全 文 ：　[收稿日期] 　2010-02-06;2010-05-15修回
　[作者简介] 　高晓杰(1978-),女 ,理学硕士 ,讲师 ,从事植物微生物学。
[ 文章编号] 1001-3601(2010)06-0361-0085-04
青海胡卢巴根瘤菌的生理生化特性研究
高晓杰1 , 刁治民1 , 2 , 范建平1
(1.青海师范大学 生命与地理科学学院 , 青海 西宁 810008;2.成都大学 , 四川 成都 610106)
　　[摘　要] 为了研究胡卢巴根瘤菌的生理生化特性 ,通过对 10株青海胡卢巴根瘤菌的生理特性试验 ,结
果表明 ,采自同一地区同一生长时期或不同生长时期的胡卢巴根瘤菌 ,在生理上有一定的差异 ,同时表明胡卢巴根瘤菌具有多样化的代谢途径;生化性状试验结果表明 ,同一地区同一生长时期或不同生长时期的胡卢
巴根瘤菌在碳源利用 、氮源利用 、矿质元素利用等方面均存在差异。[关键词] 胡卢巴;根瘤菌;生理生化特性[中图分类号] Q93 [文献标识码] A
Study on Physiological and Biochemical Characteristics of Rhizobium in
Trigonella foenum-grecum in Qinghai Province
GAO Xiao-jie1 , DIAO Zhi-min1 , 2 , FAN Jian-ping1
(1.College o f Lif e and Geography Science , Qinghai Normal University , Xining , Qinghai 810008;2.Chengdu
University , Chengdu , Sichuan 610106 , China)
　　Abstract:The re sults f rom studying phy sio logical characteristics of ten rhizobium strains isolated f rom
Trigonella f oenum-grecum in Qinghai province show ed that there was some dif ference in phy siological
characteristics of tested rhizobium strains , which indicates there is diver sity in metabo lic pathw ays among
tested strains.The results f rom study ing biological characteristic of ten rhizobium strains isolated f rom
Trigonella foenum-grecum show ed that there w as di fference in utilizat ion of carbon , nit rogen and mineral
element among ten tested strains.
Key words:Trigonel la f oenum-grecum ;rhizobium;phy siolog ical and biochemical characteristic
　　胡卢巴为豆科(Leguminosae)蝶形花亚科
(Papi l ionoideae)胡卢巴属(Trigonel la)一年生草
本植物 ,又名香豆子[ 1] 、苦草[ 2] 、雪莎(藏语),是优良
的速生绿肥和饲料作物 ,原产于欧洲南部和非洲北
部 、亚洲中部 ,在中国西藏 、新疆 、甘肃 、青海 、陕西等
省(区)[ 3] 栽培利用时间较长 ,主要作饲料 ,也可作香
料和药用作物。青海省地域辽阔 ,生态条件独特 ,对
此种环境下长期栽培利用的胡卢巴根瘤菌研究少见
报道 ,仅在部分地区的豆科植物根瘤菌资源调查中
有所提及[ 4-6] ,但并未对胡卢巴根瘤菌的生理生化特
性进行系统而深入的研究 。为此 ,于 2004年进行了
胡卢巴根瘤菌生理生化特性的研究 ,以期为青海胡
卢巴等栽培作物的根瘤菌资源保护和开发利用提供
理论依据 。
1 材料与方法
1.1 供试菌株
从青海省西宁市农田采集栽培的初花期豆科植
物胡卢巴根瘤 ,经纯化 、鉴定及回接原寄主结瘤试
验 ,获得 10个供试菌株(表 1)。
1.2 培养基
1)YMA培养基 。蔗糖 10 g ,甘露醇 10g ,酵母
