全 文 ：2 2临床检验杂志 1 9 9 0年第 8卷第 l期
小扁豆凝集素亲和交叉免疫电泳检测
血清 , 1二抗胰蛋白酶分子异质体
魏 群 徐克成 孟宪锗
(南通医学院附属医院消化研究室 , 江苏南通 2 2 6 0 01 )
: 厂抗胰蛋白酶 (气一A n ` t汀 p s i n 简称 : 厂A钓是血
液 : :一球蛋白的主要组成成份 . 也是人体重要蛋白抑
制剂 . 自 196 3年 L胡 cr l 发现先天性缺乏患者后 , 已
引起广泛注意 ` ’ 一 ` ) . 并认为可作为甲胎蛋白诊断肝
癌的一种补充标志物 . 现已发现 气一 A T 由一条多肤
链组成 , 含 3 94 个氨基残基 . 并含有 3 个寡糖链 , 都
是通过 N 一乙酸基葡萄糖和多肤链中 46 、 83 、 2 47 位
的门冬酸胺基相连 . 视含精链的多少 气一A T 可呈现
不同的糖链异质体 . 我们利用小扁豆凝集素 (L C A )能
与糖蛋 白中 “ 一 D一甘露糖 、 : 一D 一菊萄糖墓专一性结
合的特点 , 建立了一神简便敏感的 L c A 亲和交叉免
疫电泳的方法来分离血清 : 一A T 异质体 , 同时检测
了正常人 、 急性肝炎 、 慢性肝炎 、 肝硬化 、 肝癌等患
者血清 : 、一A T . 现介绍如下 .
一 、 材料与方法
1
. 标本 正常人血清 (南通市血站供给) , 急性
肝炎 、 慢性肝炎 血清 (南通市传染病医院提供 ) , 肝硬
化、 肝癌血清来自本院内科住院病人 .
2
. 试剂 L C A 由上海第 二军 医大学药学系提
供 : 琼脂糖 购 白 西 德 S e vr a 公 司 , E E D = 一 0 . 13 ;
: 一抗胰蛋白酶抗血清由上海生物制品研究所提供 ,
批 号 为 5 60 3 : p l于8 , 6 巴 比妥一 已 比妥钠缓冲液
仃二 0 . 0 2 “ ) .
3
. 实验方法
( l) 用巴 比妥一巴 比妥钠缓冲液配制 10 9 / L 琼脂
糖溶液 , 在沸水浴中加热溶解后置 56 ℃水浴备用 . 取
10 x 2
.
sc m 玻板置水平台上 , 吸取琼脂糖溶液 3 . 6m l
放人小烧杯内 , 再吸取 .0 4 m l L C A 溶液 (含 L C A Z
gm )放人小烧杯内搅匀 . 倾入玻板上 . 待凝后在凝胶
条距阴极端 2 ~ c3 m 处打栖 , 槽中加人待检血清 5川 ,
再加浪酚蓝指示剂后作一 向电泳 . 电泳条件 : 电压
V6 /
c m
、 时问 Z h , 室温 .
(2 )第一向电泳完毕后 , 将琼脂糖凝胶移在 10 x
7c m 玻板一侧后置水 平台上 . 吸取 1 . s m l琼脂塘溶
液于小烧杯内 , 吸取 o . s m l : :一A T 抗血清也放人小烧
杯内充分混匀后 , 倾人玻板剩余部分 . 特凝后作第二
向电泳 . 电压 : l . vs / c m , 电泳 20 h . 室温 .
(3 )电泳后 , 在凝胶板上均匀极盖数层滤纸 , 加压
15 m in
, 吸除水份 , 浸人生理盐水漂洗 sI m in , 换液 2
~ 3 次 , 再用蒸馏水漂洗 2 次 , 以除去过剩 L C A 、
: 厂 A T 抗血清等 . 然后置 60 ℃温箱内烘千 , 烘千后
染色 .
(4 )染色后的玻板继续烘千 . 烘干后可用 Q J一 l 型
求积仪计算 : 一A T 异质体峰的积 . 先侧峰的总面
积 , 然后分别计算各峰的面积 , 再将各峰的位除以总
峰的积乘以 10 % 即得各峰所占的百分含量 .
二 、 结果与讨论
1
.
L C A 浓度对异质体分离的影响 L C A 在琼
脂凝胶中的浓度 、 0 .1 5 9 / L 时显单一峰 . 当浓度达
.0 59 / L 时可明显 出现二峰 , 一个峰泳动快 . 距原点
远 (峰 工 ) , 为 L C A 非结合型 气一A T . 第二峰泳动较
慢 , 距原点近 (峰 1 ) , 为 L C A 结合型 气一A T . 继续
增加 L C A 浓度时 , 峰形和峰数不变 .
2
. 不 同 气一 A T 抗血清童与 气一A T 沉淀峰高的
关系 气一 A T 抗血清的多少与 气一 A T 异质体形成的
峰密切相关 . 抗血清量过少 , 沉淀峰不清楚 ; 抗血清
过量 , 沉淀峰偏小 , 影响峰积的计算 . 应预试选定 (本
项研究凝胶中抗血清量占 4 . 2% v / v ) .
