全 文 ：[饮片炮制 ]
HPLC-ELSD指纹谱法研究甘遂炮制前后成分差异
修彦凤 1, 2 , 　吴　 3 , 　王海颖 1 , 　张永太1
(1.上海中医药大学中药学院 , 上海 201203;2.南京中医药大学江苏省中药炮制重点实验室 ,江苏 南京
210029;3.上海中医药大学中药研究所 , 上海 201203)
收稿日期:2008-01-29
基金项目:上海市教育委员会科研项目资助(05cz32);江苏省中药炮制重点实验室(ZYPZ003)
作者简介:修彦凤(1974-),女 ,副教授 ,博士 ,从事中药炮制及制剂研究。 Tel:021-51322197　 E-mail:xiu yf@ 163.com
关键词:甘遂;炮制;3-O-(2, 3-二甲基丁酰基)-13-O-十二烷酰基巨大戟二萜醇;HPLC-ELSD;特征指纹谱
摘要:目的:比较甘遂炮制前后成分的变化。方法:以 3-O-(2, 3-二甲基丁酰基)-13-O-十二烷酰基巨大戟二萜醇为对照 ,
建立生 、制甘遂的 HPLC-ELSD特征指纹谱 ,比较两者的特征指纹谱及图谱。结果:在选定的色谱条件下 , 生 、制甘遂的特
征色谱峰分别为 31、 19个 ,甘遂炮制后 , 大部分成分含量下降 , 保留时间为 89min左右的成分含量升高 , 不同成分间的含
量比例发生了变化 , 成分的种类没有变化。结论:甘遂炮制解毒的原理得以初步解释。
中图分类号:R283　　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1001-1528(2009)02-0249-04
　　甘遂为大戟科植物甘遂 EuphorbiakansuiT.N.
LiouexT.P.Wang的干燥块根 。其性寒 ,味苦 ,有
毒 。归肺 、肾 、大肠经。具有泻水逐饮的功能 ,在临
床上多用于肝硬化腹水 、胸腔积液 、水肿及二便不利
等症。甘遂中化学成分主要为巨大戟二萜酯类衍生
物和少量三萜类化合物[ 1-4] 。自古以来 ,甘遂多经过
炮制后入药 ,其炮制目的是降低毒性 ,缓和峻泻作
用 [ 5] 。在全国各地 ,甘遂的炮制方法主要为醋炒 、
醋煮 、豆腐煮等 ,炮制前后成分发生了怎样的变化 ?
这方面的研究尚未见报道。我们建立了生 、制甘遂
的 HPLC-ELSD特征指纹谱 ,比较炮制前后成分的变
化 ,为进一步开展甘遂炮制原理的研究奠定基础 。
1　仪器与材料
　　Agilent1100高效液相色谱仪 (美国惠普公
司);PL-ELS1000型蒸发光散射器;3200H型超声波
清洗器(上海科导超声仪器有限公司);乙醇 、氯仿
均为分析纯 ,甲醇为色谱纯 ,水为超纯水 , 3-O-(2, 3-
二甲基丁酰基)-13-O-十二烷酰基巨大戟二萜醇[ 6]
(自制),所有生甘遂均为大戟科植物甘遂 Euphorbia
kansuiT.N.LiouexT.P.Wang的干燥块根 ,制甘
遂样品为市场购买或自制(Z8和 Z9为 S10炮制所
得),见表 1。
表 1　 生 、制甘遂样品
编号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10
来源 上海雷允上
上海
德华
上海
雷允上
安徽
亳州
安徽
亳州
安徽
合肥
上海
雷允上
河北
安国
四川
成都
河北
安国
编号 Z1 Z2 Z3 Z4 Z5 Z6 Z7 Z8 Z9 Z10 Z11 Z12
来源 上海康桥
上海雷
允上
北京福瑞
达药店 陕西
上海隆顺
堂药房 江西 自制 自制 自制 山东 自制 河北安国
备注 煮 煮 炒 炒 煮 炒 醋炒 醋炒 醋煮 煮 醋煮 炒
　　注:上海德华为上海德华国药制品有限公司的简称;上海雷允上为上海雷允上中药饮片厂的简称;上海康桥为上海康桥中药饮片厂的简
称。
2　方法与结果
2.1　色谱条件 　色谱柱:DikmaDiamonsilC18柱
(4.6 mm×250 mm);检测器:PL-ELS1000型蒸发光
散射检测器(蒸发温度:110 ℃,雾化温度:80 ℃,气
体流速:1.5 L/min);柱温:35 ℃;进样量 20 μL;流
速:1.0 mL/min;流动相:甲醇(A)-水(B), 采用梯
度洗脱(时间 /A的百分比):0 min/70%;35 min/
85%;85 min/95%;115 min/100%。
2.2　样品供试液的制备　将表 1中生 、制甘遂粉
碎 ,取细粉 30 g,精密称定 ,置磨口具塞锥形瓶中 ,加
