全 文 ：ｈｔｔｐ：／／ＸＢＹＺ．ｃｂｐｔ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ
液氨和Ｎ，Ｎ－二甲基甲酰胺（ＤＭＦ），而微溶于或不溶
于醇、醚和酮。考察谷胱甘肽在水、ＤＭＦ－水（３∶７）、
ＤＭＦ－水（７∶３）和ＤＭＦ中的溶解性，进行了比较，供
试品称量约为０．１ｇ，分别加上述溶剂１０ｍＬ，结果在
水、ＤＭＦ－水（３∶７）中能完全溶解，在ＤＭＦ－水（７∶３）
溶液中超声处理５ｍｉｎ溶解完全，在ＤＭＦ中超声处理
１５ｍｉｎ溶解完全。取上述４种溶剂进样分析，发现前
２种溶剂峰较小，后２种溶剂峰很大。为了兼顾样品
的溶解性、缓解进样针进样阻力及减小溶剂峰的影响，
最终选择用ＤＭＦ－水（３∶７）作为溶解供试品的溶剂。
在建立的有机溶剂残留量的ＧＣ检查方法过程
中，曾尝试过 ＨＰ－５、ＤＢ－６２４和 ＨＰ－ＩＮＮＯＷＡＸ　３种不
同极性的弹性石英毛细管柱进行分析实验，考察各目
标物的分离度，结果用ＤＢ－６２４的分离度和拖尾因子均
优于其他２种，故选其为分析用色谱柱进行后续实验。
药品中溶剂残留不仅有可能增加药品不良反应，
而且影响药物的稳定性。被检测的４种溶剂中甲醇
和四氢呋喃为二类溶剂，乙醇和乙酸乙酯为三类溶
剂，在《中国药典》２０１０年版二部附录［３］中都有很严
格的限量控制范围。在３批样品的检测结果中虽然
均未检出四氢呋喃和乙酸乙酯，但为了确保样品质量，
减少不良反应，建议检测谷胱甘肽中这４种残留溶剂。
实验表明该检验方法准确可靠，可用于谷胱甘肽
中甲醇、乙醇、乙酸乙酯和四氢呋喃残留量的检查。
此法能满足药品分析的要求，可作为生产过程中的质
量监控，也可用于上市产品的质量检测。
参考文献：
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酸酯原料药中有机溶剂残留量［Ｊ］．化学分析计量，
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的残留溶剂［Ｊ］．西北药学杂志，２０１４，２９（４）：３６８－３７０．
（收稿日期：２０１４－１２－１７）
ＲＰ－ＨＰＬＣ法测定藤黄果原料中羟基柠檬酸的含量
惠战锋，肖　红，惠玉虎，王新萍，杨军仁（陕西嘉禾植物化工有限责任公司，西安　７１００８６）
摘要：目的　建立藤黄果原料中羟基柠檬酸的 ＨＰＬＣ测定方法。方法　色谱柱Ａｇｉｌｅｎｔ　ＴＣ－Ｃ１８（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ）；流动
相为０．０５ｍｏｌ·Ｌ－１的无水硫酸钠水溶液（用硫酸调节ｐＨ为２．３）；检测波长２１０ｎｍ；进样量１０μＬ；体积流量１．０ｍＬ·ｍｉｎ
－１；
柱温３０℃。结果　羟基柠檬酸的线性范围为０．２０９　９～２．０９９　０μｇ，ｒ＝０．９９９　９（ｎ＝６），平均回收率９９．２％，ＲＳＤ为０．５％。结
论　该方法简单、准确、重复性好，可用于藤黄果原料中羟基柠檬酸的定量测定。
关键词：藤黄果；羟基柠檬酸；ＨＰＬＣ
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００４－２４０７．２０１５．０４．０１４
中图分类号：Ｒ２８２　　　文献标志码：Ａ　　　文章编号：１００４－２４０７（２０１５）０４－０３７１－０２
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｙｄｒｏｘｙｃｉｔｒｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎ　Ｇａｒｃｉｎｉａ　ｃａｍｂｏｇｉａ　ｂｙ　ＲＰ－ＨＰＬＣ
ＨＵＩ　Ｚｈａｎｆｅｎｇ，ＸＩＡＯ　Ｈｏｎｇ，ＨＵＩ　Ｙｕｈｕ，ＷＡＮＧ　Ｘｉｎｐｉｎｇ，ＹＡＮＧ　Ｊｕｎｒｅｎ（Ｓｈａａｎｘｉ　Ｊｉａｈｅ　Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍ　Ｌｉｍｉｔｅｄ　Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｘｉ′ａｎ
