全 文 ：江西医学检验 2006年6月 第24卷 第3期
·综 述·
甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)产生于来自中胚叶起
源的细胞(Mesoderm-derivedcels),因此,人体内有多个器官
和组织可以分泌AFP,如:肝、肾、睾丸等。AFP是一种单链糖
蛋白,自它被发现以来,一直被当作是肝癌的一种特异的标
志物。1970年,Purves对肝癌病人血清作凝胶电泳时发现
AFP有不同的迁移率,此后人们对AFP的特性进行了一系列
研究,并且发现AFP分子与外源凝集素的亲和力存在差异,
而且这种差异是发生在 AFP的单糖链上[1],因此把氨基酸序
列相同而糖链不同的 AFP叫做 AFP异质体。Taketa等将血
清AFP与各种凝聚素结合后进行电泳、分离、比较,并研究它
们与肝脏疾病及肝外疾病的关系,发现原发性肝癌患者
(Hepatocelularcarcinoma,HCC)血清中 AFP与小扁豆素
(Lensculinarisagglutin,LCA)结合后电泳被分成三带,依次
命名为 AFP-L1、AFP-L2、AFP-L3,对比分析显示 HCC患者
AFP-L3比率比其它良性肝病患者明显升高[2]。后来习惯性的
把与小扁豆素结合的 AFP-L3称为 AFP异质体,它是新一代
的肿瘤标志物[3],一种恶性标志物,通常临床上所指的 AFP异
质体主要就是指 AFP-L3,近年来学者们就 AFP异质体在多
种疾病的诊断、治疗、预后等方面展开了研究。本文就
AFP-L3在疾病诊疗中的应用作一概述。
1AFP-L3的分离与检测
基于AFP异质体对外源凝集素所具有的凝集作用,国内
外学者构建了许多方法对其进行分离检测,如:凝集素亲和
层析法、改良的凝集素亲和免疫电泳自显影法[4]、凝集素亲和
电泳免疫印迹法 (Lectin-afinityelectrophoresisandantibody
blotingmethod)[5]等。目前常用的是凝集素亲和电泳免疫印迹
法,它的原理是,将病人血清在含有小扁豆素(LCA)的琼脂糖
凝胶中电泳,与 LCA结合的 AFP电泳的速度比较慢,不与
LCA结合的则较快,得以将 AFP异质体分离开,将 AFP转移
到粘附有鼠抗人 AFP抗体的硝酸纤维膜(NC)上,洗涤后加
入兔抗人 AFP抗体,再洗涤,加入辣根过氧化物标记的山羊
抗免IgG抗体,显色,此时AFP可被分离成三个条带,分别命
名为AFP-L1、AFP-L2、AFP-L3,但大多数病例只可见两个条
带,跑在最后面的条带就是 AFP-L3,利用光密度扫描,计算
AFP-L3%(AFP-L3/AFPtotal),通常以 AFP-L3%大于 15%判
为阳性。 关于此法国外已有成品试剂供应,而且实验结果稳
定可靠。此外,自动分析 AFP-L3与 AFP总量的高效液像色
谱分析系统,在日本已进入临床应用阶段,此法是利用抗
AFP糖链的单克隆抗体与LCA之间的竞争抑制作用,结合负
离子交换柱分离技术 (Anion-exchangecolumnchromatogra-
phy)来检测[6,7],关于 AFP-L3与 AFP总量的自动分析系统我
国也正在开发研究中 [8],自动化分析系统的优点是方便、快
捷、更有利于临床推广应用。
2AFP-L3在肝脏疾病诊疗中的应用
2.1 在 AFP升高的情况下 AFP-L3检测有助于良恶性肝
病的鉴别 慢性肝炎、肝炎后肝硬化、肝癌等肝脏疾病时 AFP
升高是比较常见的,因此 AFP的定量检测在诊断与预警
HCC时意义欠佳。对组织形态学证明是原发性肝癌的病人与
慢性肝病病人 (Chronicliverdiseases,CLD)血清中的 AFP及
AFP-L3进行了对比分析表明,AFP定量检测阳性率在原发
性肝癌与良性肝病之间没有显著差异,HCC病人 AFP-L3平
均值明显比CLD病人高(P<0.001),AFP-L3检测的灵敏度是
96.9%,特异性为 92.0%,准确度为 95.5%,且 AFP水平与
AFP-L3没有明显相关性(r=0.16)[9]。因此,肝癌患者血清中
AFP-L3的显著差异,说明在 AFP升高的情况下,检测
AFP-L3有利于鉴别肝脏疾病的良恶性。
AFP-L3作为鉴别肝病良恶性的指标,它有如下优点:①
它不受 AFP总量的限制,特别在 AFP升高不明显的情况下,
意义尤为突出。②无须做AFP定量的动态观察。
2.2AFP-L3检测在肝癌早期诊断中的意义 ShirakiK等对
190例活动性肝硬化病人做了长达 6年的随访,随访中被诊
