全 文 ：3讨 论
本研究首次在中国人群中证明了 CP R血浆水平与其遗传多态性存
在显著相关性 , 提示 CRP 的表达受明显的遗传调控 , 并且加性模型能
较好地解释 rs 1 8 0 0 9 4 7不同等位基因对 C R P血浆水平的影响。
C RP 的血浆水平与年龄密切相关 。 H ut c ih ns o n等对德国和苏格兰
的白人成年人群的研究表明 , 5 一科岁人群的C R P血浆水平平均为
l
t
50
一
Z
t
40
n
gl/ L
, 老龄人群中的C R p水平约为年青人群的2倍 l9] 。 我们的研
究对象均为老龄人 , 结果与H ut c ih ns on 的老龄人群的结果相比 , C R P血
浆水平较高 , 但是一样检测到了 C R P与年龄的显著正相关关系。
SN P rs 18 0 0 9 4 7的C等位基 因在白人中有报导与与较低的血浆 CRP
水平相关。 在我们的中国人样本中 , rs 1 8 0 0 9 4 7的C等位基因与较低的
血浆 C R P水平相关 , 这与已有的在国外人群中的报导是相一致的 , 提
示 CRP 表达水平的遗传关联具有跨人群的特点 。 : 5 1 8 0 0 9 4 7位于 C R p基
因的启动子区 , C等位基因可能通过改变转录因子与启动子区的结合
能力从而影响C R P n 〕 R卜 A的转录起始效率 , 进而影响C R P的表达。
CRP 是炎症反应的一个重要指标 , 与多种炎症及免疫过程和疾病
相关 , 在心血管疾病起重要的作用 l7] , 在眼科疾病中特别与 AM D和
P C V的发生有密切关系! `0] 。 因此 , r S 18 0 0 9 4 7可能通过调控CRP 表达从
而参与 A M O和 /或P C勺的发生 , 这将有待进一步的研究 。
我们的实验首次在中国人群中对 C R P的血浆水平与其遗传多态性
之间的关系进行了研究 。 结果证明 CRP 的血浆水平与其遗传多态性之
间存在显著关联 。 上述发现需要进一步在更多的地区和人群中对上述
结果进行验证 。
实验研究 · 95
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一
14 9 5
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灰毛浆果谏提取物对菜青虫拒食活性的初步研究
林启权
(广西卫生职业技术学院药学系 , 广西 南宁 53 0 023
【摘要】对灰毛浆果棣根的 95 % 乙醇提取物分别用石 油醚 、 氯仿 、 乙酸乙醋 、 正丁醇等进行革取获得各部分革取物 , 分别对 菜青虫进行拒
食活性测试 , 结果显示灰毛浆果棣根的 95 % 乙醇提取物的石 油醚和氯仿革取部分对菜青 虫具有较好的拒食活性 。
【关键词】灰毛浆果棣 ; 菜青 虫 ; 拒食活性
中图分类号 : R一 3 3 2 文献标识码 : B 文章编号 : 1 6 7 1一 5 1 9 4 ( 2 0 1 3 ) 1 9一 0 0 9 5一 0 3
防治害虫一直是人类存在以来的课题 , 化学合成农药的问世 , 是
人类同害虫斗争史上的一个里程碑。 虽然化学农药的出现有它不可比
拟的优势 , 但化学农药的大量应用 , 也带来了种种弊端 , 导致害虫抗
药性的产生 、 环境的污染 、 人兽的中毒 、 生态平衡的破坏等等问题 。
随着人们健康意识和环保意识的提高 , 人们越来越重视农产品的安全
性 , 努力开发新型植物源农药已经成为趋势。
在丰富的植物资源中 , 谏科植物中含有大量的活性成分 ,在药用
和杀虫等方面都具有独特的效果 ,是 目前研究比较深人的植物种类之
一 。 谏科 (M el i ac ea 。 ) 在全球共有 50 属5 0种以上 , 谏科植物中的次
生物质对许多重要农业害虫具有触杀胃毒 , 拒食及抑制生长发育的作
用 , 其中印谏属的印谏和谏属的苦谏 , 川谏都含有杀虫活性成分 ,可
作为植物源杀虫剂的首选植物 , 谏科植物有很多种 , 必定有很多有待
开发 , 灰毛浆果谏就是其中一种 。 灰毛浆果谏 ( iC p ad o s a 。 ine r as ce ns
( eP 川 aH dn 一 M az z . ) , 又名亚洛轻 、 假茶辣等 , 为谏科浆果谏属
植物 。 分布广西 、 四川 、 贵州 、 云南等地 。 其根和叶人药 , 为常用傣
药 , 有祛风化湿 、 行气止痛的功效 , 主治伤风感冒 、 风湿麻痹 、 痢
DOI : 10. 15912 /j . cnki . gocm. 2013. 19. 003
%
· 实验研究 ·
表2 灰毛浆果棣的氯仿提取液对菜青虫的拒食活性
样品液 浓度(m g/ n 止 )
氯仿部分 10
5
2
_
5
O 5
0 2 5
丙酮对照 一
毒力回归方程
相关系数
拒食中浓度
24 h 4 8 h
取食率(% ) 拒食率(%) 取食率(%) 拒食率(% )
2 0刀 9 2 14 0 3 0 . 9 0 8 2
2 0 57 19
.
