全 文 ：药 物 研 究
The medicine study
基金项目:湖南中医药管理局项目 (2009033);湖南省十二五药学重点学科资助;湖南省教育厅中药学重点学科项目资助。
作者简介:李咏梅，女，硕士研究生。主要从事中药质量与资源的研究。E － mail:liyongmei1985@ 163. com。
通信作者:肖冰梅，女，博士，副教授。主要从事中药质量与资源的研究。E － mail:xbm2009@ msn. cn。
星毛冠盖藤不同药用部位的高效液相色谱分析
李咏梅 佘朋桂 肖冰梅*
湖南中医药大学药学院，湖南 长沙 410208
【摘 要】 目的:建立星毛冠盖藤药用部位高效液相等度洗脱方法，比较不同药用部位的差异性。方法:星毛冠盖藤不同药用部位
70%乙醇提取，使用不同比例甲醇和乙腈系统等度洗脱，C18 色谱柱 (4. 6mm ×250mm，5μm);流速:0. 8ml /min;进样量:10μl;检测波
长:254nm;柱温:25℃。结果:甲醇 －水 (40:60)系统对药用各部位均具有较好的分离效果;不同药用部位化学成分差异性较大。仅
茎枝含有芦丁。结论:芦丁的分布部位与民间习惯应用星毛冠盖藤地上部分较为相符。为其活性成分的进一步研究和临床用药提供了科学
依据。
【关键词】 星毛冠盖藤;药用部位;高效液相
【中图分类号】Ｒ282. 5 【文献标志码】A 【文章编号】1007 － 8517 (2013)18 － 0017 － 03
Analysis on different Medicinal Parts of Pileostegia tomentella by HPLC
LI Yong － mei，SHE Peng － gui，XIAO Bing － mei
Hunan University of Chinese Medicine School of Medicine，Changsha 410208，Chaina
Abstract:Objective:Establish the method of isocratic elutriate by hplc for different positions of Pileostegia tomentella，compare
the difference of different positions of Pileostegia tomentella． Methods:extract Pileostegia tomentella by 70% ethanol，use different
proportions of methanol and acetonitrile systems to isocratic elutriate;C18 column (4． 6mm × 250mm，5μm);flow rate at 0. 8ml /
min，sample volume is 10μl;Ｒesults:methanol － water (40:60)could separate different positions of Pileostegia tomentella．
Chemical composition in different positions has larger difference，rutin was just founed in stem and branch． Conclusion:Distribution
of rutin is consistent with the customs which is using the ground parts of pileostegia tomentella． The paper provides scientific experi-
mental basis for further researching on Pileostegia tomentella＇s active constituents and used clinical．
Key words:Pileostegia tomentella;Medicinal parts HPLC．
星毛冠盖藤 (Pileostegia tomentella Hand． Mazz)是土家
族常用药［1］，全年可采。具有祛风除湿，散瘀止痛，接骨
的功效，临床常应于腰腿酸痛、风湿麻木，外用治跌打损
伤、骨折、外伤出血［2］。浙江、江西、湖南、湖北、四川、
贵州、广东、台湾等地分布较广，资源蕴藏量丰富。但其
在应用时随意性较强，根、茎、花和叶可分别入药［3］，亦
可全株入药［2］，直接影响到疗效的可靠性与稳定性。应用
HPLC法对星毛冠盖藤不同药用部位进行分析，以期了解其
不同药用部位化学成分的差异性，从而为临床用药选择位
及其化学成分研究提供可靠的实验依据。
1 仪器与材料
LC － 10AT液相色谱 (日本岛津);C18 色谱柱 4. 6mm
× 250mm，5μm (依利特)。甲醇、乙腈为色谱纯;水为纯
