全 文 ：新中医 2015年 11月第 47卷第 11期
JOURNAL OF NEW CHINESE MEDICINE November 2015 Vol.47 No.11
◆实验研究论著◆
［收稿日期］ 2015-03-29
［基金项目］湖南省科技厅（2013SK3108）；杨永华全国名老中医药专家传承工作室
［作者简介］蔡萍（1975－），女，副研究员，主要从事中药资源、中药制剂及质量标准研究。
［通讯作者］匡建军，E-mail：973541411@qq.com。
腰椎间盘突出症(lumbar intertebal disc hemiationn，
LDH)是在腰椎间盘发生退行性改变的基础上，纤维环破裂，
髓核突出刺激或压迫神经根、马尾神经或脊髓所表现的一种综
合征，是腰痛和坐骨神经痛的常见病因之一，也是骨科常见
铁包金按摩膏对腰椎间盘突出症大鼠腰背
脊神经根中 PLA2 影响的实验研究
蔡萍 1，戎宽 1，杨惠 2，胡余飞 2，匡建军 1
1. 湖南省中医药研究院，湖南 长沙 410006；2. 湖南中医药大学，湖南 长沙 410208
［摘要］目的：观察铁包金按摩膏对腰椎间盘突出症（LDH） 大鼠突出的椎间盘节段脊背神经根中磷脂酶 A2（PLA2） 的调节
作用。方法：健康 SD大鼠 48只，采用随机数法将大鼠分为空白组、铁包金组、狗皮膏组和模型组，每组 12只。采用注射法建
立非压迫型腰椎间盘髓核突出大鼠模型，造模成功后分别对各组进行相应处理：空白组模拟手术后正常饲养；铁包金组予铁包金
按摩膏局部治疗；狗皮膏组采用狗皮膏外贴治疗；模型组给予凡士林局部对比治疗；分别测量治疗 1周、2周、3周后各组 LDH
大鼠相应椎间盘节段脊背神经根中 PLA2的活性并对数据进行统计学分析。结果：给药 1周、2周、3周，各组 PLA2活性均高于
空白组（P ＜ 0.05）。给药 2周，铁包金组、狗皮膏组均低于模型组（P ＜ 0.05）；给药 3周铁包金组、狗皮膏组 PLA2均低于给药 1
周（P ＜ 0.05）。结论：铁包金按摩膏具有降低非压迫性髓核突出大鼠模型相应节段脊背神经根中 PLA2活性的作用。
［关键词］腰椎间盘突出症；铁包金按摩膏；大鼠；磷脂酶 A2（PLA2）
［中图分类号］R285.5 ［文献标志码］A ［文章编号］0256-7415（2015） 11-0194-03
DOI：10.13457/j.cnki.jncm.2015.11.087
Research of Gold Plated Iron Massage Cream on PLA2 in Intervertebral Disc Segmental
Spinal Nerve Root of Rat Models of Lumbar Disc Herniation
CAI Ping，RONG Kuang，YANG Hui，HU Yufei，KUANG Jianjun
Abstract：Objective：To Investigate the regulating effect of Gold plated iron massage cream on Phospholipase A2 (PLA2)
in intervertebral disc segmental spinal nerve root of rat models of lumbar disc herniation(LDH).Me hods：Forty healthy SD
rats，using random numbers，were divided into the blank group，gold plated iron massage cream(GP)group，dog-skin plaster
(DP) group and the model group，12 cases in each group. Injection was adopted to establish the non-pressure lumbar nucleus
pulposus prominent rat model. After the success of building models，each group was treated corresponding processing
respectively：The GP group with local treatment of GP，the DP group with DP stick，the model group with Vaseline
treatment. The blank group normally fed without injection. The active of PLA2 in intervertebral disc segmental spinal nerve root
was detected 1-week， 2-week， 3-week after treatment.Results： The active of PLA2 in each group 1-week，
2-week，3-week after treatment was higher than that in the blank group(P < 0.05). In GP group and DP group，the active of