2 53 1
.
5 6 62 4
2 l
t
o 51 5
.
8 8 3 1石2 6. 1 0
2 l
t
4 1 5 6
.
3 4 3 2夕0 2名 5
2 l
t
9 3 14 2 0 3 2
.
8 3 2 4 7
2 2 54 l l
t
8 2 3 3刀 50月2
2 5
t
5 6一 3 3石 6一
y= 0 2 2 8 3 X+ 3
.
9 l y 6 6= 0 52 6x + 3
.
1 0 8 6
O
_
9 7 5 0 6
_
9 2 8 5
表 3 灰毛浆果棣的石 油 醚革取物对菜青 虫的拒食活性
样品液 浓度O刀9/ 1刀 L )
石油醚部分
O 5
0 2 5
丙酮对照 一
毒力回归方程
相关系数
拒食中浓度
2 4 h 4 8 h
取食率(% ) 拒食率(%) 取食率(% ) 拒食率(% )
10 2 7 9 5
.
8 2 1 6
.
8 8 4 9名 5
14夕3 4 2 . 3 7 2 0 . 7 53 8名9
1 5夕2 3 8 . 0 52 52 9 24 名7
17
.
9 1 2 9
.
9 3 2 8
.
3 15 5
t
7 8
2 0
.
17 2 1刀9 2 8夕9 14 4 7
2 2 4 2 12 2 8 2 9 4 7 12 4 5
2 5
.
5 6一 3 3石 6一
y= O夕9 4 9 X+ 4 . 3 8 7 5 y= O夕3 8 6x + 4 . 1 7 9 5
0
.
9 84 7 0月 5 6 6
5月2 5 6m g/ n 〕L 1 3名9 8 6m g/ n 〕L
疾 、 腹痛 、 烫伤 、 及皮肤烧痒等症! `〕从灰毛浆果谏中报道的化学成分
主要为黄酮普124 〕。 从同属植物中发现了二砧1 5一 6〕, 备体 , 香豆素 , 脂肪
醇 l7] 和四降三砧等多种成分。 为了寻找得到更多具有植物源农药作用
的物质 , 本实验采用谏科的浆果属植物灰毛浆果谏 , 对菜青虫的拒食
作用进行初步研究 , 进而为开发利用这一植物提供信息 。
1 材料与方法
1
.
1 供试材料
灰毛浆果谏根 , (C ip a d e s s a 。 i ne r a s 。 (p e ll . ) H a dn 一M a z z . ) 2 0 0 5
年 10 月采自四川省攀枝花市盐边县蓄河乡 , 由中科院成都生物研究所
赵佐成研究员鉴定 , 标本 ( A一 18 6 ) 保存于 中国科学院成都生物研究
所天然产物中心 。 自然干燥后用植物粉碎机粉碎后备用 。
l
t
2 实验对象
菜青虫iP se ir s r叩ae L . 。 采自广西南宁市郊 , 没有施用过任何农药
的甘蓝农田 。 室内饲养两天以上 , 试验时挑选大小一致发育整齐的 3
龄幼虫 , 实验前将试虫饥饿 6 h 。 以甘蓝叶为饲料 。
l
t
3 实验方法
l
t
3
.
