全 文 ：收稿日期:2015 － 03 － 28
作者单位:1. 中国医科大学药学院，沈阳 110001;2. 辽宁省建
平县医院药局，朝阳 122400;3. 辽宁省中药研究所，沈阳 110041
* 通信作者
DOI:10． 14053 / j． cnki． ppcr． 201512021
HPLC法同时测定鸡眼草中染料木素和山柰酚的含量
靳 鑫1，秦晓红2，许 莉3，宿 冰1，穆晓婷1，刘豪华1，李亚丽1，祝 峥1，张东方1*
［摘 要］ 目的 建立 HPLC 同时测定鸡眼草药材中染料木素和山柰酚含量的方法。方法 采用 ＲP-
HPLC 法。色谱柱为 Diamons C18(150 mm ×4. 6 mm，5 μm)，流动相为甲醇 －体积分数 0. 1%磷酸水溶液(体积
比为 72∶ 28)，流速为 1. 0 mL /min，检测波长为 370 nm，柱温为 30 ℃。结果 染料木素和山柰酚质量浓度分别在
0. 50 ～ 4. 02 mg /L 和 0. 15 ～ 1. 20 mg /L 内与峰面积呈良好的线性关系，平均回收率分别为 99. 7 %和100. 9%，
ＲSD 分别为 0. 1%和 0. 7% (n = 6)。结论 建立的方法简便，准确，重现性好，可用于鸡眼草药材中染料木素和
山柰酚的含量测定。
［关键词］ 鸡眼草;染料木素;山柰酚;高效液相色谱;含量测定
Simultaneous determination of Genistein and Kaempferol from Kummerowia striata
by HPLC JIN Xin1，QIN Xiao-hong2，XU Li3，SU Bing1，MU Xiao-ting1，LIU Hao-hua1，LI Ya-li1，ZHU
Zheng1，ZHANG Dong-fang1* (1. School of Pharmacy，China Medical University，Shenyang 110001，China;
2. Department of Pharmacy，Jianping Hospital of Liaoning Province，Chaoyang 122400，China;3. Traditional Chinese
Medicine Ｒesearch Institute of Liaoning Province，Shenyang 110041，China)
［Abstract］ Objective To establish a method for the simultaneous quantitative analysis of genistein and
kaempferol in the aerial parts of Kummerowia striata with HPLC. Methods The chromatographic column was Dia-
monsil C18(150 mm ×4. 6 mm，5 μm);the mobile phase was methnol and aqueous solution containing 0. 1 % phos-
phoric acid with the volume ratio of 72∶ 28 and the flow rate was 1. 0 mL /min;the UV detection wavelength was 370
nm;the oven temperature was 30 ℃. Ｒesults The linear ranges of genistein and kaempferol were 0. 50 ～ 4. 02 mg /L
and 0. 15 ～ 1. 20 mg /L，respectively. The average recoveries (n = 6)of genistein and kaempferol were 99. 7% with
ＲSD of 0. 1%，100. 9% with ＲSD of 0. 7%，respectively. Conclusion The method is simple and accurate，it can be
used to determine genistein and kaempferol in the aerial parts of Kummerowia striata.
