全 文 ：竹壳葫芦茶的质量标准研究
何 琳 , 宋凤兰＊ , 何洋 , 林育如 , 陈思华　(广东药学院 ,广东广州 510006)
摘要　[目的 ]建立竹壳葫芦茶质量标准。 [方法 ]采用薄层色谱法(TLC)对竹壳葫芦茶中的救必应进行定性鉴别;采用高效液相色谱法
(HPLC)测定竹壳葫芦茶中的槲皮素含量。 [结果] TLC结果显示 ,竹壳葫芦茶在与救必应对照药材相应位置上 ,呈相同颜色的斑点 ,阴
性对照无干扰。竹壳葫芦茶槲皮素含量为 41.03 ～ 49.06μg/包。 [结论]该研究建立的定性及定量方法简单可行 、重复性好 , 能有效地
控制竹壳葫芦茶的质量。
关键词　竹壳葫芦茶;质量标准;救必应;槲皮素
中图分类号　S37　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2011)02-00799-03
QualityStandardforZhuke-HuluTea
HELinetal　(GuangdongPharmaceuticalUniversity, Guangzhou, Guangdong510006)
Abstract　[ Objective] ToestablishthequalitystandardforZhuke-Hulutea.[ Method] IlexrotundaThunb.inZhuke-Huluteawereidenti-
fiedbyTLC.ThecontentofquercetininZhuke-HuluteawasdeterminedbyHPLC.[ Result] Spotsobtainedfromthetestsolutionshadthe
samecolorasIlexrotundaThunb.referencesolution, andtheblanksolutionhadnointerference.Thecontentsofquercetinwereintherange
of41.03-49.06μg/baginZhuke-Hulutea.[ Conclusion] Themethodsofidentificationandquantificationwereaccurate, realizableandre-
producible.ItcouldbeusedefectivelyforthequalitycontrolforTea.
Keywords　Zhuke-HuluTea;Qualitystandard;IlexrotundaThunb.;Quercetin
作者简介　何琳(1980-),女 ,广东雷州人 ,实验师 ,硕士 ,从事药物新
剂型与新技术的研究 , E-mail:helin721@ 163.com。 ＊通讯
作者。
收稿日期　 2010-09-27
　　紫金竹壳葫芦茶又名百草茶 、“仙茶 ” ,有近 400年的饮
用历史 [ 1] 。该茶是通过特殊工艺配制而成 ,用竹壳包装成葫
芦状 ,茶中含有鸭脚木叶 、救必应 、葫芦草 、鸡骨草 、金钱草 、
金银花 、车前草 、金不换等中草药。竹壳茶清热消暑 ,利湿消
滞 ,用于治疗暑热 、感冒食滞 、大肠湿热等病症 ,效果显著 。
汤味苦中带甘 ,醇和宜人。关于竹壳葫芦茶质量标准方面的
研究 ,国内外均无报道。为此 ,笔者对其中的主要成分救必
应进行了定性鉴别 ,对车前草和金银花中所含的槲皮素含量
进行了测定 ,以期为紫金竹壳葫芦茶质量标准的制定提供
参考。
1　仪器与试药
1.1　主要仪器 　Waters600E型高效液相色谱泵 、Waters
2487型紫外检测器和 EmpowerPro工作站均为美国 Waters
公司产品;SHIMADZUC18色谱柱(5μm, 4.6mm×150.0mm,
岛津公司);AT-350型柱温箱(天津奥特赛恩斯仪器有限公
司);KQ-500型超声波清洗器(频率 40kHz;功率 500W,昆山
市超声仪器有限公司)。
1.2　主要试药　救必应对照药材(批号:1076-9901)和槲皮
素对照品(批号:100081-200406)均购自中国药品生物制品检
定所 , 竹壳葫芦茶 (批号:120808029, 090403, 0904016,
0905012,广东省紫金县金葫芦保健品有限公司);甲醇为色
谱纯 ,水为重蒸水 ,其他试剂均为市售分析纯。
2　方法与结果
2.1　救必应的薄层色谱(TLC)鉴别
2.1.1　样品溶液的制备。称取救必应对照药材 1 g、不同批
号的竹壳葫芦茶 20 g、处方组成中除救必应外的其余成分制
成不含救必应的阴性对照品 ,分别加乙酸乙酯 75ml,超声处
理 30 min,过滤 ,滤液挥干 ,残渣加无水乙醇 2 ml使其溶解 ,
分别作为救必应对照药材溶液 、供试品溶液及阴性对照
溶液。
2.1.2　TLC鉴别方法 。依据薄层色谱法(《中国药典 》2005
年版一部附录Ⅵ B)试验 ,吸取上述 3种溶液各 2 μl,分别点
于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶 G薄层板上 ,以混
配液(三氯甲烷∶甲醇∶甲酸 =6∶1∶1)为展开剂 ,展开 、取出 、
晾干 ,喷以 10%硫酸乙醇溶液 , 105 ℃加热至斑点显色清晰。
2.1.3　TLC鉴别结果 。供试品色谱中 ,在与对照药材色谱
相应的位置上 ,显相同颜色的斑点 ,阴性对照在相应的位置
上无干扰 ,结果见图 1。
注:1.样品(120808029);2.样品(090403);3.样品(0904016);4.样
品(0905012);5.阴性对照;6.救必应对照药材。
Note:1.Samples(120808029);2.Samples(090403);3.Samples
(0904016);4.Samples(0905012);5.Negativecontrol;6.
