of 6. 103 1-195. 299 0 μg /ml(r = 0. 999 9，n = 6)with an
average recovery of 98. 81%(ＲSD = 1. 10%，n = 9) ;quertetin showed a good linear relationship at a range of 6. 176
0-197. 632 0 μg /ml(r = 1. 000 0，n = 6)with an average recovery of 98. 35%(ＲSD = 1. 02%，n = 9)． CONCLUSION:
The established method is convenient in operation，accurate in results with strong specificity and it thus can be applied
for the quality control of Euphorbia Humifusa Spray．
KEYWOＲDS Euphorbia Humifusa Spray;Quality standard;TLC;HPLC;Eldrin;Quertetin
中国医院用药评价与分析 2014 年第 14 卷第 3 期 Evaluation and analysis of drug-use in hospitals of China 2014 Vol． 14 No． 3 ·229·
地锦喷雾剂是皮肤科常用的一种传统中药制剂，具有清湿
热、解毒、止痛、止痒作用，临床上常用于治疗皮肤、黏膜、腔道炎
症、疱疹等，效果较好。该制剂为济南军区医疗机构制剂［批准
文号:济制字(2011)F10675］，主要由地锦草、丁香、紫花地丁、
白鲜皮等组成，目前尚缺乏该制剂的质量控制标准。该制剂处
方中，地锦草为君药。地锦草具有抗菌、抗炎、抗氧化、抗过敏、
免疫调节、保肝、止血等多种作用，其化学成分有黄酮、三萜、香
豆素、甾醇、鞣质及酚酸类等化合物，其中黄酮类为其主要活性
成分［1-3］。为更有效地控制该制剂的质量，本研究对方中的地
锦草、丁香、紫花地丁、白鲜皮进行薄层色谱鉴别，对黄酮类成分
芦丁和槲皮素用高效液相色谱法进行含量测定，报道如下。
1 材料
1. 1 仪器
LC-20A高效液相色谱仪(SPD-20A 紫外检测器，SIL 20A
自动进样器，日本岛津公司生产) ;AUW220D 电子分析天平
(日本岛津公司生产) ;TLA-1 薄层观察分析仪(湖南长沙克罗
玛科技有限公司生产) ;AS-3120A超声波清洗器(天津奥特赛
恩斯仪器有限公司生产，功率 250 W，频率 40 kHz) ;Synergy-
UV超纯水器(法国 Millipore公司生产)。
1. 2 药品与试剂
地锦草对照药材(批号:121552-200902) ，丁香对照药材
(批号:121039-201004) ，紫花地丁对照药材(批号:121429-
201003) ，白鲜皮对照药材(批号:120978-200604) ，丁香酚对照
品(批号:110725-201112) ，芦丁对照品(批号:100080-200707，
供 HPLC法测定时含量按 90. 5%计算) ，槲皮素对照品(批号:
100081-200907，供 HPLC法测定时含量按 96. 5%计算) ，以上
对照药材与对照品均来源于中国食品药品检定研究院;甲醇、
磷酸为色谱纯(国药集团化学试剂有限公司提供) ，水为自制
超纯水，其他试剂均为分析纯。地锦喷雾剂为 2013 年度抽验
品种(3 批，批号:20120926、20121106、20121225) ;阴性对照制
剂由该制剂生产单位配制提供。
2 方法与结果
2. 1 薄层色谱鉴别
2. 1. 1 地锦草［4-5］:取本品 10 ml，蒸干，残渣加甲醇 1 ml 溶
解，作为供试品溶液。取缺地锦草的阴性对照制剂 10 ml，同
法制成阴性对照溶液。取地锦草对照药材 1 g，加 80%甲醇
30 ml，加热回流 1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇 1 ml 使溶
解，作为对照药材溶液。吸取上述溶液各 10 μl，分别点于同
一硅胶 G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5∶ 4. 5∶ 0. 5)为展
开剂，展开，取出，晾干，喷以 3%三氯化铝乙醇溶液，在 105 ℃
加热数分钟，置紫外光灯(254 nm)下检视。供试品色谱中，在
与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性
无干扰，见图 1。