Key words:Kummerowia striata;Genistein;Kaempferol;HPLC;Content determination
0 引言
鸡眼草［Kummerowia striata (Thunb)Schin-
dl.］为豆科(Leguminosae)鸡眼草属植物，干燥全
草入药，味苦，性凉，归胃、大肠经，有清热解毒、健
脾利湿的功效，临床主要用于治疗胃肠炎、痢疾和
泌尿系统感染，尤其对婴幼儿腹泻［1］和婴幼儿轮
状病毒肠炎［2］有显著疗效，且服用安全。
据文献报道，从鸡眼草乙酸乙酯提取物中分
离得到大量黄酮类化合物［3］，药理实验显示出较
好的抗炎活性［4-5］，具有重要的开发价值。目前，
对鸡眼草中的总黄酮进行含量测定多用紫外分光
光度法［6］，但此法操作繁琐，干扰因素众多，实验
精密度较差。为更好地控制鸡眼草药材及其产品
的质量，本文建立 HPLC 法同时对鸡眼草中黄酮
类成分染料木素和山柰酚的含量进行测定。
1 仪器与试药
1. 1 仪器 SHIMADZU UV-1700 紫外 －可见光
检测仪(日本 Shimadzu 公司)，Agilent 1260 高效
液相色谱仪(美国 Agilent 公司)，SB4200DT 超声
波清洗仪(宁波新芝生物科技股份有限公司)，
BS110S 分析天平(德国 Sartorius公司 0. 01 mg)。
1. 2 试药 染料木素对照品(批号:111704-
200501)、山柰酚对照品(批号:110861-200808)购
自于中国药品生物制品检定所。鸡眼草购于河北
安国药材市场(产地:辽宁，批号:20131026)，经中
国医科大学张东方教授鉴定为鸡眼草 Kummerow-
ia striata (Thunb)Schindl. 地上部分。甲醇(色谱
纯，山东禹王实业有限公司)，纯净水(杭州娃哈哈
集团有限公司)，磷酸(分析纯，沈阳经济技术开发
区试剂厂)，其他试剂均为市售分析纯试剂。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 Diamonsil C18色谱柱(150 mm ×
·6741· 实用药物与临床 2015 年第 18 卷第 12 期 Practical Pharmacy And Clinical Ｒemedies，2015，Vol． 18，No． 12
4. 6 mm，5 μm)，流动相:甲醇 －体积分数 0. 1%的
磷酸水溶液(72 ∶ 28)，流速:1. 0 mL /min，检测波
长:370 nm，柱温:30 ℃，进样量:10 μL。见图 1。
图 1 对照品溶液(A)和供试品溶液(B)的 HPLC 图
注:1. 染料木素，2. 山柰酚
2. 2 溶液的制备
2. 2. 1 混合对照品溶液 精密称取染料木素对
照品 5. 02 mg 和山柰酚对照品 5. 01 mg，分别置于
100 mL 容量瓶中，用色谱甲醇溶解并稀释至刻度，
摇匀，制得染料木素和山柰酚对照品质量浓度分
别为 50. 2 mg /L 和 50. 1 mg /L 的对照储备液。精
密量取染料木素对照品储备液 1. 0 mL 和山柰酚
对照品储备液 0. 3 mL，置于同一 100 mL 容量瓶
中，用色谱甲醇定容，摇匀，0. 45 μm 微孔滤膜滤
过，即得混合对照品溶液。
2. 2. 2 供试品溶液 称取干燥至恒重的鸡眼草
药材约 1. 0 g，置 100 mL 具塞锥形瓶中，精密加入
色谱甲醇 50 mL，称定质量，浸泡 30 min 后，超声
提取 30 min，取出放冷至室温，再称定质量，用色
谱甲醇补足损失的质量，摇匀，滤过，经 0. 45 μm
微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。
2. 3 线性关系考察 精密吸取混合对照品溶液
1. 0、2. 0、3. 0、4. 0、5. 0 mL，分别置于 10 mL 容量
瓶中，用色谱甲醇稀释，定容至刻度，摇匀。按
“2. 1”项色谱条件，注入液相色谱仪，记录峰面积。
以各对照品溶液的质量浓度 X (mg /L)为横坐标、
色谱峰面积 Y为纵坐标，求得回归方程，见表 1。
2. 4 精密度试验 精密吸取混合对照溶液
10 μL，在“2. 1”项色谱条件下，连续测定色谱峰面
积 6 次，计算染料木素和山柰酚峰面积的 ＲSD 分
别为 0. 8%和 1. 1%，表明仪器精密度良好。
表 1 2 种化合物的回归方程