７１００８６，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａｎ　ＨＰＬＣ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｙｄｒｏｘｙｃｉｔｒｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎ　Ｇａｒｃｉｎｉａ　ｃａｍｂｏｇｉａ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ
ａｎａｌｙｓｉｓ　ｗａｓ　ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ　ｏｎ　ａ　Ａｇｉｌｅｎｔ　ＴＣ－Ｃ１８（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ）ｃｏｌｕｍｎ　ｗｉｔｈ　０．０５ｍｏｌ·Ｌ
－１　ｓｏｄｉｕｍ　ｓｕｌｆａｔｅ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ａｄ－
ｊｕｓｔｅｄ　ｐＨ　ｔｏ　２．３ｗｉｔｈ　ｓｕｌｆｕｒｉｃ　ａｃｉｄ）ａｓ　ｔｈｅ　ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ．Ｔｈｅ　ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　１．０ｍＬ·ｍｉｎ－１，ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ　ｗａｓ　２１０
ｎｍ，ｔｈｅ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｖｏｌｕｍｅ　ｗａｓ　１０μＬ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｏｌｕｍｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｗａｓ　３０℃．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ　ｃｕｒｖｅ　ｗａｓ　ｌｉｎｅａｒ　ｗｉｔｈｉｎ　ｔｈｅ
ｒａｎｇｅ　ｏｆ　０．２０９　９－２．０９９　０μｇ（ｒ＝０．９９９　９，ｎ＝６），ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｗａｓ　９９．２％，ＲＳＤ　０．５％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ
ｓｉｍｐｌｅ，ａｃｃｕｒａｔｅ，ａｎｄ　ｗｉｔｈ　ｇｏｏｄ　ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｉｌｉｔｙ．Ｉｔ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｙｄｒｏｘｙｃｉｔｒｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎ　Ｇａｒｃｉｎｉａ　ｃａｍｂｏｇｉａ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｇａｒｃｉｎｉａ　ｃａｍｂｏｇｉａ；ｈｙｄｒｏｘｙｃｉｔｒｉｃ　ａｃｉｄ；ＨＰＬＣ
　　藤黄果（Ｇａｒｃｉｎｉａ　ｃａｍｂｏｇｉａ）是双子叶植物纲藤
黄科的一种乔木，又名马拉巴罗望子，其果实和植物
树种同名，主要分布在印度、马来西亚等东南亚地
区［１］。藤黄果主要化学成分是天然的有机酸羟基柠檬
１７３西北药学杂志　２０１５年７月　第３０卷　第４期
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酸。羟基柠檬酸在抑制脂肪合成、控制食欲和减肥方
面具有良好功效，目前在欧美国家被广泛用于减肥保
健食品［２－３］。本文采用ＲＰ－ＨＰＬＣ法测定藤黄果原料
中羟基柠檬酸的含量［４］，也可以适用于藤黄果提取物
中羟基柠檬酸的含量测定，方法简便、准确、重复性好。
１　仪器与试药
１．１　仪器　美国Ｄｉｏｎｅｘ　Ｕｌｔｉｍａｔｅ３　０００高效液相色
谱仪（包括四元梯度泵、自动进样器、紫外检测器）；
ＢＰ２１１Ｄ 电 子 分 析 天 平 （德 国 Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ 公 司）；