1 供试药液制备
将灰毛浆果谏供试样品用 95 %乙醇充分浸泡两周后 , 浸泡液用旋
转蒸发仪45 ℃减压浓缩得总浸膏 。 将总浸膏溶于 1 L 50 ℃的水中 , 依
次用和水等体积的石油醚 、 氯仿 、 乙酸乙纸 、 正丁醇萃取得不同萃取
部分 , 分别减压浓缩后得萃取浸膏 。 以50 %丙酮为溶剂配置成不同浓
度备用 。
l
t
3
t
2 拒食活性测定
样品液按梯度稀释后将 30 t 0 9新鲜的甘蓝叶的小叶片放人供试样
品的丙酮溶液中浸渍 2 一 3 5 , 自然挥发后放人养虫缸内。 对照用 50 %
丙酮。 给处理组中的菜青虫饲喂样品液处理过的叶片 , 对照组饲喂对
照液丙酮处理过的叶片。 挑选大小一致并饥饿 6 h适龄试虫幼虫 , 每养
虫缸内放置 20 头 , 分别于处理后 24 h 、 48 h观察 , 另外考虑到菜叶有
水分的自由挥发 , 另取一养虫缸放上等质量的菜叶做水分挥发对照实
验 。 最后用称取重量的方法测出成虫的拒食率 。 重复实验 5次 。 拒食
率% 一 (对照组 一处理组 ) 时照组 火 10 %
2 结果与分析
2
.
1 拒食活性测定结果与分析 (表 l)
表 1 灰毛浆果棣的不 同革取部分对菜青虫的拒食活性
2 4 h 4 8 h样品液 浓度m g/毗—取食率(% ) 拒食率 (% ) 取食率 (% ) 拒食率(%)石油醚部分 5 14夕3 4 2夕 3 2 0 5 7 3 8名9氯仿部分 5 2 0 5 7 1 9 5 2 3 15 6 6 2 4乙酸乙醋 5 2 5 3 9 0石7 3 3石0 0 . 1 8正丁醇 5 2 5 5 7 0 . 12 3 3夕0 0 . 10丙酮对照 25 t 56 一 3 t 6 一实验结果表明 (表 1 ) , 经过比较可以看出在浓度较大而且相同浓度的情况下 , 四个不同萃取物对菜青虫都显示出一定拒食活性 , 而石油醚和氯仿部分相对乙酸乙酉旨和正丁醇部分幕有较好的拒食活性 , 24 时巨食率分别为42 t刀%和 19 t 52 % 。 因此选择这两部分作进一步梯度分析。2 t 2 氯仿部分的梯度拒食活性 (表2 )应用和上述同样的测试方法对氯仿部分做进一步分析 , 将氯仿样
品液稀释成不同的浓度 , 测试氯仿不同浓度梯度都显示出拒食活性 ,
而且随着浓度的增大拒食活性也出现递增趋向。 根据数据处理处理得
到的拒食中浓度很大很大 , 没有实际意义 , 因此表格没有将这一数据
歹J出 。
2
t
3 石油醚部分的梯度拒食活性 (表3 )
应用和上述同样的测试方法对石油醚部分做进一步分析 , 在和氯
仿相同浓度梯度下 , 石油醚部分显示出更强的拒食活性 , 同样随着浓
度的增强拒食活性也出现递增趋向。 说明主要的拒食活性物质存在于
石油醚萃取部分中。
3 结论与讨论
初步研究结果显示 , 灰毛浆果谏根的95 %乙醇提取物的石油醚部
分和氯仿部分对菜青虫 3龄幼虫具有较好的拒食活性 , 可作为进一步
开发利用的参考 。 从实验数据可以看出石油醚部分的拒食活性要比氯
仿部分强 , 这与植物活性成分的性质有关 , 有文献指出从谏科植物中