ComparedmedicinalmaterialsofIlexrotundaThunb.
图 1　竹壳葫芦茶中救必应的TLC色谱图
Fig.1　TLCchromatogramofIlexrotundaThunb.inZhuke-
HuluTea
2.2　高效液相色谱法法测定竹壳葫芦茶中槲皮素含量
2.2.1　样品溶液的制备。
2.2.1.1　对照品溶液的制备。精密称取槲皮素对照品
10.02 mg置于 100 ml容量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻度 ,
安徽农业科学 , JournalofAnhuiAgri.Sci.2011, 39(2):799-801 责任编辑　高晓余　责任校对　卢瑶
DOI :10.13989/j.cnki.0517-6611.2011.02.104
摇匀 。移取上述溶液 10ml置 25 ml容量瓶 ,加甲醇定容 ,作
为对照品贮备液(槲皮素 40.80μg/ml)。
2.2.1.2　供试品溶液的制备。取竹壳葫芦茶(批号:
090403)约 3 g,精密称量 ,置具塞锥形瓶中 ,精密加入甲醇 20
ml,密塞 ,称定重量 ,超声处理 30 min,放冷 ,再称定重量 ,用
甲醇补足减失的重量 ,摇匀 , 0.45 μm微孔滤膜过滤 ,取续滤
液 ,即得供试品溶液 。
2.2.1.3　阴性对照液的制备。取处方组成中除金银花 、金
钱草外的其余成分制成不含金银花 、金钱草的阴性对照品 ,
按 “2.2.1.2”制得阴性对照溶液。如图 2-C所示 ,在槲皮素
出峰位置未出现吸收峰 ,说明竹壳葫芦茶中的其他成分对槲
皮素的含量测定没有干扰。
2.2.2　色谱条件。色谱柱为 SHIMADZUC18色谱柱(5 μm,
4.6mm×150.0 mm,岛津公司);以甲醇 -0.15%磷酸溶液
(50∶50)为流动相;检测波长 360 nm,柱温 35 ℃[ 2] 。在此条
件下 ,竹壳葫芦茶中槲皮素分离良好(图 2)。
注:A.对照品;B.供试品;C.阴性对照。
Note:A.Referencesubstances;B.Testedsubstances;C.Negativereferencesubstances.
图 2　对照品、供试品及阴性对照溶液的高效液相色谱图
Fig.2　HPLCchromatogramsofreferencesubstances, testedsubstancesandnegativereferencesubstances
2.2.3　方法学考察 。
2.2.3.1　线性范围。精密吸取上述槲皮素对照品溶液 ,加
甲醇稀释成槲皮素浓度分别为 0.816、1.632、3.264、4.896、
6.528、8.160 μg/ml的溶液 ,依次进样 10 μl。以峰面积(Y)
为纵坐标 ,以进样浓度(X)为横坐标进行线性回归 ,得回归
方程 Y=3.638×104X-1.068×104 ,相关系数 r=0.999 6。
表明槲皮素浓度在 0.816 ～ 8.160 μg/ml范围内与色谱峰面
积呈良好线性关系。
2.2.3.2　精密度试验。取浓度为 4.896 μg/ml的槲皮素对
照品溶液 10 μl连续测定 5次 , RSD为 0.17%,表明仪器精密
度良好。
2.2.3.3　稳定性试验。取同一供试品溶液(批号:090403)在
0、2、4、6、8h分别进样 10μl,记录峰面积 ,结果表明:供试品溶
液在室温放置 8h内稳定 ,槲皮素峰面积 RSD为 1.75%。
2.2.3.4　重复性试验。将竹壳葫芦茶(批号:090403),平行
提取制备 6份供试品溶液 ,分别进样测定 , RSD为 1.26%(n
=6),表明该方法重复性良好 。
2.2.3.5　加样回收率试验 。精密称取已知含量的竹壳葫芦
茶(批号 090403)各 9份 ,加入相应量的槲皮素对照品 ,按供
试品溶液的制备方法处理并测定。加样回收率试验结果见
表 1。槲皮素平均回收率为 97.7%, RSD为 1.66%,表明该
方法准确 、可靠。
表 1　回收率试验结果(n=9)
Table1　Testresultsofrecovery(n=9)
编号
Number
样品重∥g
Sampleweight
槲皮素量∥g
Quercetinamount
加入量∥g
Addition
测得量∥g
Measuredamount
回收率∥%
Recovery
平均回收率∥%
Averagerecoveryrate RSD∥%
1 1.5041 34.53 16.32 50.23 96.2 97.7 1.66