净水，其余试剂为分析纯。芦丁购自上海源叶生物科技有
限公司。星毛冠盖藤采自湖南怀化，经笔者鉴定为虎耳草
科冠盖藤属星毛冠盖藤 Pileostegia tomentella Hand. Mazz。
2 方法与结果
2. 1 溶液的制备 取过 50 目筛的各药用部位粉末 10g，置
于 100ml 的圆底烧瓶中。依次加入 70% 的乙醇 100ml、
50ml，在 90℃恒温水浴分别回流 1. 5h、1h。过滤，合并虑
液。精密移取滤液 1ml，用 70%乙醇定容于 10ml容量瓶中。
微孔滤膜过滤，滤液为样品溶液。精密称取芦丁，配制成
浓度为 0. 1mg /ml对照品溶液。
2. 2 黄酮类化合物鉴别 取过 50 目筛的药材全株粉末，
按“2. 1”项下方法提取后过滤。滤液与盐酸 －镁粉反应颜
色泡沫处呈紫红色，与醋酸铅反应生成浅黄色沉淀，与
NaOH溶液反应呈黄色，加盐酸后颜色褪去。
2. 3 色谱条件 分别以甲醇 － 水 (10:90)、甲醇 － 水
(20:80)、甲醇 － 水 (30:70)、甲醇 － 水 (40:60)、
甲醇 － 水 (50:50)、乙腈 － 水 (10:90)、乙腈 － 水
(20:80)为 流 动 相。在 流 速 为 0. 8ml /min，波 长 为
254nm，进样量为 10μl，柱温为室温条件下洗脱 90min。
乙腈 －水系统得到的色谱图谱出峰数目少且保留时间短，
不适合于星毛冠盖藤。甲醇 － 水系统以甲醇 － 水 (40:
60)的分离效果较好，出峰数目较多。在保留时间 33min
后无峰再出现。
因此选择甲醇 －水 (40:60)作为本实验的流动相，
洗脱时间为 40min。在此条件下根﹑茎﹑叶和枝的高效液相
图谱见图 1 － 5;芦丁与各部分峰的数目、保留时间、峰面
积和峰面积百分比见表 1 － 5 所示。
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表 1 芦丁
峰序 保留时间 (min) 峰面积 (μV* s)峰面积百分比 (%)
1 5. 517 9288739 100. 00000
表 2 星毛冠盖藤根的色谱情况
峰序 保留时间 (min) 峰面积 (μV* s)峰面积百分比 (%)
1 3. 606 604690 32. 24333
2 4. 087 784143 41. 81211
3 6. 533 209742 11. 18388
4 7. 217 276821 14. 76068
表 3 星毛冠盖藤茎的色谱情况
峰序 保留时间 (min) 峰面积 (μV* s)峰面积百分比 (%)
1 3. 755 1370928 16. 65615
2 4. 258 3060990 37. 18964
3 5. 233 236893 2. 87814
4 6. 230 335327 4. 07407
5 6. 528 301875 3. 66764
6 7. 220 718999 8. 73551
7 9. 847 329385 4. 00188
8 12. 342 265854 3. 23001
9 16. 727 275376 3. 34569
10 23. 011 204999 2. 49064
11 29. 541 275483 3. 34700
12 31. 289 854651 10. 38363
表 4 星毛冠盖藤枝的色谱情况
峰序 保留时间 (min) 峰面积 (μV* s)峰面积百分比 (%)
1 3. 779 1343254 19. 35094
2 4. 283 3198169 46. 07287
3 5. 479 207279 2. 98606
4 6. 507 481604 6. 93799
5 7. 285 751864 10. 83136
6 32. 378 959376 13. 82078
表 5 星毛冠盖藤叶的色谱情况
峰序 保留时间 (min) 峰面积 (μV* s)峰面积百分比 (%)
1 3. 092 259543 4. 05145
2 3. 945 800606 12. 49741
3 4. 516 4108437 64. 13243
4 6. 541 359990 5. 61943
5 7. 273 386101 6. 02701
6 29. 542 491499 7. 67227
3 分析与讨论
在进行高效液相等度洗脱分析时，甲醇 －水 (40:60)
对药用各部位均具有较好的分离效果。在色谱条件下，根
有四个峰，茎有十二个峰，枝有六个峰，叶有六个峰。茎
和叶在 29. 541min 与 29. 542min 处各有一个峰保留时间接
近，可视为同一类物质，但对峰面积及其百分比相比较，
(下转第 20 页)
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取 3 孔细胞进行计数，取平均值绘制细胞生长曲线 (图