膏2.0 g , K 2 HPO4 ·3H2O 0.5g , MgSO 4 · 7H 2O
表 1 胡卢巴根瘤菌供试菌株的来源
Table 1　Sources of tested rhizobium strains
菌株
Strain
宿主
Host
土壤类型
Soil type
生境
Hibita t
采集时间
Collection date
QXT603 胡卢巴 栗钙土 农 田 2004-08-23
QXT607 胡卢巴 栗钙土 农 田 2004-08-23
QXT609 胡卢巴 栗钙土 农 田 2004-08-23
QXT610 胡卢巴 栗钙土 农 田 2004-08-23
QXT611 胡卢巴 栗钙土 农 田 2004-08-23
QXT805 胡卢巴 栗钙土 农 田 2004-08-31
QXT807 胡卢巴 栗钙土 农 田 2004-08-31
QXT808 胡卢巴 栗钙土 农 田 2004-08-31
QXY809 胡卢巴 栗钙土 农 田 2004-08-31
QXT810 胡卢巴 栗钙土 农 田 2004-08-31
0.2g ,琼脂 20 g , 加蒸馏水至 1000mL , pH 7.0 ～
7.4 ,121℃灭菌 30min。
2) 3-酮基乳糖培养基。乳糖 10 g , 酵母膏
1.0g ,琼脂 20g ,pH 7.0 ～ 7.2 ,121℃灭菌 30min。
3)明胶水解培养基。蛋白胨 5.0 g ,明胶 100 ～
150g ,蒸馏水 1 000mL , pH 7.2 ～ 7.4 , 121℃灭菌
30min 。
4)水解淀粉培养基 。蛋白胨 10g , 氯化钠
5.0g ,肉膏 3.0 g , 蒸馏水 1 000mL , 可溶性淀粉
2.0g ,琼脂 20g ,121℃灭菌 30min。
5)甲基红试验(M .R)及乙酰甲基甲醇试验
(V.P)培养基。蛋白胨 5.0g , 葡萄糖 5.0 g ,
　贵州农业科学　2010 , 38(6):85 ～ 89　Guizhou Ag ricultural Science s
K2HPO 4 ·3H 2O5.0 g ,蒸馏水 1 000mL , pH 7.0 ～
7.2 , 121℃灭菌 30min。
6)西蒙斯柠檬酸盐培养基。NaCl 5.0 g , Mg-
SO 4 ·7H 2O 0.2g ,(NH 4)H 2 PO 41.0 g , K 2HPO 4 ·
3H 2O 1.0 g ,柠檬酸钠 2.0 g ,溴百里酚蓝 1%水溶液
10mL ,琼脂 20.0g ,蒸馏水 990mL , pH 7.0 , 121℃
灭菌 30min 。
7)硝酸盐还原试验培养基 。肉汁胨培养基
1000mL , KNO3 1.0 g , pH 7.0 ～ 7.6 , 121℃灭菌
30min。
1.3 试验方法
1.3.1 根瘤菌的生理特性试验 参照文献[ 7 ～ 9]
进行 。
1)3-酮基乳糖试验 。将供试菌点种在 3-酮基
乳糖平板培养基上 , 20℃培养 2 d ,形成明显菌落后
注入本尼迪克特试剂 ,室温放置 30min 以上观察结
果。
2)明胶水解试验。取供试菌的 18 ～ 24h 斜面
培养物作穿刺接种 ,用 2 支未接种的空白作对照 。
于 20℃培养 2 d 、7d 、10d 、14d 和 30d ,在 20℃以下
观察结果 。
3)淀粉水解试验。将供试菌点种于水解淀粉
培养基平板上 , 20℃培养 2 ～ 5 d ,形成明显菌落后滴
加碘液 ,观察反应结果
4)硝酸盐还原试验。将供试菌接种于硝酸盐
液体培养基中 ,置 20℃培养 1 d 、3 d 和 5 d ,重复 2
次 ,留 2个不接种作对照。在比色瓷盘小窝中倒入
少许 1 d 、3 d和 5 d的培养液 。在对照管及小窝中均
滴入格里斯氏试剂 A 液及 B液各 1滴 ,观察培养液
颜色 。溶液如为粉红色 、玫瑰红色 、橙色 、棕色等 ,表
示有亚硝酸盐存在 ,为硝酸盐还原阳性 。如无红色 ,
则加 1 ～ 2滴二苯胺试剂 ,此时如呈蓝色反应 ,则表
示培养液中仍有硝酸盐 ,无亚硝酸盐反应 ,表示无硝
酸盐还原作用。
5)甲基红试验(M.R)。接种供试菌于甲基红
培养液中 ,重复 2次 ,置 20℃培养 2 d 、4 d 、6 d和 8 d ,
在培养液中加入一滴甲基红试剂 ,观察结果。
6)乙酰甲基甲醇试验(V.P 试验)。接种供试
菌于甲基红培养液中 ,重复 2 次 ,置 20℃培养 2 d 、