2 1.4982 34.40 16.32 50.36 97.8
3 1.4953 34.33 16.32 49.97 95.8
4 1.5001 34.44 32.64 65.69 95.7
5 1.5082 34.63 32.64 67.53 100.8
6 1.4978 34.39 32.64 66.27 97.7
7 1.5019 34.48 48.96 82.55 98.2
8 1.5022 34.49 48.96 82.96 99.0
9 1.5053 34.56 48.96 82.55 98.0
2.2.3.6　样品含量测定。取竹壳葫芦茶样品 4批 ,照供试
品溶液制备的方法 , 0.45 μm微孔滤膜过滤后进样 ,不同批
号竹壳葫芦茶含量见表 2。
3　结论与讨论
3.1　TLC鉴别　在救必应的提取中 ,分别考察了超声 、索
氏 、回流提取 3种方法对提取效率的影响 ,其中以超声提取
效率高且方便 ,故采用超声提取 30 min。分别采用对照药
材 、样品 、阴性对照溶液 ,以混配液(三氯甲烷∶甲醇∶甲酸 =6
∶1∶1)为展开剂进行薄层鉴别 。由图 1可知 ,斑点分离清晰 ,
无拖尾 ,阴性亦无干扰 ,说明在展开剂中加入酸可改善其拖
尾现象 。试验中也曾尝试使用碘蒸气或 10%硫酸乙醇作为
显色剂 ,结果表明 ,采用 10%硫酸乙醇为显色剂效果较佳。
800 　　　　　　　　　　安徽农业科学　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　2011年
表 2　样品测定结果(n=3)
Table2　Determinationresultsofsamples(n=3)
批号
Batchnumber
槲皮素含量∥μg/包
Quercetincontent RSD∥%
120808029 41.03 1.57
090403 45.91 1.26
0904016 49.05 0.85
0905012 46.40 1.31
3.2　色谱条件的优化　对于流动相的选择 ,笔者通过预试
验比较了甲醇 -水溶剂 、甲醇 -水 -磷酸溶剂 、乙腈 -甲醇
-水溶剂 、乙腈 -水溶剂及乙腈 -水 -磷酸溶剂系统 ,结果
显示甲醇 -水 -磷酸溶剂系统效果较好。对不同比例流动
相的考察结果表明 ,甲醇 -0.15%磷酸溶液(50∶50)为流动
相分离效果好。样品超声提取 30 min已基本提取完全。因
此 ,选择 30min作为超声处理时间。
3.3　其他　该研究建立的竹壳葫芦茶质量标准方法简便 、
可靠 ,易于操作 ,重现性好 。图 1中蓝色荧光斑点为鸭脚木
叶中的成分 ,与文献 [ 3]报道一致 。目前关于鸭脚木叶的研究
报道较少 ,因此鸭脚木叶的化学成分 、药理和药效作用有待
于进一步研究。
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(4):514-515.
(上接第 796页)
该专利中羟基芪优先选用白藜芦醇 ,它和 VC结合起到增效
作用 ,共同刺激真皮纤维原细胞的增殖 ,刺激皮肤坚固化 、抗
老化 ,促进皮肤或黏液膜的重建 ,且有效缓解皮肤镇痛 。专
利中还有亲水凝胶化剂 、亲油凝胶化剂 、附加抗氧化剂 、螯合
剂和清除自由基的药剂等活性成分。此专利可制成霜剂 、药
膏 、洗剂 、浆液 、凝胶 、糊剂 、气溶胶 、泡沫和除臭剂产品等 。
Toppo[ 20]申请了用反式白藜芦醇治疗血液胆固醇过高的
专利。专利指出 ,在人类的血液中 ,通过日常服用反式白藜
芦醇 50 ～ 1 000 mg,高密度脂蛋白(HDL)的水平是最适宜
的 ,并且此剂量也减少了低密度脂蛋白(LDL)的水平 ,而高
密度脂蛋白的增加和低密度脂蛋白的减少就会降低血胆脂
醇过多的危险 。此专利最好的服用剂量约为 500 mg,用药形
式可为丸剂 、胶囊口服 ,或作为经皮贴片。
3　结语　
白藜芦醇在预防和治疗癌症 、老年痴呆等大脑失调症 、
皮肤老化病和心血管疾病等方面得到了广泛应用 ,且随着对
白藜芦醇生理功能研究的不断深入 ,其应用的领域也逐步趋
向细节化 、实用化和简洁化 ,这对于科技高度发达的当今社
会来说 ,是完全符合社会需要的。因此 ,随着国内外学者和
企业的不断努力 ,白藜芦醇会有更大的发展前景 ,其在保健
和医药方面的应用也将会更为广泛 。
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80139卷 2期　　　　　　　　　　　　　　　　何琳等　竹壳葫芦茶的质量标准研究