PLA2 2-week，3-week after treatment was lower than that in the model group. That 3-week in GP group and DP group after
treatment was lower than that 1-week in GP group and DP group(P < 0.05).Conclusion：GP can effectively decrease PLA2 in
non-pressure lumbar nucleus pulposus prominent rat model．
Keywords：Lumbar disc herniation (LDH)；Gold plated iron massage cream；Rats；Phospholipase A2(PLA2)
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新中医 2015年 11月第 47卷第 11期
JOURNAL OF NEW CHINESE MEDICINE November 2015 Vol.47 No.11
病、多发病[1]。本实验通过观察铁包金按摩膏对LDH大鼠突出
的椎间盘节段脊背神经根中磷脂酶A2(PLA2)的调节作用，为
铁包金按摩膏提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 试剂与仪器 PLA2试剂盒由美国的R&Dsystems公司
(批号803217)提供。冻存管，型号：IMCE，规格：1mL。亚
西牌液氮生物容器：川食药械监督生产。超低温试验室冰箱：
型号：Ultra-Low，公司：中科美菱科技有限公司。高速电动
匀浆器：型号：FSH-II型，公司：江苏金坛市环宇科学仪器
厂。台式高速冷冻离心机：型号：Neofuge23R；移液枪：规
格：20～200μL，美龙科技有限公司；数显恒温水箱：型号：
HH-S1，常州恒隆仪器有限公司；自动酶标仪：型号：
SynergyHT，公司：USABioTek；全自动速冻脱水机：型号：
LEICAAPS200S，武汉中纪科学仪器有限公司；其他：组织
剪、咬骨钳、持针器、缝针、量杯、注射器、微量进样器等均
由湖南中医药研究院提供。
1.2 动物分组及处理 选择健康SD大鼠48只，雌雄各半，
体重200～220g由湖南中医药研究院实验动物中心提供，合
格证号(20041028)。将上述 48 只 SD 大鼠按雌雄分别称重，
并按体重大小标记编号；用随机数字表法分为模型组、铁包金
按摩膏(铁包金)组、狗皮膏组、空白组(假手术组)，每组 12
只。大鼠神经根模型建立[2]：取模型组、铁包金组、狗皮膏组
大鼠共36只，体重约200g。自体髓核制备：1%氯胺酮50
mg/kg腹腔麻醉，对大鼠被毛，消毒，铺巾，距尾根1cm处
剪短尾巴并缝合，切开尾椎取出5个髓核约50mg放置于无
菌0.5mLEP管中加入50μL生理盐水充分搅拌成混悬液备用
(备用悬浊液置于0℃冰箱暂存)。模型建立：大鼠均采用右屈
曲侧卧位，以腰椎4、5棘突间为穿刺点，被毛常规皮肤络合
点消毒，消毒完毕后沿腰4、5棘间穿刺点用9号穿刺针行硬
膜外穿刺，进针时垂直穿透皮肤后针尖向尾椎方向倾斜约
75℃角缓慢进针，进针深度约3mm后可有落空感；穿刺成
功后取出穿刺针内芯管，用微量注射器先注入20μL髓核混悬
液，接着注入30μL2%利多卡因。用1%氯胺酮50mg/kg腹
腔注射可使大鼠麻醉约30min。假手术组按上述造模准备方
法，切除尾椎，硬膜外穿刺成功后依次注射20μL生理盐水及
30μL 2%利多卡因。术后注射青霉素 4.4 万 U/d 预防感染。
造模成功判定：麻醉持续约30min后恢复，观察如果造模大
鼠双前肢活动自如双后肢活动功能减退或消失，继续观察
20～30min后完全恢复则表明硬膜外注射成功。术后3天给
予青霉素肌注，4.4万U/d(按《动物实验学》2.2万 U/100g)
预防感染。给药方法：正常饲养后根据体表换算方法，取同等
治疗量(相当于临床等效剂量)药物(参照《中药药理实验方法
学》的方法换算透皮贴剂的有效药物浓度，计算出用药量约合
6.25g/kg)涂抹于给药部位，并轻揉数分钟。每天用药一次(模
型组给与相应量凡士林)。每次给药部位及面积为以腰4、5棘
突间为中心做半径1.5cm的圆。空白组假手术后不作外用药
处理。
1.3 PLA2 的检测 取材方法：上述 4 组分别于术后 7 天、
14 天、21 天各随机取 4 只大鼠，10%水合氯醛(300～ 5 )
mg/kg腹腔注射深度麻醉后取材。取出腰5背根神经节组织，
放入4％的多聚甲醛中固定，取出相应节段对侧神经根组织约
20mg，置于1mL的冻存管中，予以液氮速冻，-80℃下保存
待测。检测方法：采用微孔比色法测定组织中PLA2的活性。
将所需试剂及待测样本置于37℃恒温水浴育温10min。取相
应数量聚苯乙烯板，3小孔为一单元每小孔分别标注为测定
孔、对照孔、空白孔。分别于测定孔中加入工作液 160μL，
样本40μL；对照孔中加入对照液160μL，样本40μL；空白
孔中加入基础液 160μL，蒸馏水 40μL；37℃恒温箱中温育
