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蝉翼藤氯仿提取物的抗炎和免疫增强作用



全 文 :由表 3 结果显示,独一味巴布膏以 4. 5、3. 0g(生药)/kg 给
大鼠皮肤涂抹给药,于给药后的 90、120 分钟对热刺激所致疼痛
反应具有显著的抑制作用,表明独一味巴布膏具有明显的镇痛
作用。
2. 4 独一味巴布膏对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响 小鼠
60 只,剪毛,硫化钠脱毛,脱毛面积 2. 5cm × 2. 5cm。第二天将
脱毛且皮肤无破损的小鼠按体重性别随机分成 6 组,每组 10
只,雌雄各半,给药。连续给药 5 天,于末次给药 1h 后,各组每
鼠尾静脉注射印度墨汁(1:4)0. 1ml /10g,分别于注射后 1min
(t1)和 5min(t2)眼眶取血 20μl,加入盛有 4ml 0. 1% Na2CO3 溶
液中,在吸收波长(576nm)处比色。动物脱颈椎处死后,取肝、
脾称重,计算吞噬指数 K =(logOD1 - logOD2)/(t2 - t1) ,校正
吞噬指数 α =[体重 /(肝重 +脾重) ]× K1 /3。结果见表 4。
表 4 独一味巴布膏对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响(珋x ± s,n =
10)
组 别
剂量
(g生药 /kg)
K值 α值
对照 0. 0138 ± 0. 0088 2. 8919 ± 0. 8589
赋形剂 4. 5 0. 0157 ± 0. 0109 3. 5440 ± 1. 6270**
甘露聚糖肽 0. 02 0. 0354 ± 0. 0070** 5. 6741 ± 0. 6564**
独一味巴布膏 4. 5 0. 0228 ± 0. 0095* 4. 7624 ± 0. 5826**
独一味巴布膏 3. 0 0. 0174 ± 0. 0087 4. 0734 ± 0. 7942**
独一味巴布膏 1. 5 0. 0163 ± 0. 0169 3. 6973 ± 1. 3178
由表 4 结果表明,独一味巴布膏以 4. 5、3. 0g(生药)/kg 给
小鼠皮肤涂抹给药,每日一次,连续 5 天,吞噬指数有显著性差
异,具有免疫增强的作用。
2. 5 独一味巴布膏对小鼠迟发型超敏反应的影响 小鼠 60
只,小鼠背部,腹部去毛,硫化钠脱毛,脱毛面积分别为 2. 5cm ×
2. 5cm,3cm × 3cm皮肤应无破损。第二天将脱毛的小鼠按体重
性别随机的分成 6 组,每组 10 只,雌雄各半。每鼠涂 50μl 1%
DNCB(1:1 丙酮麻油溶解)致敏,并于第二日强化致敏一次,给
药,每日给药一次,连续给药 5 天,末次给药后于小鼠左耳涂
50μl 1%DNCB,24h后处死小鼠,剪下左右耳并用直径 8mm 打
孔器打孔称重,以左右耳片重量差为肿胀度,结果见表 5。
表 5 独一味巴布膏对小鼠迟发型超敏反应的影响(珋x ± s)
组 别
剂量
(g生药 /kg)
鼠数
(只)
肿胀度
(mg)
对照 10 6. 50 ± 3. 32
赋形剂 4. 5 10 4. 53 ± 2. 37
甘露聚糖肽 0. 02 10 1. 60 ± 1. 51**
独一味巴布膏 4. 5 10 2. 41 ± 0. 98**
独一味巴布膏 3. 0 10 2. 28 ± 1. 80**
独一味巴布膏 1. 5 10 2. 93 ± 2. 35*
由表 5 可知,独一味巴布膏 4. 5、3. 0g、1. 5g(生药)/kg给大