4d 、6 d和8 d ,取培养液和40%NaOH 等量混合 ,加
入肌酸 0.5 ～ 1.0mg ,后猛烈振荡 , 2 ～ 10min 内观
察结果。
7)柠檬酸盐生长试验。将供试菌在西蒙斯柠
檬酸盐培养基斜面上划线接种 , 20℃培养 3 ～ 7 d。
培养基为碱性(指示剂蓝色)者为阳性 ,否则为阴性 。
8)酶活性试验 。将供试菌接种于 YMA 斜面
上 ,20℃培养 18 ～ 24 h后取一环菌苔涂于干净的载
玻片上 ,然后滴 1滴 3%～ 10%的 H2O 2 ,进行过氧
化氢酶的测定 ,有气泡为阳性反应 ,无气泡为阴性反
应;供试菌接种在营养琼脂培养斜面上 ,在第 3天和
第 7天进行脲酶的测定 ,将斜面菌苔做成2mL 浓菌
悬液 ,加入1滴酚红指示剂 ,调 pH 为 7 ,将菌悬液分
为 2份 ,在其中一管加入少许结晶的尿素(0.05 ～
0.1g),另一管不加尿素作为对照 。加尿素的试管
5min 内酚红指示剂变红 ,则表示测定菌为脲酶阳
性 ,不变则为阴性;用白金丝接种环取培养 18 ～ 24 h
的供试菌菌苔 , 涂抹在被盐酸二甲基对苯撑二胺
1%水溶液湿润的滤纸上 , 进行氧化酶的测定 ,在
10 s内菌苔现红色者为阳性 , 10 ～ 60 s 现红色者为
延迟反应 ,60s以上现红色不计 ,按阴性处理。
1.3.2 根瘤菌的生化特性试验 按文献[ 10 ～ 13]
进行。
1)碳源利用试验。以 YMA 培养基中甘露醇
和蔗糖的含碳量 2%为标准 ,分别用蔗糖 、甘露醇 、
麦芽糖 、葡萄糖 、山梨醇 、D-半乳糖 、山梨糖 、D-木
糖 、菊糖 、D-果糖和乳糖等代替 ,以不加任何碳源的
YMA培养基为对照 , 观察不同碳源对根瘤菌生长
的影响 。于 20℃培养 2 ～ 3 d ,观察根瘤菌的生长情
况 。每试验重复 3次。
2)氮源利用试验。以 YMA 培养基中醇母浸
出膏的含氮量 0.2%为标准 ,分别用酵母膏 、蛋白
胨 、KNO 3 、(NH4)SO 4和(NH4)2HPO 4等代替 ,以不
加任何氮源的 YMA 培养基为对照 ,观察不同氮源
对根瘤菌生长的影响。于 20℃培养 2 ～ 3 d ,观察根
瘤菌的生长情况。每试验重复 3次。
3)氧气利用试验。将供试菌接入 YMA 液体
培养基中 ,分别采用普通包扎(不包扎保鲜膜)、包扎
保鲜膜 1 ～ 3层 ,观察氧气对根瘤菌生长的影响 。于
20℃培养 2 ～ 3d ,观察根瘤菌的生长情况。每试验
重复 3次。
4)矿质元素利用试验。以 YMA 培养基中矿
质元素含量为标准 , 分别添加含有 Cu2+ 、Ca2+ 、
Fe
2+ 、Mg 2+ 、Mo2+等离子物质代替 ,以不加任何矿
质元素的 YMA 培养基为对照 ,观察不同矿质元素
对根瘤菌生长的影响。于 20℃培养 2 ～ 3 d ,观察根
瘤菌的生长情况。每试验重复 3次。
5)pH 试验 。将 YMA 培养基的 pH 值分别调
为 5 、6 、7 、8和 9 ,以 pH 7为对照 ,观察 pH 对根瘤菌
生长的影响 。于 20℃培养 2 ～ 3 d ,观察根瘤菌的生
长情况 。每试验重复 3次。
6)温度敏感性试验 。将接种供试菌于 4℃、
20℃、41℃、50℃和 65℃条件下培养(将培养于
41℃、50℃、65℃的菌株在对应温度的水浴中处理
30min后培养),以 20℃为对照。培养 2 ～ 3d ,观察
根瘤菌的生长情况 。每试验重复 3次 。
2 结果与分析
2.1 根瘤菌的生理特性
2.1.1 酶活性试验 从表 2可知 ,过氧化氢酶 、氧
化酶 、脲酶活性均出现了2种反应结果 。说明 ,胡卢
·86· 　　　　　　　　　　　　 　　　　　贵 州 农 业 科 学 2010 , 38 卷
表 2 胡卢巴根瘤菌酶活性的测定
Table 2　The enzyme activ ity of tested rhizobium strains
菌株
Str ain
过氧化氢酶
CA T
氧化酶
POD
脲酶
Urease
QXT603 - - -
QXT607 - - +
QXT609 - + +
QXT610 - - +
QXT611 - + +
QXT805 + + -
QXT807 - + +
QXT808 + - +
QXT809 + + +
QXT810 - + -
　注:“ +”表示阳性反应 ,“ -”表示阴性反应。
　Note:“+”indicates positive , “ -”indicates negative reaction.