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入乙醇超声 3次 (20, 10, 10 min),每次 50 mL,过
滤 ,合并滤液 ,低温蒸干 ,加入 50 mL水溶解 ,置分液
漏斗中 ,加入氯仿萃取 4次 ,每次 50 mL,收集萃取
液 ,浓缩定容至 1 mL,即得。
2.3　样品分析　取 2.2项下生 、制甘遂样品供试
液 ,按照 2.1项下的色谱条件 ,进行 HPLC分析 ,色
谱图见图 1。
A
B
C D
图 1　生 、制甘遂的 HPLC指纹图谱
A.3-O-(2, 3-二甲基丁酰基)-13-O-十二烷酰基巨大戟二萜醇对照品　B.生甘遂 S10　C.醋炒甘遂 Z8　D.醋煮甘遂 Z9
2.4　生 、醋甘遂特征指纹谱的建立
2.4.1　内参照峰的选择 　内参照峰的选择原
则 [ 1] :各样品的共有峰 ,与相邻色谱峰分离良好 ,峰
位居中 。
2.4.2　相对保留值　“相对保留值 ”[ 7]为待鉴样品
各个色谱峰与内参照峰保留值间的比值。
2.4.3　归一化面积值　“归一化面积值” [ 7]为待鉴
样品各个色谱峰的峰面积与内参照峰的峰面积的比
值 。
2.4.4　共有峰　根据 2.4.1项下的内参照峰的选
择原则 ,以保留时间为 68min的 3-O-(2, 3-二甲基丁
酰基)-13-O-十二烷酰基巨大戟二萜醇为内参照峰 。
由此 ,计算每个色谱峰的相对保留值和归一化面积
值 ,将两者结合在一起即得数字化的色谱指纹谱。
2.4.5　生 、醋甘遂的特征指纹谱建立　在样品中均
存在的色谱峰可认为是该品种所特有 ,称为特征指
纹峰 ,由许多个特征指纹峰构成中药的特征指纹谱 。
由于特征指纹谱并非一二个色谱峰 ,由此实现了从
多成分的角度来反映中药样品内在特征的目标 ,同
时可避免有些药物因含相同组分而致误鉴的情况。
生 、制甘遂特征指纹峰的入选条件是全部样品
所共有 。选择色谱峰为 10个生甘遂所共有者组成
生甘遂的特征峰 ,共计 31个 ,见表 2。选择色谱峰
为 12个制甘遂所共有者组成制甘遂的特征峰 ,共计
19个 ,见表 3。从表 2、3可以看出:生甘遂的特征指
纹峰包含了制甘遂的所有特征指纹峰 ,经过查制甘
遂的数字化的色谱指纹谱及图谱发现 ,未包含的色
谱峰在大部分醋甘遂中均存在 ,没有成为特征指纹
峰是因为煮甘遂(Z1、Z2、Z5、Z9、Z10、Z11)成分下降
较多 ,在相同色谱条件下没有积分 。
2.5　生甘遂与制甘遂特征指纹峰的比较　汇总生
甘遂与制甘遂相同的特征指纹峰于表 4,比较两者
的归一化面积均值 。
　　由图 1可以看出甘遂经醋炒后大部分成分稍微
降低 ,醋煮后大部分成分含量降低明显 , 3-O-(2, 3-
二甲基丁酰基)-13-O-十二烷酰基巨大戟二萜醇含
量也降低 ,但保留时间为 89min的色谱峰明显升高。
结合表 4,以 3-O-(2, 3-二甲基丁酰基)-13-O-十二烷
酰基巨大戟二萜醇的色谱峰为参照 ,大部分成分醋
制后含量降低的较对照品降低的多 ,有的成分如 60
(0.873)、101(1.489)、103(1.516)、119(1.745)和
124(1.808)min降低的较对照品少 ,故生 、制品归一
化面积均值比大于 1 ,但保留时间为 89min的成分
含量增加明显 。
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表 2　 生甘遂的特征指纹谱
序号 保留时间 相对保留值
样品编号(归一化面积值)
S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10
归一化面积
均值
1 2.279 0.033 0.009 0.037 0.167 0.040 0.032 0.955 0.013 0.012 0.066 0.207 0.151
2 4.729 0.069 0.257 0.280 0.044 0.290 0.307 0.201 0.044 0.030 0.149 0.009 0.153
3 8.925 0.130 0.055 0.230 0.045 0.331 0.342 0.259 0.048 0.086 0.411 0.044 0.157
4 11.846 0.173 0.083 0.309 0.082 0.425 0.465 0.620 0.371 0.107 0.533 0.051 0.269
5 14.074 0.206 0.026 0.104 0.024 0.119 0.153 0.141 0.023 0.030 0.114 0.012 0.084
