全 文 ：·论　　著·
龙爪槐叶中黄酮醇苷元成分的研究
王秀卿 ,刘景东 ,王志玲 ,勾凌燕 ,张亚超 ,姜　虹
作者单位:050081 石家庄 ,白求恩军医学院
　　[摘要 ] 　目的　建立高效液相色谱法 , 同时测定龙爪槐叶中主要黄酮醇苷元成分槲皮素 、山柰酚和异鼠李素的含量 , 考
察其含量在不同生长期的变化规律。方法　选取不同时间点采摘龙爪槐叶 , 甲醇连续提取 ,水解后用高效液相色谱法测定槲
皮素 、山柰酚和异鼠李素的含量。结果　龙爪槐叶中含有与银杏叶相似的黄酮醇苷元成分 , 含量高于银杏叶;其中槲皮素含
量最高 、山柰酚次之 、异鼠李素含量最低。三者含量都表现出随不同生长期变化的规律 , 以 4、5月份最高 , 以后逐渐降低。结
论　龙爪槐叶含有丰富的黄酮醇类化合物 ,不同生长期其含量有所变化 , 最佳槐叶采摘时间为 4、5月份。
[关键词 ] 　龙爪槐叶;黄酮醇苷元;高效液相测定
[中图分类号 ] 　R284.1　　　[文献标识码 ] 　A　　　[文章编号 ] 　1672-2876(2010)04-0243-03
StudyontheconstituentsofflavonoidaglyconesintheleavesofSophorajaponicaf.pendula.
WANGXiuqing, LIUJingdong, WANGZhiling, etal.BethuneMilitaryMedicalColege, Shijiazhuang　050081, China
【Abstract】　Objective　TodevelopamethodofRP-HPLCfordeterminationofthreekindsofflavnoidaglycones, quercitin,
kaempferol, andisorhamnetinsimultanenouslyandtodiscoverchangesofthemintheleavesofSophorajaponicaf.pendula.indiffer-
entgrowthperiods.Methods　TheleavesofSophorajaponicaf.pendula.werecollectedatdifferenttimepoint.Flavonoidsintheleav-
eswereextractedbysuccessiveextractionwithmethanol.Theextractswereacid-hydrolyzedbeforebeingtestedwithRP-HPLC.Results
　TheconstituentofflavnoidaglyconesintheleavesofSophorajaponicaf.pendula.wasquitesimilartothatinginkgoleaves, butthe
contentofthemintheformerwasmuchhigherthanthatinthelatter.Amongthreeflavonoidaglyconesdetermined, thecontentofquer-
citinwasthehighestandthatofisorhamnetinwasthelowest.Thecontentsoftheseflavonoidaglyconesreachedmaximuminthemonths
ofAprilandMayanddeclinedgraduallylater.Conclusion　TheleafofSophorajaponicaf.pendula.hasaboundantofflavonoidsinthe
leavesofSophorajaponicaf.pendula.Thecontentsofthemchangealongwiththegrowthperiods.AprilandMayshouldbetheoptimal
colectingtimeofleavesofSophorajaponicaf.pendula.forextractionofflavonoids.
【Keywords】　LeavesofSophorajaponicaf.pendula;Flavonoidaglycones;RP-HPLC
　　国槐(SophorajaponixaL.)属豆科植物 ,其花
蕾和果实都收录 《中华人民共和国药典》。目前 ,国
槐的种植范围呈现下降趋势 ,资源面临枯竭 。龙爪
槐(Sophorajaponicaf.pendula.)是槐的变种 ,与槐
的亲缘关系十分相近。种植范围逐年扩大 ,资源十
分丰富 。国槐和龙爪槐中都含有槲皮素 、山柰酚和
异鼠李素等黄酮醇苷类成分及染料木素苷类异黄酮
成分[ 1] 。研究发现 ,植物黄酮类化合物具有抗肿
瘤 、抗氧化及抗辐射等作用[ 2] ,因而在食品及药品