鼠皮肤涂抹给药,小鼠耳肿胀度有显著差异,表明独一味巴布膏
可降低迟发型超敏反应引起小鼠的炎症反应,具有免疫增强的
作用。
3 讨论
独一味是藏、蒙、纳西等民族民间草药,具有止血、镇痛、活
血化瘀、抗菌消炎、增强免疫功能、扶正固本作用。独一味巴布
膏是其制剂之一。动物实验结果表明独一味巴布膏可抑制小鼠
腹腔注射醋酸所引起的扭体反应次数,显著提高热刺激致小鼠
痛阈值,延长温水浴致大鼠的甩尾时间。显著降低迟发型超敏
反应引起小鼠的炎症反应,提高小鼠巨噬细胞吞噬指数。表明
独一味巴布膏具有镇痛、免疫增强功效。
参考文献
1 苑伟,等.不同产地藏药独一味的镇痛、抗炎作用比较研究. 中国药
房,2003;14(12)∶ 716 ~ 717
2 易进海,钟炽昌,罗泽渊,等. 糙苏属和独一味属植物的化学成分及
分类学的意义. 中草药,1992;23 (7)∶ 382
3 马维宁. 藏药独一味及制剂的药理及临床研究概述. 中国民族医药
杂志,2005;2(1)∶ 39 ~ 40
蝉翼藤氯仿提取物的抗炎和免疫增强作用
*
李 丽1,李勇文1**,唐爱存2,李 梅3,钟全强3
(1 桂林医学院,桂林 541004;2广西中医学院附属第一医院,南宁 530001;3广西医科大学,南宁 530023)
摘 要 目的:研究蝉翼藤氯仿提取物(CYT)的抗炎、免疫的药理作用。方法:采用巴豆油致小鼠耳廓肿胀、角叉菜胶致小鼠
足肿胀及棉球肉芽肿炎症模型以观察 CYT的抗炎作用。利用分光光度法测定小鼠血中炭粒廓清率及对绵羊红细胞致小鼠溶血素
抗体生成的影响来研究药物对免疫功能的作用。结果:相当于生药 9. 9 ~ 14. 85g /kg 的蝉翼藤氯仿提取物对巴豆油所致小鼠耳廓肿
胀、角叉菜胶所致小鼠足肿胀急性炎症模型均有明显抑制作用;相当于生药 4. 95 ~ 14. 85g /kg 的蝉翼藤氯仿提取物对小鼠棉球肉芽
肿慢性炎症模型有明显的抑制作用;4. 95 ~ 14. 85g /kg能增强碳粒廓清功能、提高溶血素水平。结论:CYT具有抗炎、增强免疫的作
用。
关键词 蝉翼藤氯仿提取物;抗炎;免疫
26 中药药理与临床 2011;27(4)
* 基金项目:广西壮族自治区教育厅科研项目(项目编号 200911MS161) **通讯作者
DOI:10.13412/j.cnki.zyyl.2011.04.034
蝉翼藤(Securidaca inappendiculata Hassk.)为远志科、远志
族五味藤属攀援灌木,本课题组从蝉翼藤根皮中提取、分离、纯
化得到多个提取物,本实验主要研究蝉翼藤氯仿提取物对炎症
和免疫作用的影响。
1 材料与方法
1. 1 试验药物 蝉翼藤由玉林制药厂提供,并经广西医科大
学李梅教授鉴定。蝉翼藤氯仿提取物:根皮粗粉 5 kg,用石油醚
(30 ~ 60℃)回流提取脱酯,残渣用氯仿加热回流提取 3 次,合
并提取液减压浓缩得浸膏约 200g,使用时用稀释成所需浓度即
可。地塞米松:天津太平洋制药有限公司,批号 090403;环磷酰
胺:上海制药厂,批号 20091007;联苯双脂:广州星群(药业)股
份有限公司,批号 BF40104。
1. 2 动物 昆明种小鼠:雌雄各半,体重 20 ± 2g。普通级,动
物合格证号:SCXK-桂-2009-0002,均由广西医科大学动物实验
中心提供。
1. 3 试剂 角叉菜胶:福建食品有限公司,批号 20090910;巴
豆油:由广西医科大学药理教研室自行提取。
1. 4 方法
1. 4. 1 对小鼠耳廓肿胀的影响 小鼠 50 只,按体重随机分为
CYT高、中、低剂量组、阳性对照组和空白对照组,共 5 组,每组