6 18.317 0.268 0.029 0.112 0.025 0.153 0.183 0.147 0.032 0.019 0.194 0.006 0.098
7 19.727 0.288 0.022 0.065 0.028 0.136 0.158 0.156 0.030 0.033 0.086 0.011 0.093
8 24.213 0.354 0.857 0.786 0.884 5.961 6.096 5.961 0.842 1.978 5.370 0.991 2.471
9 38.827 0.567 0.081 0.359 0.094 0.508 0.552 0.208 0.105 0.109 0.660 0.072 0.265
10 41.713 0.610 0.056 0.191 0.058 0.314 0.327 0.697 0.064 0.220 0.577 0.104 0.264
11 44.264 0.647 0.049 0.129 0.055 0.155 0.165 0.364 0.044 0.116 0.185 0.089 0.181
12 55.405 0.810 0.031 0.204 0.015 0.163 0.196 0.260 0.014 0.026 0.248 0.032 0.175
13 60.021 0.877 0.072 0.250 0.059 0.361 0.377 0.566 0.063 0.081 0.459 0.029 0.274
14 63.659 0.930 0.044 0.219 0.034 0.148 0.169 0.196 0.044 0.030 0.253 0.021 0.184
15 68.426 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000
16 76.234 1.114 0.023 0.097 0.018 0.009 0.103 0.177 0.020 0.035 0.073 0.021 0.162
17 85.252 1.246 0.054 0.189 0.034 0.189 0.224 0.180 0.049 0.051 0.518 0.027 0.224
18 88.971 1.300 0.051 0.254 0.035 0.056 0.054 0.282 0.040 0.103 0.178 0.028 0.221
19 95.438 1.395 0.045 0.262 0.043 0.136 0.233 0.643 0.053 0.067 0.279 0.074 0.295
20 97.727 1.428 0.093 0.499 0.115 0.482 0.619 1.106 0.132 0.193 0.631 0.129 0.480
21 101.583 1.485 5.091 35.559 5.001 31.331 30.717 40.783 4.796 10.324 39.830 5.934 17.102
22 103.453 1.512 0.074 0.354 0.093 0.340 0.356 0.552 0.089 0.127 0.504 0.107 0.361
23 105.209 1.538 2.093 8.229 1.010 1.167 1.226 10.000 1.238 2.572 1.402 1.203 2.471
24 106.343 1.554 0.124 0.555 0.444 0.618 0.641 0.882 0.476 0.928 1.075 0.498 0.672
25 112.333 1.642 0.018 0.217 0.020 0.139 0.091 0.179 0.048 0.030 0.144 0.049 0.243
26 116.241 1.699 0.138 1.060 0.192 0.175 0.266 0.426 0.037 0.143 0.433 0.172 0.430
27 119.471 1.746 0.119 1.122 0.074 0.714 0.498 1.260 0.153 0.391 0.599 0.248 0.633
28 120.925 1.767 0.069 0.921 0.053 0.579 0.366 1.613 0.130 0.284 0.456 0.249 0.603
29 123.696 1.808 0.150 1.712 0.192 1.373 0.979 8.001 0.650 2.675 1.985 2.027 1.957