3)。盐酸四环素缓释微球作用于第 3 代大鼠成骨细胞，细
胞计数后绘制生长曲线 (图 3)显示:盐酸四环素缓释微
球能够促进大鼠成骨细胞持续增殖。
1. 2. 4 MTT法检测成骨细胞增殖 取生长良好的第 3 代成
骨细胞，以每孔 4X103 个细胞接种于 96 孔板上，每孔加入
含 10% FBS的 DMEM培养液 200ul，置于 37℃、5% CO2 细
胞培养箱中过夜，弃去培养液，分别加入实验分组要求的
培养液，于培养 1d、2d、3d、5d、7d、9d 后，取实验组细
胞各 6 孔，每孔加入 MTT (5mg·ml －1)20μl，继续培养
4h，吸尽上清。加 150ul DMSO 振荡 15min。连续光谱测读
仪于 490nm 处测定吸光度 (A)值，实验重复三次 (表
1)。考察盐酸四环素缓释微球对成骨细胞的增殖作用规律。
表 1 结果显示:培养 1d后，2 组细胞 A值无差异。第 2、3d
时，盐酸四环素缓释微球组 A 值高于空白对照组，但无显
著性差异 (q检验，P ＞ 0. 05)。第 5、7、9d 时，盐酸四环
素缓释微球组 A值明显高于空白对照组，两组间具有统计
学显著性差异 (q检验，P ＜ 0. 01)。
表 1 MTT法观察盐酸四环素缓释微球对大鼠成骨细胞的增殖作用 (A值，χ ± s，n = 6)
组别 1d 2d 3d 5d 7d 9d
A 0. 310 ± 0. 013 0. 356 ± 0. 026 0. 385 ± 0. 031 0. 530 ± 0. 032 0. 548 ± 0. 063 0. 503 ± 0. 030
B 0. 308 ± 0. 019 0. 423 ± 0. 060 0. 445 ± 0. 053 0. 636 ± 0. 062＊＊ 0. 721 ± 0. 051＊＊ 0. 733 ± 0. 034＊＊
A:空白对照组，B:盐酸四环素缓释微球组。与相同时间点 A组比较，＊＊p ＜ 0. 01
2 讨论
四环素的抗菌特性性质用于局部组织中有促进成骨细
胞分化和增殖的作用，并有诱导异位成骨的能力［5］。在用
复合盐酸四环素的生物衍生骨修复兔桡骨缺损的研究中发
现，其血清碱性磷酸酶、骨钙素水平，修复区成骨细胞和
胶原纤维的生成均高于没有复合四环素的对照组，而且骨
愈合也早于对照组，说明四环素在骨组织再生过程中可能
起到重要作用［6］。四环素对成骨细胞的生物学效应研究显
示［3］:低浓度四环素可增强成骨细胞的活力，细胞增殖明
显加快，细胞的群体倍增时间缩短。四环素促进骨愈合的
机制，可能源于初始阶段的抗菌作用;也可能通过抑制胶
原酶的活性使骨的形态正常，或通过降低破骨细胞的活性
抑制骨吸收，增强成骨细胞的活性刺激胶原的产生，从而
促进骨再生［7］。为了避免四环素的突释现象，满足骨愈合
再生生理学规律的要求，持续促进骨生长的作用，将盐酸
四环素制备成缓释微球可以满足促进骨生长的要求［4］。经
研究，盐酸四环素缓释微球能够促进成骨细胞持续增殖比
盐酸四环素多 5 ～ 6 天 ，同时，盐酸四环素缓释微球能显著
增加成骨细胞碱性磷酸酶的活性和Ⅰ型胶原的表达［8］。本
实验单从细胞增殖的角度研究盐酸四环素缓释微球对成骨
细胞的增殖活性，从结果可以看到，盐酸四环素缓释微球
对体外培养成骨细胞具有增殖作用，在骨创伤治疗中具有
潜在的应用价值。
参考文献
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(收稿日期:2013. 07. 27
檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾
)
(上接第 18 页)
该物质在茎和叶的含量和所占比重有很大差异。枝和根在
此保留时间附近内无峰出现，说明不含有此成分。从各部
分峰的保留时间间隔分析，根、茎较枝、叶均匀，表明枝
与叶所含化合物的物理或化学性质差异性较大，可能和根、
茎与枝、叶之间新陈代谢的差异性有关系。各药用部位在
6. 500 － 6. 550min、7. 217 － 7. 285min 两区间均有且只有一
个峰出现。反映了各药用部位化学成分的个性与共性关系，
亦为在临床使用时是否区分药用部位研究提供了可靠的实
验基础。
黄酮类化合物是中药中常见的一类有效成分，具有多
种生物活性［4］。如葛根总酮、葛根素和银杏叶总黄酮等具
有扩张冠状血管的作用，临床用于治疗冠心病。芦丁、橙
皮苷等具有降低毛细血管脆性和异常通透性作用，可用做
毛细血管出血的止血药和治疗高血压的辅助药。实验证实，
星毛冠盖藤中含有黄酮类化合物，茎与枝含有芦丁，为后
续的开发利用及活性成分的深入研究提供科学的参考依据。
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(收稿日期:2013. 07. 13)
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