10 只,ig给药,连续 7d,其中空白对照组给予生理盐水,阳性对
照组给予地塞米松(10mg /kg) ,CYT 高、中、低剂量组分别依次
给予 30ml /kg、20ml /kg、10ml /kg 剂量的 CYT。末次给药后 1h,
在每鼠右耳涂 2%巴豆油(内含 2%巴豆油、20%无水乙醇、73%
乙醚和 5%蒸馏水)0. 05ml致炎,6h后,处死动物,剪下两耳,用
直径 9mm的打孔器在两耳相同部位打下圆形耳片,称重,计算
肿胀度(左右耳片重量差值)和抑制率。
1. 4. 2 对角叉菜胶致小鼠足肿胀的影响[1] 取小鼠 50 只,动
物分组及给药(同 1. 4. 1) ,连续 7d。末次给药后 1h,在每鼠右
侧足下注射 1%角叉菜胶 0. 05ml,4h 后沿踝关节剪下左右两
足,称重,计算肿胀度(左右足重量差值)和抑制率。
1. 4. 3 对小鼠棉球肉芽肿的影响 取小鼠 50 只,动物分组
(同 1. 4. 1)。在乙醚吸入浅麻醉无菌条件下,作小鼠腋窝部切
口,将已称重灭菌的棉球(5mg /个)植于切口皮下。术后均外涂
青霉素溶液防止抗感染。各组小鼠于手术当天给药(同 1. 4. 1)
连续 7d,于次日处死,取棉球肉芽组织,在 60℃恒温器中烘
12h,称重,计算肉芽重量并计算抑制率。
1. 4. 4 对溶血素抗体生成的影响 取小鼠 50 只,随机分为
CYT高、中、低剂量组、阳性组和空白对照组,共 5 组,每组 10
只。ig给药各组鼠均连续给 7d,其中空白对照组给予生理盐
水,阳性对照组给予环磷酰胺(20mg /kg) ,CYT 高、中、低剂量组
分别依次给予 30ml /kg、20ml /kg、10ml /kg 剂量的 CYT。第 4 天
小鼠进行免疫,3 天后眼球取血 1ml,分离血清取用 NS 稀释
(500 倍)的血清样品 1ml加至反应管内,再加 10% 0. 25ml SR-
BC,置冰浴中,于每管中加入 1:10 稀释过的豚鼠血清 1ml,移至
37℃恒温水浴中保温 10min,孵毕即放入冰浴中停止反应,用
2000rpm离心 10min,取上层血清 1ml 加入 3ml 都氏试剂(碳酸
氢钠 1. 0g、氰化钾 0. 05g、高铁氰化钾 0. 2g、蒸馏水加至
1000ml)混匀,放置 10 min,于 722 分光光度计 540nm 波长处比
色,记录样品 OD值,以 HC50反映溶血素水平。
HC50 =(样品的 OD 值 /SRBC 半数溶血时的吸收度值)×
稀释倍数
1. 4. 5 对小鼠炭粒廓清功能的影响 取小鼠 50 只,随机分为
CYT高、中、低剂量组、阳性组和空白对照组,共 5 组,每组 10
只。id给药连续 7d,其中空白对照组给予生理盐水,阳性对照
组给予联苯双脂(20mg /kg) ,CYT 高、中、低剂量组分别依次给
予 30ml /kg、20ml /kg、10ml /kg 剂量的 CYT。称重,末次给药后
1h,各小鼠由尾静脉注射均匀稀释 2 倍的北京墨水 10ml /kg,
2min后立即扎眼球取血 50?l,然后隔 8min 取血一次,两次取
血各加入 0. 1%NaCO33ml,使成等容积,摇匀。于 722 分光光度
计 600nm 波长处比色,以 50μl 正常健康小鼠血溶于 0. 1%
Na2CO3 3ml溶液调零,测定 OD值,按公式计算廓清指数 K。
2 结果
2. 1 蝉翼藤氯仿提取物对巴豆油诱发小鼠耳廓肿胀的影响
结果表明,与空白对照组比较,阳性对照组、CYT 高剂量组动
物的耳廓肿胀度存在显著性差异,说明 CYT对巴豆油所致小鼠
耳廓肿胀有抑制作用,见表 1。
表 1 CYT对小鼠巴豆油所致耳廓肿胀的影响(珋x ± s,n = 10)