断为肝癌的病人 AFP-L3明显比肝硬化病人高,阳性率是
61%,特异性为90%,回顾性的检测 AFP-L3升高的病人血
清,结果发现病人在影像学诊断前 12个月就有了 AFP-L3
的升高[10]。由此说明对于肝炎后肝硬化病人来说,定期的检测
血清中AFP-L3,有早期预警HCC发生的作用。
2.3AFP-L3检测在疗效考核中的意义 基于 AFP-L3是
由恶性细胞系所产生的一种蛋白质,所以 AFP-L3阳性是该
恶性细胞系存在的标志,不管治疗前 AFP-L3是否阳性,治
疗后 AFP-L3阳性就预示着该恶性细胞系的存在,所以它可
以作为多种治疗手段的疗效考核指标。肝癌手术治疗是优先
考虑的方式,对于 AFP-L3阳性的病人,如果术后 AFP-L3转
阴说明治疗效果好;如果术后 AFP-L3阳性,这种阳性不管
术前 AFP-L3就是阳性还是术后 AFP-L3转阳,总之术后
AFP-L3阳性具有可怕的复发率(P<0.0001),而且这种复发
率归因于肿瘤的远处转移,而非多中心肿瘤的发生。因此
AFP-L3检测是少数几个评价肝癌外科治疗疗效的指标中最
有意义的指标[11]。
2.4AFP-L3检测在判断肝病预后中的意义 不管是多种
小扁豆素结合型甲胎蛋白的应用
丁世雄 卓伟奇综述 郑 通审校
中图分类号R446.62 文献标识码C 文章编号1008-0023(2006)03-0247-03
作者单位:315010 浙江省宁波市传染病医院
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JiangxiJ.MedLabSci.June2006,Vol24,No3
肿瘤标志物对比分析研究[12],还是 AFP-L3结合病理形态学
研究[13],都得出了相同的结论,那就是 AFP-L3阳性的病人预
后较差。在AFP-L3阳性的HCC病人中,浸润性生长、包膜浸
润、隔膜形成、门静脉入浸、肝静脉入浸的比率明显比
AFP-L3阴性病人高,病理分级较差,所以 AFP-L3阳性的
HCC病人很少有病理特征较好的情况[14]。此外,SakuraiT等
对暴发性肝衰竭(fulminanthepaticfailure,FHF)患者尸体解剖
时研究发现,AFP-L3阳性也是爆发性肝衰竭中肝脏萎缩的
标志[15]。
AFP-L3在 HCC的诊断、治疗、疗效考核及预后判断等
方面有着非常重要的价值。它的这种作用的根据是,将
AFP-L3作为一种特异的恶性肿瘤标志物来看待,但 AFP-L3
阳性并不全意味着肿瘤的发生,急性肝炎时 AFP-L3也可以
阳性,本院检测了 AFP-L3数百例,其中有一例年轻男性急
性乙型肝炎患者阳性,但该患者预后较好,具体原因不太明
了。
3AFP-L3在优生优育筛查中的应用
AFP-L3在优生优育筛查中的作用,主要是用来产前筛
查唐氏综合症(Downssyndrome,DS)—又称先天愚型,21三
体综合症。通常 AFP、绒毛膜促性腺激素 (Humachorionic
gonadotrophin,HCG)、非结合型雌 (甾)三醇(Unconjugated
oestriol)三种指标被用来产前筛查唐氏综合症。
用多种外源凝集素对妊娠各个时期,胎儿脐带血血清与
羊膜液中的AFP上所结合的肝糖原性质进行分析显示,在整
个妊娠时期胎儿脐带血血清与羊膜液中的 AFP上结合的各
种肝糖原的比例是接近的,而母体血清中AFP上糖链的性质
与脐带血血清中的也是相近的,因此用外源凝集素电泳分析
母体血清中AFP糖链的性质,可以用来评估胎儿的发展状况
[16]。
为了探讨AFP在筛查唐氏综合症中的作用,YamamotoR
等收集了18名怀有DS胎儿的母亲的血清和羊膜液,另外收
集了 70名怀孕 18周的健康胎儿的母亲的血清和羊膜液,将
血清与羊膜液中的AFP用外源凝集素亲和电泳印迹分析后,
发现健康胎儿母体血清与 DS患儿母体血清 AFP上糖链存
在显著差异,怀有 DS胎儿的母亲的血清和羊膜液中的
AFP-L3水平极显著升高(P<0.01),由此可知母体内 AFP-L3
阳性与 DS患儿的出现有明显相关性,所以 AFP-L3是一个
产前筛查胎儿是否患有唐氏综合症的非常有效的指标[17]。对
AFP与 AFP-L3在筛查唐氏综合症中的作用进行对比研究
表明, 在产前筛查唐氏综合症中用 AFP-L3替代 AFP更有
意义[18]。
4AFP-L3在男性生殖系统肿瘤诊疗中的应用
睾丸肿瘤主要源自精原细胞或生殖细胞约占 95%,其次
是来自间质细胞或支持细胞。组织学上睾丸肿瘤分为精原细