3
. 电泳条件的选择 试脸显示在 6 V / c m 下电
泳 Zh 能获得较好的电泳结果 . 也可以加浪酌蓝作为
电泳 J行示 , 当浪酚蓝泳至离加样处阮m 处时即可停 :lf
电泳 .
4
. 重复性试验 选择含 气一 A T 量较高和较低的
血清样本各一份 , 每隔一天电泳一次 , 共 4 次 . 4 次
的 “ l一 A T 异质体峰形相同 , 各峰的百分含量均相符
合 .
5
. 临床测定 共测定了 15 例正常人及各种肝病
病人 . 结果见附表 . 从附表中着出 , 原发性肝癌患者
血清中结合型 : :一 A T 含量 占全部 气一A T 的 1 .7 8 土
9
.
6%
. 与正常组结合型 : 。一 A T 含址相比具有高度显
DOI : 10. 13602 /j . cnki . jcl s . 1990. 01. 015
临床检验杂志 1 90 9年第 8卷第 1期 2 3
附表 正常人和各种肝病 气一 A丁
异质体测定结果
分 组 例数 结合型 气 ~ AT 压士D S %)非结合
型 :,一 A T
住士 SD % )
正 常 人
急性肝炎
慢性肝炎
肝 硬 化
肝 店
4
.
2土 1 8
9
.
8士 3 . 5
9 5 9土 1 . 8
“ `一 A T 含量相 比也具有高度显著性差异 (t = 4 . 0% ,
P < .0 01 )
. 与慢性肝炎组结合型 气一 A T 含量和比具有
显著性升高 ( t = 2 . 3 90 . P < 0 . 05 ) . 与肝硬化组结合型
气一A T 相 比也显著性升高 (t = 2 . 6 35 . P < .0 0 5) . 提示
结合型 气一A T 可作为临床 良恶性肝病的一个诊断指
标 .
9 0
.
2 士 3 . 5
1 2
.
6 土 4 . 1 名7 . 4 土 4 . 1
砚J`U-O1ó2
l 2
1 9
9 7 士 4 . 1
1 7
.
8 士 9 .6
90
.
3 士 2 . 6
8 2
.
2 士 9 , 6
著性差异 (t = .5 294 , P < .0 01 ) . 与急性肝炎组结合型
参 考 文 献
1
.
C h io L F
, e t a l
.
C a n c r 19 7 9 ; 4 3 : 4 9 6
.
2
. 徐克成 , 等 . 中华内科杂志 19 8 7 ; 2 6( 1) : 27 .
3
. 关赛芳 . 等 肿瘤防治研究 19 8 ;3 10 (3 ) : 174 .
4
. 徐世康 , 等 . 肿瘤 一9 5一; 一( 6 ) : 5 .
( 1 9 8 9一 I O es一 15修回 )
西 宁 地 区 8 例 健 康 成 人 血 气 分 析
夏 寅 明
(青海省西宁市第一人民医院 , S J 0 0 0 0)
本文 对 西 宁地 区 (海 拨 2 260 米 , 大气 压
58 Om m H g) 8 例健康成人进行了血气分析 , 现将结果
报道如下 .
一 、 对象和方法
1
. 对象 受检者系 19 86 年 9 月一 10 月进行体
检的健康知识分子和老干部 , 年龄在 20 岁以上 .
2
. 仪器 美国 I L一 13 03 型自动化血气分析仪 .
3
. 标本采集 受检者在饭后二小时以上 , 耳垂
热数 10 分钟左右 , 至局部皮肤明显充血 , 用手术刀
刺破皮肤 , 以血液自然流出或稍加压使血液流出为
度 . 用肝素化毛玻管取血后 , 立即进行分析 .
二 、 结果与讨论
1
. 结果 见附表 .
2
. 本资料中的 p H 位与平原地区比较〔平原地区
p H 位 7 . 3 5~ 7 . 4 5 )有增高趋 i;lJ (P < 0 . 0一) , 可能与高原
缺氧 , 呼吸增强而使二械化碳排出增多有关 .
3
.
P C o : 在 平 原 地 区 的 正 常 位 为 35 一
4 5 m m H g
, 均值为 4o m m H g , 本资料中的 p C o : 较平
原地 区偏低 (P < .0 0 1) , 这与高 叭缺氧 , 呼吸增强使
P c o : 排出增多有关 .
4
.
P o : 从附表中可以看 出 , 随打年龄增加而逐
渐下降 , 此点与平原地区相似 . 担各年龄组之 (P ) , 均
显著低于平原地 区 (P < .0 01 ) , 这与海拨 .所 , 大 夕C月夏
低 , 氧分压低 , 可能也与末稍 “ 动脉化 ” 的耳垂血而非
动脉血有关 .
附表 西宁地区 8 8例健康成年人血气分析结果
年龄(岁)
2 0 ~
3 0 ~
4 0 ~
5 0 ~
7泞协
六沸界