组别 剂量(g /kg) 耳廓肿胀度(mg) 抑制率(%)
空白对照 8. 6 ± 2. 0
地塞米松 0. 01 5. 3 ± 0. 9** 38. 37
蝉翼藤氯仿提取物 4. 95 7. 5 ± 1. 2 12. 79
蝉翼藤氯仿提取物 9. 9 6. 8 ± 1. 1* 20. 93
蝉翼藤氯仿提取物 14. 85 6. 0 ± 1. 3** 30. 23
与空白对照组比较 * P < 0. 05,** P < 0. 01(下同)
2. 2 蝉翼藤氯仿提取物对角叉菜胶致小鼠足肿胀的影响
结果表明,CYT高、中剂量组的左右足重量差值有极显著的差
异,CYT对角叉菜胶所致小鼠足肿胀有明显的抑制作用,见表
2。
表 2 CYT对角叉莱胶致小鼠足跖肿胀的影响(珋x ± s,n = 10)
组别 剂量(g /kg) 足肿胀度(mg) 抑制率(%)
空白对照 15. 8 ± 4. 4
地塞米松 0. 01 8. 5 ± 1. 8** 46. 20
蝉翼藤氯仿提取物 4. 95 13. 6 ± 3. 9 13. 92
蝉翼藤氯仿提取物 9. 9 10. 7 ± 1. 6** 32. 28
蝉翼藤氯仿提取物 14. 85 9. 5 ± 1. 5** 39. 87
2. 3 蝉翼藤氯仿提取物对小鼠棉球肉芽肿的影响 在动物体
内植入棉球会引起慢性炎症,相当于某些炎症后期的病理变化
相似的肉芽增生。实验结果显示,阳性对照组、CYT 高剂量和
中剂量组的肉芽组织重量明显轻于空白对照组,说明 CYT对实
验性肉芽组织的增生有较强抑制作用,见表 3。
表 3 CYT对大鼠棉球肉芽肿的影响(珋x ± s,n = 10)
组别 剂量(g /kg) 肉芽组织重(mg) 抑制率(%)
空白对照 24. 1 ± 5. 3
地塞米松 0. 01 14. 2 ± 2. 3** 41. 28
蝉翼藤氯仿提取物 4. 95 19. 6 ± 5. 1* 18. 83
蝉翼藤氯仿提取物 9. 9 17. 9 ± 2. 8** 25. 73
蝉翼藤氯仿提取物 14. 85 16. 8 ± 3. 7** 30. 57
2. 4 对溶血素抗体生成的影响 连续 7 天给药后,从实验结果
表明,与空白对照组比较,阳性组、高、中、低剂量组均有极其显
36中药药理与临床 2011;27(4)
著的差异,蝉翼藤氯仿提取物能显著增加小鼠血清抗 SRBC 溶
血素抗体含量,见表 4。
表 4 CYT对小鼠溶血素抗体生成的影响(珋x ± s,n = 10)
组别 剂量(g /kg) HC50
空白对照组 6. 96 ± 1. 03
环磷酰胺 0. 01 11. 63 ± 0. 65**
蝉翼藤氯仿提取物 4. 95 8. 29 ± 0. 59**
蝉翼藤氯仿提取物 9. 9 9. 57 ± 0. 71**
蝉翼藤氯仿提取物 14. 85 10. 87 ± 0. 67**
2. 5 对小鼠炭粒廊清功能的影响 连续给药 7d 后,吞噬指数
A值显著提高,血中炭粒浓度(OD值)降低,CYT高、中、低组与
空白对照组比较有显著性差异,说明 CYT提高小鼠炭粒廊清的
功能,见表 5。
表 5 CYT对小鼠炭粒廓清功能的影响(珋x ± s,n = 10)
组别 剂量(g /kg) 吞噬指数 A
空白对照 2. 59 ± 0. 65
联苯双脂 0. 01 3. 99 ± 0. 83**
蝉翼藤氯仿提取物 4. 95 3. 29 ± 0. 44*
蝉翼藤氯仿提取物 9. 9 3. 78 ± 1. 06*
蝉翼藤氯仿提取物 14. 85 3. 91 ± 0. 36**
3 讨论
咽喉炎在临床上是一种常见病、多发病,属于上呼吸道疾