对照品 回归方程 r 线性范围(mg /L)
染料木素 Y = 174． 462 X － 31． 53 0． 999 5 0． 50 ～ 4． 02
山柰酚 Y = 30． 898 X + 13． 38 0． 999 6 0． 15 ～ 1． 20
2. 5 重复性试验 取鸡眼草药材，按“2. 2. 2”项
下方法平行制备供试溶液 6 份，在“2. 1”项色谱条
件下分析，计算染料木素和山柰酚峰面积的 ＲSD
分别为 1. 0%和 1. 7%。表明方法重现性较好。
2. 6 稳定性试验 取同一供试溶液，室温放置，
分别在 0、2、4、6、8、10、12 h，按“2. 1”项色谱条件
进样分析，计算染料木素和山柰酚峰面积的 ＲSD
分别为 1. 4% 和 0. 9%，表明混合供试品溶液在
12 h内稳定性良好。
2. 7 回收率试验 精密称取干燥至恒重的鸡眼
草药材各 1. 0 g，共 6 份。每份分别精密加入质量
浓度为 50. 2 mg /L 的染料木素对照储备液1. 0 mL
和质量浓度为 16. 5 mg /L 的山柰酚对照储备液
1. 0 mL，混匀后干燥。按“2. 2. 2”项方法制备供试
溶液，在“2. 1”项色谱条件下分析，计算回收率。
结果见表 2。
表 2 2 种化合物回收率试验(n =6)
对照品
样品含
量(μg)
加入量
(μg)
实测量
(μg)
回收率
(%)
平均回收
率(%)
ＲSD
(%)
染料木素 39． 62 50． 2 89． 65 99． 7 99． 7 0． 1
39． 57 50． 2 89． 61 99． 7
39． 58 50． 2 89． 67 99． 8
39． 62 50． 2 89． 76 99． 9
39． 62 50． 2 89． 58 99． 5
39． 59 50． 2 89． 54 99． 5
山柰酚 15． 91 16． 5 32． 51 100． 6 100． 9 0． 7
15． 89 16． 5 32． 64 101． 5
15． 89 16． 5 32． 57 101． 1
15． 91 16． 5 32． 69 101． 7
15． 91 16． 5 32． 40 99． 9
15． 90 16． 5 32． 49 100． 5
2. 8 样品测定 精密称取干燥至恒重的鸡眼草
药材 3 份，每份 1. 0 g，按“2. 2. 2”项方法制备，按
“2. 1”项方法进样，按外标法以峰面积计算鸡眼草
药材中染料木素和山柰酚的含量。结果见表 3。
3 讨论
3. 1 检测波长的考察 取一定质量浓度的染料
·7741·实用药物与临床 2015 年第 18 卷第 12 期 Practical Pharmacy And Clinical Ｒemedies，2015，Vol． 18，No． 12
表 3 鸡眼草中染料木素和山柰酚的含量(n =3)
样品 染料木素(mg /g) 山柰酚(mg /g)
1 0． 036 7 0． 015 9
2 0． 036 9 0． 015 7
3 0． 037 0 0． 015 6
木素和山柰酚甲醇溶液，在 200 ～ 400 nm 波长范
围内进行紫外扫描，染料木素在 254 nm 处有最大
吸收，山柰酚在 370 nm 处有最大吸收。考虑到山
柰酚含量较低，且染料木素在 370 nm 处也有较强
的吸收，最终确定 370 nm 为检测波长。
3. 2 样品提取方法的考察 本实验考察了 70 ℃
甲醇回流提取 1 h 和甲醇超声提取 30 min 两种方
法对染料木素和山柰酚效率的影响。结果表明，
两种提取方法的提取效率相当，因超声提取法操
作简便、快速，故最终选择甲醇超声提取的方法。
比较 15、30、45、60 min 不同超声时间对样品提取
效率的影响。结果表明，超声 30 min 可将染料木
素和山柰酚甲醇提取完全，因此最终确定超声提
取时间为 30 min。
3. 3 流动相的考察 染料木素和山柰酚均具有
酚羟基，显弱酸性，在水中易发生电离，产生拖尾
现象。为了改善拖尾峰形和提高分离度，可降低
流动相的 pH值，以抑制酚羟基电离［7］。笔者比较
了流动相中加入不同浓度冰醋酸、甲酸和磷酸对
样品分离的影响。结果表明，加入体积分数 0. 1%
磷酸溶液作为酸化试剂时，可使峰形明显改善。
参考文献:
［1］ 尚娥，罗荣．鸡眼草治疗婴幼儿腹泻的疗效观察［J］．护理学
杂志，2003，18(3):203．
［2］ 孙洁，王晓菊，王燕，等．鸡眼草治疗婴幼儿轮状病毒肠炎临