2. 1. 2 丁香［4，6］:取本品 10 ml，于分液漏斗中，加环己烷萃取
2 次，每次 5 ml，合并环己烷液，作为供试品溶液。取缺丁香的
阴性对照制剂 20 ml，同法制成阴性对照溶液。取丁香对照药
材 1 g，同法制成对照药材溶液。取丁香酚对照品，加乙醚制
成每 1 ml含 20 μg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述溶液
1．地锦草对照药材溶液;2-4．供试品溶液;5．阴性对照溶液
1． standard Euphorbia Humifusa solution;2-4． test solution;
5． negative control solution
图 1 地锦草的薄层色谱鉴别
Fig 1 TLC identification of Euphorbia Humifusa
各 10 μl，分别点于同一硅胶 G 薄层板上，以石油醚(60 ～
90 ℃)-乙酸乙酯(9∶ 1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 5%
香草醛硫酸溶液，在 105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色
谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应位置上，显相同颜
色的斑点，阴性无干扰，见图 2。
1．丁香酚对照品溶液;2．丁香对照药材溶液;
3-5．供试品溶液;6．阴性对照溶液
1． standard eugenol solution;2． standard Caryophylli Flos;
3-5． test solution;6． negative control solution
图 2 丁香的薄层色谱鉴别
Fig 2 TLC identification of eugenol
2. 1. 3 紫花地丁［4，7］:取本品 10 ml，蒸干，残渣加甲醇 1 ml溶
解，作为供试品溶液。取缺紫花地丁的阴性对照制剂 10 ml，
同法制成阴性对照溶液。取紫花地丁对照药材 1 g，加甲醇
20 ml，超声处理 20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加热水 10 ml，搅
拌使溶解，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇 l ml 使溶解，作为对照
药材溶液。吸取上述溶液各 10 μl，分别点于同一硅胶 G薄层
板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5∶ 3∶ 1)的上层溶液为展开剂，展
开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，
在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点，
阴性无干扰，见图 3。
2. 1. 4 白鲜皮［4，8］:取本品 10 ml，蒸干，残渣加甲醇 1 ml溶解，
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1．紫花地丁对照药材溶液;2-4．供试品溶液;5．阴性对照溶液
1． standard viola yedoensis;2-4． test solutions;
5． negative control solution
图 3 紫花地丁的薄层色谱鉴别
Fig 3 TLC identification of viola yedoensis
作为供试品溶液。取缺白鲜皮的阴性对照制剂10 ml，同法制成
阴性对照溶液。取白鲜皮对照药材 1 g，加甲醇 20 ml，超声处理
30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇 l ml使溶解，作为对照药材
溶液。吸取上述溶液各 5 μl，分别点于同一硅胶 G 薄层板上，
分别点于同一硅胶 G 薄层板上，以甲苯-环己烷-乙酸乙酯
(3∶ 3∶ 3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 5%香草醛硫酸溶液，
在 105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材
色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰，见图 4。
1．白鲜皮对照药材溶液;2-4．供试品溶液;5．阴性对照溶液