病,是咽喉部黏膜组织的炎性病变,常由受凉、劳累等诱发,以细
菌、病毒侵犯咽喉部的黏膜而引起。根据发病的时间和症状不
同,可分为急性咽喉炎和慢性咽喉炎。急性咽喉炎是由细菌或
病毒引起的一种急性炎症,慢性咽喉炎是咽喉部的慢性非特异
性炎症;且急性咽喉炎反复发作可转变为慢性咽喉炎。研究表
明,炎症一般分为三期:炎症早期,又称血管反应期,表现为毛细
血管扩张和通透性增高,渗出,水肿;炎症中期,又称细胞反应
期,表现为白细胞向炎性部位集聚;炎症晚期,又称组织反应期,
表现为纤维组织增生,炎症屏障形成。由此可见,咽喉炎的病因
众多且病机涉及到多个层面、多个环节,从而提示药物治疗应
该通过多途径起综合治疗的作用;为此,本实验选择常规性的
实验,即抗炎、免疫实验来评价蝉翼藤氯仿提取物对咽喉炎的
药效作用。
对于咽喉炎,目前实验研究主要是通过药理实验来验证药
物具有某一作用,本实验采用昆明种小鼠,其广泛应用于抗炎
及免疫学研究。巴豆油是急性炎症的诱导剂,将其涂于小鼠的
耳部能引起肿胀,角叉菜胶所致小鼠足肿胀是常用的急性炎症
模型;以肉芽组织增生为特征的慢性炎症模型。主要表现为局
部充血、水肿等病理反应过程。本文实验结果显示,蝉翼藤氯仿
提取物高剂量组对巴豆油引起的急性耳肿胀有明显的抑制作
用(P < 0. 01) ;高、中剂量组对角叉菜胶所致足肿胀及棉球肉芽
肿慢性炎症均有显著的抑制作用(P < 0. 01)。绵羊红细胞免疫
所致小鼠溶血素抗体在血清中的含量及碳粒浓度的分光光度
计光密度值,高、中、低剂量组均有显著性提高,并且剂量与药
理效应之间有着一定的量效关系,表明蝉翼藤氯仿提取物能促
进特异性和非特异性抗体的产生。
从本实验研究中得到以下结论: (1)蝉翼藤氯仿提取物具
有明显的抗炎作用;(2)CYT有增强免疫功能的作用。
参考文献
1 曾南,沈映君,刘旭光,等.荆芥挥发油抗炎作用研究.中药药理与临
床,1998;9(2)∶ 99 ~ 100
神秘果提取物对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠血糖及脂代谢的影响
李 彦1,路晓庆2,刘艳薇2,卢 禁2,王金辉2,魏秀岩3*
(1 沈阳药科大学生命科学与生物制药学院 人体机能教学实验中心;2 沈阳药科大学中药学院
天然药物化学教研室;3沈阳药科大学生命科学与生物制药学院 生理学教研室,沈阳 110016)
摘 要 目的:研究神秘果提取物对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠血糖及脂代谢的影响。方法:采用一次性腹腔注射链脲佐
菌素制备糖尿病大鼠模型,分别用神秘果提取物 0. 10、0. 05、0. 025 g /kg三个剂量灌胃给药 5 周,测定其血糖、糖耐量、血脂等血清生
化指标。结果:连续服用神秘果提取物可以明显降低糖尿病大鼠的血糖,有效改善糖耐量水平,调节血脂含量。结论:该研究表明
神秘果提取物对糖尿病大鼠有保护作用。
关键词 神秘果提取物;链脲佐菌素;糖尿病;血糖
神秘果属山榄科热带常绿灌木,原产于西非、加纳、刚果一
带,果肉含有丰富奇特的糖蛋白、维生素 C、柠檬酸、琥珀酸、草
酸等,种子含有天然固醇等。神秘果的奇妙作用已引起了人们
的关注及开发利用。因果实含有特殊的糖蛋白,可将酸度高的
水果转化成琼浆玉露般的甘甜,因此神秘果可制成酸性食品的
助食剂,或制成可满足糖尿病患者需要甜味的变味剂。常生吃
熟果或浓缩锭剂具有调整高血糖、高血压、高血脂、痛风、尿酸、
头痛等功效。
糖尿病是多种病因引起的以慢性高血糖为特征的代谢紊
乱,是由于体内胰岛素绝对或相对不足或靶组织对胰岛素不敏
46 中药药理与临床 2011;27(4)
* 通讯作者