巴根瘤菌具有多样化的代谢途径。
2.1.2 其他试验 从表 3可以知 ,供试菌的 3-酮
基乳糖反应 、淀粉水解反应 、结晶紫吸色和 V.P 试
验反应均为阴性 ,说明 ,胡卢巴根瘤菌细胞内缺少利
用上述各种物质的酶 。供试菌的明胶水解反应(除
QXT611为阴性)和 M.R试验反应为阳性 ,说明 ,
胡卢巴根瘤菌具有利用上述物质的能力 。供试菌中
QXT603 ～ 611和 QXT805菌株的柠檬酸盐利用反
应均呈阴性;QXT807 ～ 810菌株的柠檬酸盐利用反
应均呈阳性 ,表明胡卢巴根瘤菌中利用柠檬酸盐的
能力有差异 。QXT807 、808和 810菌株的硝酸盐利
用反应呈阳性 ,其余菌株为阴性 ,说明 ,胡卢巴根瘤
菌中利用硝酸盐的能力有差异。
2.2 根瘤菌的生化特性
2.2.1 碳源对根瘤菌生长的影响 从表 4 可知 ,
大部分糖类是所有供试菌的合适碳源。QXT805 ～
810菌株均能利用 D-果糖 ,而 QXT603 ～ 611菌株
不能利用。说明 ,根瘤菌随着根瘤的生长发育 ,对于
相同物质的利用能力有所变化。有些菌株尽管能利
用山梨糖 ,但生长一般 。
2.2.2 氮源对根瘤菌生长的影响 从表 5 可知 ,
所有供试菌株均能利用酵母膏 、蛋白胨 、KNO3和
(NH4)2HPO4 ,尤其在 KNO 3和(NH4)2HPO4的氮源
上长势好。QXT805 ～ 810菌株均能利用(NH4)SO 4 ,
且长势大多数较好 ,而 QXT603 ～ 611菌株不能在含
有(NH4)SO4的氮源上生长 。表明 ,同地区胡卢巴根
瘤菌在不同生长期对于氮源的利用有差异 。
2.2.3 氧气对根瘤菌生长的影响 从表 6 可知 ,
取自胡卢巴同一生长时期的 QXT805 ～ 810 菌株均
能在氧气不充足的情况下生长良好;而 QXT603 ～
611菌株的长势相对较差 。
表 3 胡卢巴根瘤菌的部分生理特性
Table 3　Par t phy siological characteristics o f tested rhizobium st rains
菌株 Str ain 3-酮基乳糖 淀粉水解 柠檬酸盐利用 结晶紫吸色 明胶水解 硝酸盐利用 M.R 试验 V.P 试验
QXT603 - - - - + - + -
QXT607 - - - - + - + -
QXT609 - - - - + - + -
QXT610 - - - - + - + -
QXT611 - - - - - - + -
QXT805 - - - - + - + -
QXT807 - - + - + + + -
QXT808 - - + - + + + -
QXT809 - - + - + - + -
QXT810 - - + - + + + -
　注:“ +”表示阳性反应 ,“ -”表示阴性反应。
　No te:“ +” indicates po sitive , “ -”indicates negative reaction.