1． standard Dictamni Cortex solution;2-4． test solutions;
5． negative control solution
图 4 白鲜皮的薄层色谱鉴别
Fig 4 TLC identification of Dictamni Cortex
2. 2 芦丁和槲皮素的含量测定
2. 2. 1 色谱条件:色谱柱为 Intersil ODS3(250 mm × 4. 6 mm，
5 μm) ;流动相为甲醇-0. 4%磷酸溶液(45∶ 55) ;柱温为 30 ℃;
体积流量为 1. 0 ml /min，检测波长为 360 nm。理论塔板数按
芦丁峰计算应不低于 400 0。色谱图见图 5。
2. 2. 2 对照品溶液的制备:精密称取芦丁对照品 10. 79 mg，
置 10 ml量瓶中，加甲醇制成质量浓度为 976. 495 μg /ml 的芦
丁对照品贮备液;精密称取槲皮素对照品 10. 24 mg，置 10 ml
1．芦丁;2．槲皮素;A．混合对照品溶液;
B．供试品溶液;C．阴性对照溶液
1． eldrin;2． quercetin;A． mixed control solutions;B． test solution;
C． negative control solution
图 5 高效液相色谱图
Fig 5 HPLC chromatogram
量瓶中，加甲醇制成质量浓度为 988. 16 μg /ml 的槲皮素对照
品贮备液。精密量取上述 2 种对照品贮备液各 2 ml，置 10 ml
量瓶中，加甲醇制成混合对照品溶液。
2. 2. 3 供试品与阴性对照溶液的制备:取本品 20 ml，置 50 ml量
瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
取缺地锦草的阴性对照制剂 20 ml，同法制得阴性对照溶液。
2. 2. 4 线性关系考察:精密量取混合对照品溶液 5 ml，置10 ml
量瓶中，加甲醇稀释至刻度;同法依次倍比稀释 4 次，共得到
6个混合对照品溶液。取上述 6 个混合对照品溶液各10 μl，注
入液相色谱仪，记录峰面积。以质量浓度(μg /ml)为横坐标
(X)、峰面积为纵坐标(Y) ，绘制标准曲线，得芦丁的回归方程
为 Y =37 019 X +30 704(r =0. 999 9，n =6) ，槲皮素的回归方程
为 Y =83 351 X －65 812(r =1. 000 0，n =6)。结果表明，芦丁在
6. 103 1 ～195. 299 0 μg /ml质量浓度范围内线性关系良好，槲皮
素在 6. 176 0 ～197. 632 0 μg /ml质量浓度范围内线性关系良好。
2. 2. 5 精密度试验:精密吸取同一混合对照品溶液，进样量
为 10 μl，连续进样 6 次。结果表明，芦丁和槲皮素峰面积 ＲSD
分别为 0. 37%、0. 83%，表明仪器精密度良好。
2. 2. 6 重复性试验:取批号为 20120926 的样品，按“2. 2. 3”项
下方法制备，平行试验 6 份。结果芦丁的平均含量为 33. 098 3
μg /ml，ＲSD = 0. 69%(n = 6) ，槲皮素的平均含量为 25. 949 5
μg /ml，ＲSD = 1. 69%(n = 6) ，表明方法重复性良好。
2. 2. 7 稳定性试验:精密吸取同一供试品溶液 10 μl，于 0、2、
4、8、12、24 h 分别测定峰面积。结果，芦丁峰面积的 ＲSD 为
1. 08%，槲皮素峰面积的 ＲSD为 1. 11%，表明供试品溶液 24 h
内稳定性良好。
2. 2. 8 加样回收率试验:精密量取已知含量的样品(批号:
中国医院用药评价与分析 2014 年第 14 卷第 3 期 Evaluation and analysis of drug-use in hospitals of China 2014 Vol． 14 No． 3 ·231·
20120926)9 份，每份 10 ml，分别置 50 ml 量瓶中，分别精密加
入芦丁对照品溶液(33. 2008 μg /ml)和槲皮素对照品溶液
(25. 692 2 μg /ml) (各 8 ml、10 ml、12 ml) ，按“2. 2. 3”项下方
法制备，测定峰面积并计算回收率，结果见表 1。
表 1 加样回收率试验结果(n =9)
Tab 1 Ｒesults of recovery tests(n =9)
对照品
样品中
含量 /μg
对照品加
入量 /μg
实测值 /
μg
回收率 /
%
平均回
收率 /%
ＲSD /
%
芦丁 330. 983 0 265. 606 4 591. 897 6 98. 23 98. 81 1. 10