胞瘤(seminoma)和非精原细胞瘤(non-seminomatousgermcel
tumors,NSGCTs)两大类。
AFP是辅助诊断NSGCTs的一个重要标志物,它在NS-
GCTs的诊断、治疗及治疗策略的制定等方面起到非常重要
的作用。研究发现在 AFP大于 5.0ng/ml的睾丸癌患者中,
96%的睾丸癌患者血清中的AFP-L3大于 50%,所以在 AFP
处于低水平状态时检测 AFP-L3是排除假阴性的非常有用
的方法[19]。同样基于 AFP-L3是由恶性细胞系所产生的一种
蛋白质,AFP-L3阳性是该恶性细胞系存在的标志,在睾丸瘤
手术治疗、放疗与化疗后检测 AFP-L3,是评价睾丸瘤活动状
况的标志[5]。
5AFP-L3阳性的肿瘤的预防与治疗
MoriwakiH等利用类维生素 A(Acyclicretionid)治疗
AFP-L3阳性的原发性癌瘤时发现,类维生素 A虽然不能降
低血清中 AFP的总量,但是明显降低了 AFP-L3的水平[20],
进一步研究发现 AFP-L3水平的降低,是由于类维生素 A促
细胞凋亡的作用 [21],类维生素 A通过胞核上特异的受体
RXRalpha(retinoidXreceptor-alpha,RXRalpha)进入细胞核
发挥作用,因此,类维生素 A是有选择性的促进 AFP-L3阳
性的细胞系的凋亡,所以类维生素A是预防与治疗 AFP-L3
阳性的细胞系的化学药物,由此针对肿瘤的预防与治疗,有
人提出了无性繁殖系清除(Clonaldeletion)理论[22]。
参 考 文 献
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个/μl。与温州医学院附属一院李小龙等[1]报道的男
RBC0～4个 /μl,WBC0～5个 /μl,女 RBC0～6
个/μl,WBC0～10个/μl结果相比,我们的偏低,
与广州医学院附二院周强等[2]和浙江医院周筱琼等
[3]报道的结果则完全一致。对于各种文献之间报道
不尽一致,可能与被检者的生理状态、饮水量、标本
采集等难控制的因素有关。本文所提供的参考值范
围,目的是为了推动临床尿液检验标准化的进程,
为使用该仪器的单位提供客观参考值,为临床诊治
提供客观可靠的依据。
参 考 文 献
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表1 426例健康人尿白细胞测定结果(个/μl,x±s)
年龄组(岁)
男性 女性
例数 浓缩尿 混匀尿 例数 浓缩尿 混匀尿
2～6
7～13
14～18
19～40
40以上
40
37
33
43
79
20.8±13.6
30.1±17.0
52.7±27.7
47.0±28.2
51.3±26.6
0.42±0.27
0.60±0.34
1.05±0.55
0.94±0.57
1.03±0.53
22
28
39
60
45
46.1±31.0
33.8±23.0
76.9±31.4
76.1±35.0
79.1±30.5
0.92±0.62
0.68±0.46
1.54±0.53
1.52±0.70
1.58±0.61
年龄组(岁)
男性 女性
例数 浓缩尿 混匀尿 例数 浓缩尿 混匀尿
2～6
7～13
14～18
19～40
40以上
40
37
33
43
79
1.73±3.04
3.27±3.60
9.55±9.48
10.9±11.04
7.27±6.67
0.03±0.06
0.07±0.07
0.19±0.19
0.22±0.22
0.15±0.13
22
28
39
60
45
3.09±5.29
2.39±4.09
8.46±7.34
14.67±12.2
12.31±9.41
0.06±0.11
0.05±0.08
0.17±0.15
0.29±0.24
0.25±0.17
表2 426例健康人尿红细胞测定结果(个/μl,x±s)
表3 426例健康人尿白细胞、红细胞参考值(个/μl)
白细胞
男性 女性 女性
浓缩尿 混匀尿 浓缩尿 浓缩尿 混匀尿
均值
标准差
95%可信界限
参考值范围
40.4
22.6
0～91.4
0～91
0.81
0.45
0～1.8
0～2
62.4
30.2
0～120.6
0～121
1.25
0.61
0～2.4
0～3
8.18
7.67
0～32.3
0～32
0.16
0.15
0～0.64
0～1
混匀尿
红细胞
男性
浓缩尿 混匀尿
6.54
6.77
0～24.7
0～25
0.13
0.14
0～0.5
0～1
220· ·