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冠盖藤对骨性关节炎大鼠足组织前列腺素E_2含量及形态学的影响



全 文 :要物质基础,并有明显的神经保护作用。近年来研究发现,β-
细辛醚对 β-淀粉样蛋白诱导的 PC12 细胞凋亡〔4〕。本研究推
测 β-细辛醚可能通过抑制促进凋亡蛋白 Bax 表达和上调凋亡
抑制蛋白 Bcl-2 表达,使其比值达到相对平衡,减少 AS的凋亡,
从而发挥神经保护作用。
4 参考文献
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〔2015-03-25 修回〕
(编辑 李相军)
冠盖藤对骨性关节炎大鼠足组织前列腺素 E2 含量及形态学的影响
秦莉花1 李 晟 钟华美2 陈晓阳2,3 吴艳飞2,3 黄 宽2,3 秦莉峰4
(湖南中医药大学药学院,湖南 长沙 410208)
〔摘 要〕 目的 探讨冠盖藤水提取物对骨性关节炎大鼠足组织前列腺素 E2(PGE2)含量及形态学的影响。方法 采用弗氏完全佐剂制备骨
性关节炎模型,将随机造模成功后大鼠随机分为模型组,雷公藤多甙片组,冠盖藤水提取物高、中、低剂量组。经药物干预 28 d后,观察足趾组织形态
学及检测组织 PGE2 含量。结果 冠盖藤水提取物高、中剂量组大鼠膝关节软骨退变较模型组和冠盖藤水提取物低剂量组轻,仅软骨表面细胞轻度
纤维化。与正常组比较,模型组大鼠 PGE2 含量升高,经冠盖藤水提取物治疗后 PGE2 含量明显降低,并且以高剂量组最明显。结论 冠盖藤的抗炎
镇痛机制之一可能通过降低组织中 PGE2 含量。
〔关键词〕 冠盖藤;骨性关节炎;前列腺素 E2;组织形态学
〔中图分类号〕 R268 〔文献标识码〕 A 〔文章编号〕 1005-9202(2016)03-0568-02;doi:10. 3969 / j. issn. 1005-9202. 2016. 03. 023
基金项目:湖南省中医药管理局项目(2009033,201232) ;湖南省教育厅
中药学重点学科项目
1 湖南中医药大学护理学院
2 湖南省教育厅中药现代化研究重点实验室
3 国家中药管理局药性与药效研究三级实验室
4 中南大学湘雅附二院骨科
通讯作者:陈晓阳(1953-) ,女,教授,主任医师,硕士,主要从事中药药
性理论基础与应用的研究。
第一作者:秦莉花(1980-) ,女,副教授,博士,主要从事中医药防治更年
期或老年疾病研究。
骨性关节炎是一种在骨外科常见的老年人慢性进行性骨
关节病,该病是以关节软骨的退行性病变为主要病理特征,病
因尚未明确,病理生理过程十分复杂。好发于手、足、膝,中期
骨性关节炎在相当程度上影响患者的下肢运动功能。骨关节
炎对患者生活质量和社会公共卫生事业的影响不可忽视。目
前主要服用非甾体消炎药消炎止痛,但长期服用往往引起药物
副作用,且治疗效果不理想。民间用冠盖藤治疗骨性关节炎,
其疗效显著,课题组前期研究表明本课题所用的冠盖藤为柔毛
冠盖藤〔1〕,但其具体机制尚未明确。本课题研究冠盖藤水提液
对骨性关节炎大鼠足组织前列腺素 E2(PGE2)含量及形态学的
影响。
1 材料与方法
1. 1 动物 健康 SD大鼠,雄性,SPF级,体重 180 ~ 220 g,由湖
南斯莱克景达实验动物有限公司提供,动物合格证号:SCXK
(湘)2009-0004。
1. 2 药物 冠盖藤在湖南省怀化市沅陵采集,经湖南中医药
大学药学院中药鉴定教研室鉴定为柔毛冠盖藤,制备成水煎液
称取冠盖藤药材 1 500 g,分 3 次提取,最后浓缩成 1 g生药 /ml
的药液,备用;雷公藤多甙片(上海复旦复华药业有限公司,批
号 Z31020415)。以上药物用时均由生理盐水配成所需浓度。
1. 3 试剂及仪器 二甲苯(天津市大茂化学试剂厂,批号:
20080921)。角叉菜胶(Sigma 公司,批号:45F-0427) ;冰醋酸
(潍坊润洁化学有限公司) ;弗氏完全佐剂 F-5881(Sigma 公