表 4 不同碳源对胡卢巴根瘤菌生长的影响
Table 4　 Effec t o f different ca rbon sources on g row th o f tested rhizobium str ains
菌株
S train
碳源 Carbon source
蔗糖 甘露醇 麦芽糖 葡萄糖 山梨醇 D-半乳糖 山梨糖 D-木糖 菊糖 D-果糖 乳糖
QXT603 +++ +++ +++ +++ +++ +++ - ++ +++ - +++
QXT607 +++ +++ +++ +++ +++ ++ + ++ +++ - +++
QXT609 +++ +++ +++ +++ +++ +++ - +++ +++ - +++
QXT610 +++ +++ +++ +++ +++ +++ - ++ +++ - +++
QXT611 +++ +++ +++ +++ +++ - + ++ +++ - +++
QXT805 +++ +++ +++ +++ +++ +++ + +++ +++ +++ +++
QXT807 +++ +++ +++ +++ +++ +++ - ++ +++ + +++
QXT808 +++ +++ +++ +++ +++ +++ + ++ +++ +++ +++
QXT809 +++ +++ +++ +++ +++ +++ + ++ +++ +++ +++
QXT810 +++ +++ +++ +++ +++ - + ++ +++ + +++
　注:“ +++”表示长势很好 ,“ ++”表示长势好 ,“ +”表示长势一般 , “ -”表示不生长。
　No te:“ +++”g rowing well , “ ++” g rew w ell ,“ +”g rowing no rmally ,“ -”no g row th.
·87·　第 6 期 高晓杰 等　青海胡卢巴根瘤菌的生理生化特性研究
表 5 不同氮源对胡卢巴根瘤菌生长的影响
Table 5　Effect of different nitr ogen source on g row th of te sted rhizobium strains
菌株
Strain
氮源 Nitro gen source
酵母膏 蛋白胨 KNO 3 (NH4)SO4 (NH4)2HPO4
QXT603 ++ + +++ - +++
QXT607 ++ + +++ - +++
QXT609 ++ + +++ - +++
QXT610 ++ + +++ - +++
QXT611 ++ + +++ - +++
QXT805 ++ ++++ ++++ ++++ +++
QXT807 ++ +++ +++ +++ +++
QXT808 ++ +++ +++ +++ +++
QXT809 ++ ++++ ++++ ++++ +++
QXT810 ++ +++ +++ + +++
　注:“++++”表示长势很好,液体呈淡绿色;“ +++”表示长势好;“++”表示长势较好;“+”表示长势一般;“-”表示不生长。
　No te:“ ++++” g rowing well , the liquid w as pale g reen;“ +++” g rew w ell;“ ++” g row ing well;“ +”g r owing gene rally;
“ -” no gr ow th.
表 6 氧气对胡卢巴根瘤菌生长的影响
Table 6　Effect of o xygen on g row th of tested rhizobium strains
菌株
S train
普通包扎
Common
cover
1 层保鲜膜
P revention film w ith
a layer
2 层保鲜膜
P revention film w ith
two lay ers
3 层保鲜膜
P revention film with three
lay ers
QXT603 ++ ++ + +
QXT607 ++ + + +
QXT609 + + + +
QXT610 ++ ++ + +
QXT611 + + + +
QXT805 ++ +++ +++ ++
QXT807 + ++ ++ ++
QXT808 ++ ++ ++ ++
QXT809 +++ ++++ ++++ +++
QXT810 ++ ++ ++ ++
　注:“++++”表示长势很好,有菌膜及絮状沉淀;“+++”表示长势较好 ,浑浊度高;“ ++”表示长势一般;“+”表示长势较差。
　Note:“ ++++”g rowing well , the re a re bacteria g rowing membrane f locculent precipitate;“ +++” g row ing better , the tur-
bidity is high;“++” g row ing gene ral;“ +” g row ing w o rse.