提取的杀虫活性物质均为四环三砧类化合物 , 其他结构的物质均无杀
虫活性 。 因为三砧类物质极性比较小 , 用石油醚萃取的时候易溶于石
油醚因此应用以往的经验来解析石油醚的萃取物拒食活性是可通的 ,
因为四降三砧主要存在石油醚部分里 。 但以往研究到的谏科植物有效
成分均为四环三砧类化合物 , 是不是所有这一科属的都这样 , 仍有待
进一步探索 , 具有杀虫和拒食作用的植物源物质有多种 , 直接用提取
物在做活性测试而没有纯化出活性成分来做测试是本实验的一个很大
不足 。 另外 , 实验测定拒食活性所采用的方法有别于常用的浸渍叶碟
法 , 但作为初步探索 , 本实验提供的数据依然可以作为参考 , 植物杀
虫模型可以建立多种 , 我们可以通过不同实验加以验证 。 最后需要进
一步研究证实的是灰毛浆果谏除了对菜青虫有拒食作用外 , 是否还具
有胃毒 、 触杀 、 生长抑制等作用 , 这些可作为深一步的探讨。
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丹红注射液对脑缺血再灌注后凋亡诱导因子 ( IA )F 表达及神经元凋亡的影响
罗德云
(枚县中医院 , 湖南 株洲 4 1 2 3 0 0 )
【摘要】目的 探 究丹红注射液对脑缺血再灌注后 凋 亡诱导因子 ( AI F ) 表达及神经元凋亡的影响 。 方法 将 21 只 Wi st ar 大鼠随机 分成三组
甲 、 乙 、 丙 , 其中甲组为假手术组 , 乙组为局灶性脑缺血再灌注组 , 丙组则为丹红注射液治疗组 , 之后 采用改良线检法来建立大 鼠局灶性
脑缺血再灌注模型 , 甲 乙丙三组都在 1 、 3 、 5d 之后 对 大 鼠脑组 织进行 A IF 及神 经元凋亡 变化的测定 。 结果 丙组 大 鼠脑组织 IA F 及神经
元的凋亡在造模后 的 1 、 3 、 5d 都明显要低于 甲 乙组 (P < 0 . 0 5 ) , 可 见差异具有统计学意 义 。 结论 本研 究显示 , 利用丹 红注射液能有效
抑制 IA F 的表达 , 从而减少神经元的 凋亡 , 由此可 见其对于 大鼠脑缺血再灌注有着积极的保护作用 。
【关键词】丹红注射液 ; 脑缺血再灌注 ; 凋亡诱导因子 ; IA F ; 神经元凋亡
中图分类号 : R7 4 3 文献标识码 : B 文章编号 : 16 7 1一 8 1 9 4 ( 2 0 1 3 ) 1 9一 0 0 9 7一 0 2
目前 , 严重危害人类健康的疾病中有一种缺血性脑血管病 , 而脑
缺血损伤病理生理过程十分复杂 , 当前依然在不断探索之中! `〕。 随着
科技不断进步 , 再灌注损伤导致的神经元凋亡已普遍受到了广泛关
注 , 而如何减少再灌注损伤也成为了治疗急性缺血性卒中的重要工
作 。 本研究以iW s t ar 大鼠作为研究对象 , 进行了丹红注射液对脑缺血
再灌注后凋亡诱导因子 ( IA F ) 表达及神经元凋亡的影响的研究 , 取
得了良好的效果 。 现将相关结果报道如下 。
1 资料与方法
1
.