60min。取出聚苯乙烯板，于自动酶标检测仪中空白孔调零，
于波长410nm上读取各孔的OD值。样品的PLA2活性可根
据其OD值由标准曲线及回归方程式换算出相应的活性。酶活
力计算：A单元PLA2活力(IU/mL)＝12.25×(A测定孔值－A
对照孔值)。
1.4 统计学方法 应用SPSS19.0统计学软件进行分析，实
验结果所有数据均采用(x±s) 表示，多组间均数比较用单因素
方差分析，组间两两比较方差齐者用LSD检验。
2 结果
2.1 一般情况 实验过程中，铁包金组有1只大鼠正常麻醉
剂量下死亡，考虑个体差异所致，这与实验过程中观察到有极
个别大鼠麻醉剂量甚至超出正常2/3情况类似；空白组1只大
鼠手术后观察发现右后肢功能散失，术后一天无明显恢复迹
象，考虑注射损伤右侧脊背神经根可能；手术后各组大鼠未出
现伤口大量流血或伤口感染现象；各组治疗期间未有大鼠出现
死亡。造模及治疗1周结束后，各组大鼠数量如下：空白组
11只、狗皮膏组12只、模型组12只、铁包金组11只。造
模结束后各组大鼠均未出现双后肢活动障碍、爬行异常或跛行
的现象，运动损害功能评分计0分。
2.2 各组 PLA2活性比较 见表1。给药1周、2周、3周，
各组 PLA2活性均高于空白组(P＜0.05)。给药 2周，铁包金
组、狗皮膏组均低于模型组(P＜0.05)；给药 3 周铁包金组、
狗皮膏组PLA2均低于给药1周(P＜0.05)。
表 1 各组 PLA2活性比较(x±s) IU／mL
与空白组比较，①P ＜ 0.05；与模型组比较，②P ＜ 0.05；
与 1周比较，③P ＜ 0.05
组 别
空白组
铁包金组
狗皮膏组
模型组
样本数
11
11
12
12
1周
2.22±0.89
8.67±1.46①
9.06±1.57①
12.15±1.53①
2周
2.29±0.86
6.41±0.98①②
6.30± .89①②③
11.74±1.05①③
3周
1.92±0.80
4.24±0.95①②③
4.07±0.89①②③
10.03±0.76①
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3 讨论
LDH属于中医学腰痹范畴，病机多从脏腑、运气理论及
经络理论阐述，病因多与外伤、慢性劳损、外感风寒湿热之邪
有关。中医治疗腰痹辨证主要为血瘀、寒湿、湿热、肝肾亏
虚。治疗上内以中药汤剂，疏经活络、调气和血、补肾强筋；
外敷膏散之剂，活血散瘀、软坚散结、祛风止痛；辅以针灸推
拿理伤手法，整脊、梳肌、复原止痛，对腰痹引起的一系列症
状起到了很好的治疗作用。因此从中医学宝库中挖掘能进一步
提高防治LDH的药物、方法，是医学工作者的一个重大研究
方向。
椎间盘突出的概念首先由Goldthwaitn[4]依据临床经验在
1911年提出。临床上治疗采取单纯以解除椎间盘突出压迫为
主的腰椎间盘切除术并不能全部有效缓解疼痛，然而一些服用
非甾体类抗炎止痛药的患者症状却能得到明显的缓解，提示炎
性因子在LDH中可能发挥着重要作用。因此如何消除这些炎
症介质及细胞因子，减轻神经根炎症反应成为治疗LDH的关
键。
本实验动物模型，模拟了LDH中髓核对脊神经根化学性
刺激的病理改变；结果模型组大鼠脊背神经根中PLA2活性明
显升高，与空白组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)；铁包金
组、狗皮膏组在1、2、3周均有降低脊背神经根中PLA2活性
的作用，与模型组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。狗皮膏
组与铁包金组比较，差异无统计学意义(P﹥0.05)。铁包金按摩
膏与狗皮膏均能降低相应节段脊背神经根中PLA2的活性，提
示铁包金按摩膏对LDH的作用机制之一与PLA2的活性有关。
利用实验动物模型模拟LDH症状是目前相关实验的一个
难题。其中包括两项重要原因：一是突出髓核的直接压迫改变
导致的受压神经根缺血缺氧改变；二是突出髓核免疫源性引起
的神经激惹症状[5]。两种发病因素很难在一个动物模型中兼
顾，因此本实验验证铁包金按摩膏治疗 LDH 对炎性因子
PLA2的作用机制具有局限性，但是对研究外用药物治疗LDH
机理研究有重要意义；铁包金按摩膏是在传统按摩手法与中医
外用膏药结合的创新思想下产生的，本实验未对其进行分述研
究，因此不能说明铁包金膏药与手法按摩之间的关系。
综上，铁包金按摩膏对LDH的机制还需要进一步深入研
究。本实验通过采用自体髓核注射法建立大鼠LDH神经根刺
激模型，方法可靠，操作相对简单。实验证明了铁包金按摩膏
具有降低非压迫性髓核突出大鼠模型脊背神经根中PLA2活性
的作用，这可能是其在临床上发挥治疗LDH的作用机制之一。
目前对LDH引起腰腿痛的炎症及免疫机制中的启动环节研究
甚少。寻找生物学炎症反应瀑布效应的上游机制，并对上游因
素进行干预，对腰椎间盘源性腰腿痛更早起到治疗作用意义重
大。这也符合现代医学早期干预、预防为主的防治思想。
［参考文献］
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（责任编辑：骆欢欢）
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