床体会［J］．中国中医急症，2009，18(9):1520．
［3］ 张宝徽，李芳芳，周牡娜，等．鸡眼草属两种植物中总黄酮的
含量测定［J］．湖北中医药大学学报，2012，14(1):33-35．
［4］ Tao JY，Zhao L，Huang ZJ，et al． Anti-inflammatory effects of
ethanol extract from Kummerowia striata (Thunb．)Schindl
on LPS-Stimulated ＲAW 264． 7 Cell ［J］． Inflammation，
2008，31(3) :154-166．
［5］ 张宝徽，陶君彦，胡则林，等．鸡眼草乙醇提取物抗炎作用研
究［J］．时珍国医国药，2011，22(10):2550-2553．
［6］ 张宝徽，李芳芳，周牡娜，等．鸡眼草属两种植物中总黄酮的
含量测定［J］．湖北中医药大学学报，2012，14(1):33-35．
［7］ 邱枫，徐静华，肇丽梅，等． HPLC 法测定大鼠血浆中黄芩苷
的浓度［J］．实用药物与临床，2009，12(5):334-336．
收稿日期:2015 － 04 － 03
作者单位:中国医科大学药学院 a. 中心实验室，b. 药物化学教研室，沈阳 110122
* 通信作者
DOI:10． 14053 / j． cnki． ppcr． 201512022
HPLC法同时测定马来酸依那普利与尼群地平的含量
王 星a，王 琳b，张廷剑b，孟繁浩b*
［摘 要］ 目的 建立以高效液相色谱法测定复方尼群地平片中马来酸依那普利与尼群地平含量的方法。
方法 色谱柱为 Kromasil C18柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)，甲醇 －磷酸盐缓冲液(0. 01 mol /L 磷酸二氢钾溶液，
用磷酸调 pH值为 3. 0)(65∶ 35)为流动相，流速 0. 8 mL /min，检测波长为 215 nm，柱温 50 ℃，进样量为 20 μL。
结果 马来酸依那普利在 10. 16 ～ 193. 04 mg /L 浓度范围内线性关系良好(Ｒ2 = 0. 999 7)，平均加样回收率为
100. 28%;尼群地平在 20. 96 ～ 338. 24 mg /L 浓度范围内线性关系良好(Ｒ2 = 0. 999 8)，平均加样回收率为
99. 54%。结论 该方法可用于同时测定复方尼群地平片中马来酸依那普利、尼群地平的含量。
［关键词］ 高效液相色谱法;复方尼群地平片;马来酸依那普利;尼群地平;含量
Content determination of enalapril maleate and nitrendipine by HPLC WANG Xinga，
WANG Linb，ZHANG Ting-jianb，MENG Fan-haob* (a. Department of Central Laboratory，b. Department of Medicinal
Chemistry，School of Pharmacy，China Medical University，Shenyang 110122，China)
［Abstract］ Objective To establish an HPLC method for the content determination of enalapril maleate and ni-
trendipine in compound nitrendipine tablet. Methods Samples were determined on a Kromasil C18 column (4. 6 mm ×
250 mm，5 μm)，the mobile phase consisted of methanol-phosphate buffer (0. 01 mol /L potassium dihydrogen phos-
phate solution adjusted with phosphoric acid to a pH of 3. 0) (65∶ 35)with flow rate at 0. 8 mL /min，the UV detection
·8741· 实用药物与临床 2015 年第 18 卷第 12 期 Practical Pharmacy And Clinical Ｒemedies，2015，Vol． 18，No． 12