30 128.170 1.873 0.407 0.994 0.296 0.958 1.069 9.753 1.021 3.169 5.298 1.729 2.127
31 130.257 1.904 0.090 0.451 0.038 0.245 0.266 0.387 0.100 0.322 0.379 0.177 0.398
表 3　 制甘遂的特征指纹谱
序号 保留时间 相对保留值
样品编号(归一化面积值)
Z1 Z2 Z3 Z4 Z5 Z6 Z7 Z8 Z9 Z10 Z11 Z12
归一化面积
均值
1 8.804 0.129 0.015 0.136 0.744 0.126 0.006 0.076 0.051 0.143 0.099 0.122 0.096 0.040 0.141
2 11.617 0.170 0.045 0.312 0.537 0.280 0.027 0.095 0.073 0.397 0.178 0.182 0.138 0.065 0.197
3 17.884 0.261 0.018 0.228 0.082 0.012 0.013 0.040 0.024 0.046 0.066 0.102 0.066 0.035 0.078
4 18.996 0.277 0.017 0.181 0.140 0.022 0.015 0.028 0.023 0.035 0.055 0.077 0.060 0.033 0.076
5 23.520 0.343 0.699 3.671 9.646 0.838 0.590 1.256 0.742 1.046 0.736 0.915 0.655 0.758 1.771
6 38.151 0.557 0.051 0.456 0.295 0.070 0.045 0.112 0.087 0.106 0.251 0.231 0.131 0.083 0.196
7 41.243 0.602 0.030 0.132 1.533 0.111 0.031 0.064 0.040 0.088 0.166 0.219 0.165 0.040 0.255
8 59.793 0.873 0.087 0.787 0.495 0.056 0.058 0.131 0.054 0.083 0.492 0.424 0.440 0.054 0.300
9 63.781 0.931 0.042 0.188 0.137 0.028 0.037 0.064 0.042 0.038 0.154 0.172 0.213 0.035 0.156
10 68.510 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000
11 89.157 1.301 0.048 0.156 1.515 0.499 0.045 0.097 0.067 0.089 0.430 0.279 0.275 0.055 0.381
12 95.823 1.399 0.033 0.450 0.529 0.066 0.034 0.088 0.061 0.049 0.222 0.166 0.134 0.039 0.261
13 101.985 1.489 4.570 25.758 66.119 5.324 4.640 9.678 6.219 4.809 53.453 42.313 63.593 3.952 19.026
14 103.862 1.516 0.068 0.301 1.042 0.711 0.066 0.125 0.103 0.103 0.701 0.350 0.222 0.085 0.430
15 105.046 1.533 0.038 0.725 9.254 1.320 0.080 3.229 0.521 1.215 0.576 0.489 0.539 0.929 1.659
16 106.262 1.551 0.081 0.627 2.188 1.036 0.105 0.190 0.165 0.898 0.790 0.670 0.447 0.596 0.741
17 119.572 1.745 0.011 0.552 2.493 0.146 0.075 0.369 0.170 0.104 0.746 1.089 1.249 0.112 0.634
18 120.528 1.759 0.059 0.544 1.859 0.126 0.043 0.274 0.144 0.087 0.248 1.474 1.248 0.074 0.558