1 资本资料
实验动物 : 21 只iW st ar 大鼠 , 体质量在 2 50 一3 3 0 9 , 平均为 2巧 t g ;
年龄在3一4个月间 , 平均为 3 t 4个月 。 全部由我省总医院实验动物中心
所提供 , 大鼠之间的一般资料差异性不大 , 因此具有可比性 。 药物与
试剂 : 丹红注射液 、 A IF兔多克隆抗体 、 即用型 S A B C免疫组化染色试
剂盒 、 T U N EL凋亡检测试剂盒 。
l
t
2 基本方法
随机将 21 只 iW st ar 大鼠随机分成三组 : 甲 、 乙 、 丙 , 其中甲组为
假手术组 , 乙组为局灶性脑缺血再灌注组 , 丙组则为丹红注射液治疗
组 。 丙组给予丹红注射液 s n 止瓜g , 在手术之前30 m in进行腹腔注射 ,
每日进行一次 , 连续注射d5 。 乙组则给予等量的生理盐水。
l
t
3 动物建模
模型制作参照N a g a s aw 碍 l2] 的改良线栓法制成大鼠大脑中动脉缺血模
型 。 采用水合氯醛腹腔对大鼠进行注射麻醉 , 将其采用仰卧固定 , 分离
其右侧的颈总动脉、 颈内动脉与颈外动脉 , 同时将其颈总动脉与颈外动
脉结扎 , 利用动脉夹夹闭颈总动脉 , 迅速在颈内动脉和颈外动脉分叉的
下方剪一个切口 , 利用预先烧成圆头的尼龙线插人颈内动脉 (深度控制
在 18 t5 毫米左右 ) , 当有轻微阻力感 , 便可实现大脑中动脉阻塞以此形
成脑缺血 。 之后 , 做好相关后续工作 , 比如结扎与缝台等 。
l
t
4 A IF 免疫组化标记
A IF 免疫组化标记采用的是 SA B C法 : 将石蜡切片脱蜡至水 , 之
后放进柠檬酸盐缓冲液中 , 用微波热进行修复 巧m in 左右 , 将其利用
浓度为3%的双氧水进行室温孵育10 m in , 进而利用浓度为 10 %的山羊
血清封闭 , 再进行室温孵育 10 m in , 然后将血清倾去 (不洗 ) , 滴加
1 : 2 0 0的兔抗鼠A IF 抗体 , 在 4℃ 的冰箱里过夜孵育 , 之后进行 3 7 ℃
复温 hl , 滴加适量的生物素将羊抗兔二抗工作液进行标记 , 采用 3 7 ℃
孵育巧m in 。 除封闭血清外 , 其余步骤皆采用P B S冲洗 3次 , 每次 s m in
左右 。 之后获得相关树胶封片 , 利用显微镜进行观察分析 。 最后根据
TU N E L试剂盒提供的相关试验步骤进行操作 , 以对凋亡细胞进行检
测 , 从而获取本研究所需相关数据结果 。
1
.
5 统计学方法
本研究相关数据采用S PS S . 12 刀统计学软件进行相关统计与分析 ,
相关数据采用均数及标准差 (贡士 s ) 表示 , 并采用 t检验来检测差异
性 , 以尸 < 0 t05 差异具有统计学意义。
2 结 果
2
.
1 A IF 表达
A I F阳性细胞呈现出的是棕黄色 , 在甲组中并为见到明显的A IF
阳性细胞 ; 乙组与丙组在缺血再灌注 dl 后 , 皆呈现出了阳性细胞高峰
(但差异性显著 , 详见表 1 ) , 之后下降 ; 通过统计学分析 , 可知乙
组与丙组在同等时间内差异具有统计学意义 沪 < 0 t0 5 ) 。
表 1 乙组与丙组 大鼠缺血再灌注后 fA F阳性细胞表达对比 ( 贡士 s )
组别 例数 I /R l d lR/ 3 d lR/ s d
乙组 7 12 5 3 6士 9刀 7 8 3 2 3士 8名 9 5 3名9 士 6 . 12
丙组 7 92 t 90 士 7 t 49 7 5 t 01 士 7 t 36 4 7 t 06 士 5 t 87
P值 < O刀 5 < O刀5 < O刀 5
2
t
2 凋亡细胞检测
T U N E L检测凋亡细胞 , 其荧光显微镜显示为绿色 , D A B显色之
后 , 出现了棕黄色颗粒者则为凋亡细胞 , 而正常的细胞核则无着色 ,
主要存在缺血周围区 , 而甲组没见到明显的阳性细胞 ; 乙组与丙组在
缺血再灌注 l d后 , T UNE L凋亡细胞达到了高峰 (存在明显的差异性 ,
详见表2 ) , 之后下降 ; 乙组与丙组进行对 比分析可知 , 在同等时间
内差异具有统计学意义 沪 < 0 t 0 5 ) 。
3 讨 论
神经元的凋亡在脑缺血再灌注继发的神经损伤机制中有着十分重
要的作用 , 因此利用神经元凋亡的抑制来防治脑缺血再灌注继发神经
元损伤已经成为了当下研究的一大热点 。 总的来说 , 细胞的凋亡属于