ＫＱ２５０Ｄ超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。
１．２　试药　羟基柠檬酸钙对照品（和光纯药工业株
式会社，质量分数大于９８％）；藤黄果原料由陕西嘉
禾植物化工有限责任公司研发部提供；水为超纯水；
其他试剂均为分析纯。
２　方法与结果
２．１　色谱条件　色谱柱：Ａｇｉｌｅｎｔ　ＴＣ－Ｃ１８（２５０ｍｍ×
４．６ｍｍ，５μｍ）；流动相：０．０５ｍｏｌ·Ｌ
－１无水硫酸钠
水溶液（用硫酸调节 ｐＨ 为２．３）；体积流量为
１．０ｍＬ·ｍｉｎ－１；检测波长：２１０ｎｍ；柱温：３０℃；进
样量：１０μＬ。在上述色谱条件下，理论板数以羟基柠
檬酸峰计不低于３　０００，结果见图１。
图１　ＨＰＬＣ图
Ａ．对照品；Ｂ．藤黄果；１．羟基柠檬酸
Ｆｉｇ．１ＨＰＬＣ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ
Ａ．ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ；Ｂ．Ｇａｒｃｉｎｉａ　ｃａｍｂｏｇｉａ；１．ｈｙｄｒｏｘｙｃｉｔｒｉｃ　ａｃｉｄ
２．２　对照品溶液的制备　精密称取羟基柠檬酸钙对
照品适量，置于５０ｍＬ量瓶中，加３０ｍＬ·Ｌ－１磷酸，超
声溶解２０ｍｉｎ，放置至室温，用３０ｍＬ·Ｌ－１磷酸稀释
至刻度，摇匀，制成含羟基柠檬酸０．４１９　８ｍｇ·ｍＬ－１
的对照品溶液。
２．３　供试品溶液的制备　取藤黄果原料约０．０５ｇ，
精密称定，置于５０ｍＬ量瓶中，加３０ｍＬ·Ｌ－１磷酸约
４０ｍＬ，超声提取６０ｍｉｎ（功率２５０Ｗ，频率４０ｋＨｚ），取
出，放冷，用３０ｍＬ·Ｌ－１磷酸稀释至刻度，摇匀，０．４５μｍ
微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。
２．４　线性关系考察　精密吸取２．２项下的对照品溶
液０．５，１．０，２．０，３．０，４．０和５．０ｍＬ，分别置于
１０ｍＬ量瓶中，用３０ｍＬ·Ｌ－１磷酸定容至刻度，摇
匀，各取１０μＬ进样，按２．１项下的色谱条件进行测
定，以羟基柠檬酸进样量（μｇ）为横坐标（Ｘ），以峰面
积积分值为纵坐标（Ｙ），绘制标准曲线，得回归方程：
Ｙ＝１．２９８　Ｘ－０．０２１，ｒ＝０．９９９　９，结果表明，羟基柠
檬酸进样量在０．２０９　９～２．０９９μｇ范围内线性良好。
２．５　精密度实验　精密吸取２．２项下对照品溶液
３．０ｍＬ，置于１０ｍＬ量瓶中，用３０ｍＬ·Ｌ－１磷酸定
容至刻度，摇匀，连续进样６次，测定羟基柠檬酸峰面
积，结果羟基柠檬酸峰面积的ＲＳＤ为０．１２％，表明
仪器精密度良好。
２．６　重复性实验　精密称取同一批藤黄果原料样品
６份，分别按２．３项下制备供试品溶液，测定羟基柠
檬酸的平均质量分数１６．２８％，ＲＳＤ为１．３２％，表明
该方法重复性良好。
２．７　稳定性实验　取同一供试品溶液，分别于０，２，
４，６和８ｈ进样，测定峰面积，结果羟基柠檬酸峰面
积的ＲＳＤ为０．９８％，表明供试品溶液在８ｈ内稳定。
２．８　加样回收率实验　称取已知含量的藤黄果样品
（羟基柠檬酸含量为１６．２８％）９份各０．０３ｇ，３份为
１组，分别加入羟基柠檬酸对照品５，６和７ｍｇ，再照
供试品溶液同法制备，按２．１色谱条件进行测定，结
果羟基柠檬酸平均回收率为９９．２％，ＲＳＤ为０．５％。
２．９　样品测定　取３批样品，按照２．３项下方法制
备供试品溶液，测定峰面积，结果３批样品中羟基柠
檬酸的含量分别为１６．２８％，１６．３１％和１６．６８％。
３　结论
在样品提取过程中，比较了３种不同提取溶剂
（水、１ｍＬ·Ｌ－１盐酸［５］、３０ｍＬ·Ｌ－１磷酸），结果表
明，３０ｍＬ·Ｌ－１磷酸提取效果远远高于其他２种取
溶剂，因此，选择３０ｍＬ·Ｌ－１磷酸作为提取溶剂；以
３０ｍＬ·Ｌ－１磷酸为提取溶剂，比较超声提取法［６］和
加热回流提取法，因加热回流提取羟基柠檬酸受热分
解，导致含量偏低，因此，用超声提取法，且超声提取
法简单、实用。
本方法准确、重复性好，适用于藤黄果原料和提
取物中羟基柠檬酸的含量测定。
参考文献：
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（收稿日期：２０１４－１１－２４）
２７３ 西北药学杂志　２０１５年７月　第３０卷　第４期