·865· 中国老年学杂志 2016 年 2 月第 36 卷
司) ;PGE2 试剂盒(美国 ADL公司)。
1. 4 方法
1. 4. 1 骨性关节炎模型的建立 取雄性 SD 大鼠 60 只,用微
量注射器于左后足跖皮内注射 FCA0. 1 ml致炎〔2,3〕。原发病变
表现为致炎侧的关节肿胀,致敏当天后即可出现;继发病变一
般于致炎后 12 ~ 18 d 出现,表现为非致炎侧及双前肢的关节
肿胀。
1. 4. 2 分组 造模成功后的 50 只 SD 大鼠随机分为 5 组:模
型组,雷公藤组,冠盖藤水提取物高、中、低剂量组,每组 10 只。
另外取 10 只健康 SD大鼠作为正常组。造模后,雷公藤组给予
雷公藤多甙片混悬液 15. 44 mg /kg;冠盖藤水提取物低、中、高
剂量组分别给予冠盖藤水提取物 2. 31,4. 62,9. 24 g 生药 /kg,
正常组给予等容量蒸馏水。致炎当天,各组均采用灌胃方法给
药,每天 1 次,给药时间 28 d。
1. 4. 3 PGE2 含量的检测 治疗 28 d后用断头,取大鼠右后足
取较上部位组织检测 PGE2 含量,组织剪碎后用生理盐水 3 ml
浸泡 2 h 后取出,3 000 r /min 离心浸泡液 5 min,吸取上清液
0. 5 ml,加入 0. 5 mol /L氢氧化钾-甲醇溶液 1 ml 后,将试管置
于 50℃恒温水浴中异构化 20 min,在 278 nm 出测定其光密度
(OD)值,PGE2 含量以每克炎性组织相当的吸收光密度值(A
值)表示。
1. 4. 4 形态学指标 治疗 28 d 后用断头,取大鼠右后足,用
10%甲醛固定,HE染色观察足趾组织形态学。
1. 5 统计方法 实验数据均用 x±s 表示,用 SPSS18. 0 软件进
行方差分析。
2 结 果
2. 1 冠盖藤水提取物对弗氏完全佐剂大鼠模型足组织 PGE2
的影响 正常组 PGE2 含量为(3. 96±0. 19) ,模型组为(12. 87±
0. 65) ,雷公藤组为(4. 59 ±0. 29) ,冠盖藤水提物高剂量组为
(4. 38±0. 18) ,冠盖藤水提物中剂量组为(6. 92±0. 23) ,冠盖藤
水提物低剂量组(8. 37±0. 21)。模型组的 PGE2 含量与空白组
比较明显升高(P=0. 00) ,说明造模成功。冠盖藤水提取物高、
中、低剂量组 PGE2 含量均较模型组明显下降(P = 0. 01、0. 00、
0. 00) ,并有一定的剂量依赖关系。
2. 2 各组大鼠右后足的形态学变化 膝关节软骨足趾病变见
图 1。正常组软骨细胞排列规则,表面光滑;模型组和冠盖藤水
提取物低剂量组大鼠膝关节软骨在光镜下可见软骨细胞大量
纤维化,细胞数量明显减少,膝关节软骨表面的胶原纤维退化,
软骨基质钙化区变薄;冠盖藤水提取物高、中剂量组大鼠膝关
节软骨退变较模型组和冠盖藤水提取物低剂量组轻,仅软骨表
面细胞轻度纤维化。
图 1 冠盖藤水提取物对骨性关节炎大鼠足趾组织形态学的影响(HE,×400)
3 讨 论
目前认为,在骨性关节炎的发病过程中,PGE2 能够促进骨
吸收,参与软骨基质的破坏。同时前列腺素作为炎症介质,也
参与炎症反应,组织在炎症期间,可测到其中有高浓度的前列
腺素。PGE2 是一种重要的细胞生长和调节因子。在体内水平
过高时会引起发热反应。炎症发生时,PGE2 可使血管扩张,水
肿加剧并引起发热疼痛〔4〕。
文献报道,兔骨性关节炎模型组关节滑液中的 PGE2 含量
比正常组有显著增高(P<0. 01)〔5〕。本实验说明冠盖藤可以降
低骨性关节炎大鼠的足组织中 PGE2 的含量,从而抑制炎症反
应,改善关节周围组织的痛觉过敏状态,缓解疼痛,达到治疗骨
性关节炎的效果。
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〔2013-05-28 修回〕
(编辑 赵慧玲 /曹梦园)
·965·秦莉花等 冠盖藤对骨性关节炎大鼠足组织前列腺素 E2 含量及形态学的影响 第 3 期