19 123.834 1.808 0.296 1.053 20.586 1.354 0.196 0.467 0.372 0.846 3.095 2.373 2.158 0.698 2.762
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表 4　 生 、制甘遂特征指纹谱的比较
序号 保留时间 相对保留值 生品归一化面积值 As
制品归一化
面积值 Az Az/As
1 8.804 0.129 0.157 0.141 0.896
2 11.617 0.170 0.269 0.197 0.732
3 17.884 0.261 0.098 0.078 0.796
4 18.996 0.277 0.093 0.076 0.820
5 23.520 0.343 2.471 1.771 0.717
6 38.151 0.557 0.265 0.196 0.739
7 41.243 0.602 0.264 0.255 0.967
8 59.793 0.873 0.274 0.300 1.097
9 63.781 0.931 0.184 0.156 0.847
10 68.510 1.000 1.000 1.000 1.000
11 89.157 1.301 0.221 0.381 1.729
12 95.823 1.399 0.295 0.261 0.883
13 101.985 1.489 17.102 19.026 1.112
14 103.862 1.516 0.361 0.430 1.193
15 105.046 1.533 2.471 1.659 0.671
16 106.262 1.551 0.672 0.741 1.103
17 119.572 1.745 0.633 0.634 1.002
18 120.528 1.759 0.603 0.558 0.925
19 123.834 1.808 1.957 2.762 1.411
3　小结与讨论
3.1　在建立生甘遂和制甘遂的数字化色谱指纹谱
的过程中 ,首先通过 HPLC分析 ,得到生甘遂和制甘
遂的色谱图 ,选择 3-O-(2, 3-二甲基丁酰基)-13-O-
十二烷酰基巨大戟二萜醇的色谱峰为内参照峰 ,对
保留值和色谱峰面积进行数据处理得到生甘遂和制
甘遂的色谱指纹谱;选择在 10个生甘遂样品或 12
个制甘遂样品中均存在的色谱峰 ,得到生甘遂和制
甘遂的特征指纹谱。
3.2　通过比较生甘遂和制甘遂的特征指纹谱以及
甘遂炮制前后的图谱 ,可以认为甘遂炮制后绝大部
分的成分含量下降 , 89min左右的成分含量升高 ,不
同成分间的含量比例发生了变化 ,这可以从成分的
角度解释甘遂炮制解毒的原理。由于很多成分不明
确 ,不能解释具体成分的变化 ,所以需要进一步分离
鉴定甘遂中的成分 。
3.3　在研究中发现炒甘遂与煮甘遂之间的成分含
量多少方面有较大差异 ,两者炮制的目的均为降低
毒性 ,缓和峻泻作用 ,怎样的制甘遂才是合格的? 这
个问题需要去探究 。
参考文献:
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不同炮制方法对远志质量的影响
王光志 , 　万德光 , 　刘友平 , 　陈　林 , 　裴　瑾
(成都中医药大学药学院 , 四川成都 610075)
收稿日期:2008-02-13
基金项目:国家 “ 863”科技攻关项目(2001BA701A55-44)
作者简介:王光志(1976-),男 ,讲师 ,研究方向:中药品种质量与资源。 Tel:(028)80975717
关键词:炮制;质量;远志;远志酸
摘要:目的:比较不同炮制方法对远志质量的影响。方法:以醇浸出物含量和远志酸含量为指标 , 比较炒 、甘草制 、蜜炙 、
姜制以及酒制等 5种炮制方法对远志质量的影响 。结果:浸出物含量上 , 蜜远志 >酒制远志 >甘草制远志 >生远志 >姜
汁炙远志 >炒远志;远志酸含量酒制远志 >甘草制远志 >蜜远志 >生远志 >姜汁炙远志 >炒远志。结论:5种炮制方法
中以清炒法对远志醇浸出物以及远志酸含量影响显著。
中图分类号:R283　　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1001-1528(2009)02-0252-03
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2009年 2月
第 31卷　第 2期
中 成 药
ChineseTraditionalPatentMedicine
February2009
Vol.31　No.2