330. 983 0 265. 606 4 594. 610 8 99. 26
330. 983 0 265. 606 4 590. 432 1 97. 68
330. 983 0 332. 008 0 659. 746 7 99. 02
330. 983 0 332. 008 0 655. 812 6 97. 84
330. 983 0 332. 00 0 664. 891 2 100. 57
330. 983 0 398. 409 6 722. 392 1 98. 24
330. 983 0 398. 409 6 731. 102 9 100. 43
330. 983 0 398. 409 6 721. 398 7 97. 99
槲皮素 259. 495 0 205. 537 6 462. 128 9 98. 59 98. 35 1. 02
259. 495 0 205. 537 6 460. 234 8 97. 67
259. 495 0 205. 537 6 460. 129 8 97. 61
259. 495 0 256. 922 0 512. 345 8 98. 42
259. 495 0 256. 922 0 518. 189 7 100. 69
259. 495 0 256. 922 0 511. 786 4 98. 20
259. 495 0 308. 306 4 560. 344 3 97. 58
259. 495 0 308. 306 4 560. 239 6 97. 55
259. 495 0 308. 306 4 564. 345 6 98. 88
2. 2. 9 样品含量测定:取 3 个批号的样品，按“2. 2. 3”下方法
制备，分别精密吸取供试品溶液各 10 μl，注入液相色谱仪，测
定，计算含量，结果见表 2。
表 2 样品含量测定结果(n =3)
Tab 2 Ｒesults of content determination of samples(n =3)
批号 芦丁 /(μg /ml) ＲSD/% 槲皮素 /(μg /ml) ＲSD/% 总含量 /(μg /ml)
20120926 33. 098 3 0. 69 25. 9495 1. 69 59. 047 8
20121106 32. 667 8 0. 87 25. 7367 1. 12 58. 404 5
20121225 33. 897 6 0. 95 26. 1112 1. 08 60. 008 8
3 讨论
3. 1 薄层色谱鉴别
通过参考文献中对地锦草、丁香、紫花地丁、白鲜皮的薄
层鉴别的报道，确定了薄层色谱条件，在各自试验条件下色谱
特征明显，斑点清晰，阴性无干扰，故认为在试验条件下用薄
层色谱法对制剂中的地锦草、丁香、紫花地丁、白鲜皮进行鉴
别是可行的。
其中，在鉴别地锦草时，用乙醚做溶剂提取对照药材，效果
并不好，最后选用甲醇作为提取溶剂，色谱图较为清晰，分离较
好;在鉴别丁香时，因丁香酚等成分具有良好的挥发性，不能使
用蒸干法制备供试品溶液。试验中考察了乙醚萃取、正己烷萃
取，制备效果均不理想，最后选用环己烷萃取，萃取效果较好;在
鉴别紫花地丁、白鲜皮时，对照药材溶液的制备考察了加热回
流法和超声提取法，经对比，两者色谱效果差异并不明显，效果
均较好，故选用用时更短、操作更为简便的超声提取法提取。
3. 2 含量测定
本制剂处方中，地锦草为君药。以芦丁和槲皮素为代表的
黄酮类成分为地锦草的主要有效活性成分。结合《中华人民共
和国药典》中地锦草的含量测定方法［4］和文献报道［9-11］，本试
验采用 HPLC法测定芦丁和槲皮素的含量，并用两者的量的和
来表征制剂中黄酮类成分的含量。结果表明，样品中芦丁和槲
皮素的总含量分布在 60 μg /ml 左右。需要进一步扩大试验批
次，积累数据，从而确定样品中芦丁和槲皮素的含量限度。
选择测定波长时，用二极管阵列检测器扫描色谱图，发现
黄酮类成分在测定波长为 360 nm时峰形和分离度均良好，故
选用 360 nm为测定波长。
选择流动相时，对比考察了乙腈-0. 2% 醋酸溶液
(50∶ 50)、甲醇-0. 4%磷酸溶液(45∶ 55)、甲醇-0. 2%磷酸溶液
(60∶ 40)等 3 种流动相，并考察了梯度洗脱模式。结果表明，
选择甲醇-0. 4%磷酸溶液(45 ∶ 55)为流动相时目标成分的响
应值最好，峰形良好，理论板数、分离度、拖尾因子等均符合要
求，阴性无干扰。
综上所述，本试验建立的质量标准方法方便、结果准确、
专属性强，可用于地锦喷雾剂的质量控制。
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(收稿日期:2013-12-27)