2.2.4 矿质元素对根瘤菌生长的影响 从表 7可
知 ,供试菌株均能利用 Mg2+和 Mo2+ ,在含有 Cu2+
的培养液中不能生长 , QXT607 ～ 611 和 QXT808
菌株在含有 Ca2+和 Fe2+的培养液中不能生长 。表
明 ,同地区胡卢巴根瘤菌对于矿质元素的利用不同 。
2.2.5 pH 值对根瘤菌生长的影响 从表 8可知 ,
供试菌株均能在 pH 5 ～ 9的 YMA 培养基上生长 ,
在 pH 7 、pH 8时长势相对较好。QXT807 、808菌株
在培养液 pH 6 ～ 9 时均有菌膜或菌环产生 ,菌株
QXT809随培养液 pH 的增大颜色趋向绿色 。
2.2.6 温度对根瘤菌生长的影响 从表 9可知 ,
供试菌株均能在 20℃和 41℃的条件下生长 , 且
QXT805 ～ 810菌株长势相对较好 。QXT805 ～ 810
菌株均能在 50℃下生长 ,QXT805菌株能在 65℃下
生长 ,表现出较强的耐高温特性;QXT805 、808 和
809菌株能在 4℃的低温条件下生存 ,表现出耐低温
特性 ,这些可能与所处的特殊高原环境有关。
表 7 不同矿质元素对根瘤菌生长的影响
　Table 7　Effect of different mineral elements on gr ow th
of te sted rhizobium strains
菌株 Srain Cu2+ Ca2+ Fe2+ Mg2+ Mo2+
QXT603 - + + ++ ++
QXT607 - - - + ++
QXT609 - - - + ++
QXT610 - - - + ++
QXT611 - - - + ++
QXT805 - +++ ++ +++ +++
QXT807 - ++ ++ ++ +++
QXT808 - - - ++ +++
QXT809 - +++ ++ +++ +++
QXT810 - ++ - ++ ++
　注:“ +++”表示长势很好 ,“ ++”表示长势好 , “ +”表示
长势一般 ,“ -”表示不生长。
　Note:“ +++” gr owing w ell ,“ ++” g rew well ,“ +” g row-
ing no rmally , “ -” no g row th.
·88· 　　　　　　　　　　　　 　　　　　贵 州 农 业 科 学 2010 , 38 卷
表 8 不同 pH 值对胡卢巴根瘤菌生长的影响
Table 8　Effect of different pH on g row th o f tested rhizobium strains
菌株 Strain pH5 pH6 pH7 pH 8 pH9 液体变化特征 Solution cha racteristic
QXT603 + + ++ ++ + -
QXT607 + + ++ ++ + -
QXT609 + + ++ + + -
QXT610 ++ ++ +++ +++ ++ -
QXT611 + + ++ + + -
QXT805 + + ++ + + -
QXT807 + + ++ ++ + 在 pH 值 6～ 9 均有菌膜或菌环
QXT808 + + ++ + + 在 pH 值 6～ 9 均有菌膜或菌环
QXT809 + + ++ + + 随 pH 值的增大 ,颜色趋向绿色
QXT810 + + ++ + + -
　注:“ +++”表示长势很好 ,“ ++”表示长势好 ,“ +”表示长势一般 , “ -”表示液体无变化。
　No te:“ +++”g rowing well , “ ++” g rew w ell ,“ +”g rowing no rmally ,“ -”no chang in the liquid.
表 9 温度对胡卢巴根瘤菌生长的影响
　Table 9　Effect of diffe rent tempera tur e on gr ow th o f
te sted rhizobium strains
菌株 Str ain 4℃ 20℃ 41℃ 50℃ 65℃
QXT603 - + ++ - -
QXT607 - + ++ - -
QXT609 - + + - -
QXT610 - + ++ - -
QXT611 - + + - -
QXT805 + +++ +++ ++ +
QXT807 - ++ ++ + -
QXT808 + ++ ++ + -
QXT809 + +++ +++ ++ -
QXT810 - + + + -
　注:“+++”表示长势很好 ,“ ++”表示长势好 ,“ +”表示
长势一般 ,“ -”表示不生长。
　No te:“ +++” g rowing well ,“ ++” g rew w ell ,“ +” gr ow-
ing normally ,“ -”no g row th.
3 结论
本试验结果表明 ,同一地区同一生长期或不同
生长期的胡卢巴根瘤菌 ,在生理上有一定的差异 ,说
明胡卢巴根瘤菌具有多样化的物质代谢途径 。在生
化性状方面:同一地区同一生长期或不同生长期的
根瘤菌在氮源利用 、矿质元素利用和抗逆性等方面
也存在差异。表明 ,胡卢巴根瘤菌是一个复杂的群
体 ,在生理生化方面表现出多样性 ,值得进一步深入
研究 。
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(责任编辑:冯　卫)
·89·　第 6 期 高晓杰 等　青海胡卢巴根瘤菌的生理生化特性研究