方面越来越引起人们的关注。国内曾有文献报道应
用紫外分光光度法及薄层扫描法测定槐叶和龙爪槐
叶中芦丁的含量 [ 3, 4] ;这些方法尚存在影响因素多 、
误差大和准确性低等问题。目前 ,关于槐叶和龙爪
槐叶中黄酮类化合物组分分析的报道少见 。本研究
采用高效液相色谱法同时测定龙爪槐叶中三种主要
的黄酮醇苷元成分的含量 ,考查其含量在不同生长
期的变化规律 ,为更有效地利用现有槐资源提供一
定的理论依据 。
1　仪器 、试药与材料
高效液相色谱仪(美国 Waters1525系统 ,高压
双泵 、2487双波长紫外检测器和 Breeze色谱数据系
统)。龙爪槐选自石家庄市裕西公园(选定 50棵龙
爪槐树 ,每次每树采摘 1枝 ,去除枝条后混匀 ,自来
水洗净 , 80℃烘干备用)。采摘时间为 2008年 4月
15日 ～ 9月 15日 ,每月采摘 1次 。
槲皮素 、山柰酚和异鼠李素对照品均购于中国
药品生物制品检定所 (批号分别为 100081 -
200406、110861-200606和 110860-200407);甲醇
和乙腈为色谱纯 ,其他试剂均为分析纯。高纯水由
Milipore纯水器制备 。
2　方法与结果
2.1　色谱条件与系统适用性试验　色谱柱:Diamon-
silC18柱(150 mm×4.6 mm, 5μm);流动相:0.07%
磷酸 -甲醇(50:50);流速:1.0 ml/min;检测波长:
·243·白求恩军医学院学报 2010年 8月第 8卷第 4期　JournalofBethuneMilitaryMedicalColege, Vol.8, No.4, August, 2010DOI :10.16485/j.issn.2095-7858.2010.04.007
260nm;进样量 10μl;灵敏度 0.001 AUFS;柱温:室
温(20℃)。理论板数不低于 2000。
2.2　溶液的配制
2.2.1　对照品溶液的制备　精密称取减压干燥恒
重的槲皮素 、山柰酚和异鼠李素对照品各 10 mg,置
于 50ml容量瓶中 ,加甲醇 40 ml,超声处理 5 min,
用甲醇稀释至刻度 ,作为标准贮备液。精密吸取上
述溶液适量 ,配制成槲皮素 、山柰酚和异鼠李素浓度
分别为 3、3和 2μg/ml的溶液 , 0.45 μm滤膜过滤 ,
作为对照品溶液 。
2.2.2　供测试品溶液的制备　精密称取干燥的龙
爪槐叶粉末 0.5 g,置索氏提取器中 ,加甲醇 90 ml,
连续提取 10h,提取液蒸干后 ,残渣加甲醇 -25%盐
酸(4:1)混合液 50ml,水浴回流 30min,冷却后甲醇
定容至 100 ml, 0.45 μm滤膜过滤 ,作为样品测定液。
2.3　槲皮素 、山柰酚和异鼠李素对照品的 HPLC色
谱图及标准曲线的绘制　取槲皮素 、山柰酚和异鼠
李素浓度分别为 3、3和 2μg/ml的对照品溶液 。进
样 10μl,记录色谱图。取槲皮素 、山柰酚标准贮备
液 ,配制槲皮素浓度分别为 0.125、 0.25、 0.50、
1.00、1.50、 2.00、3.00 μg/ml,山柰酚浓度分别为
0.075、0.125、0.25、0.50、1.00、1.50、2.00μg/ml的
对照品溶液 ,进样 10μl,每个浓度重复 3次 ,记录色
谱图。以峰面积对进样浓度进行线性回归 ,得槲皮
素的回归方程为:A=26 321.68C-366.2, r=
0.9998;山柰酚的回归方程:A=30 188.48C-470 ,
r=0.9999。
2.4　精密度试验 　取槲皮素和山柰酚浓度均为
0.5μg/ml的溶液 ,按照 2.1中所述条件 ,同一天内
不同时间重复测定 5次 ,或连续测定 5 d, 1次 /d,考
察日内和日间误差(RSD),其结果分别为 0.84%和
1.02%,显示该方法精密度良好。
2.5　加样回收率试验　准确量取已测得槲皮素和
山柰酚含量的龙爪槐叶供试品溶液 ,准确加入一定
量的槲皮素和山柰酚 ,按照 2.1中所述条件进行色
谱分析 ,测定峰面积 。根据峰面积与加入对照品的
量计算加样回收率 。结果显示 ,槲皮素的回收率为
93.2%, RSD为 1.11%(n=5),山柰酚的回收率为
94.6%, RSD为 0.98%(n=5)。
2.6　龙爪槐叶中槲皮素 、山柰酚的含量测定　精密
量取供试品溶液适量 ,用甲醇稀释 200倍 ,使其峰面
积在标准曲线的线性范围内 ,按照 2.1中所述条件
进行 HPLC分析 ,记录色谱图 ,见图 1。将槲皮素和
山柰酚的峰面积代入回归方程分别计算不同生长期
的龙爪槐叶中槲皮素和山柰酚的含量 ,结果见表 1。
因为异鼠李素含量较低 ,未进行含量分析。
1　槲皮素　 2　山柰酚　 3　异鼠李素
图 1　龙爪槐叶提取物水解后的 HPLC色谱图
表 1　不同生长期龙爪槐叶中槲皮素和山柰酚含量
的测定结果 (%)(n=3)
采集时间(月-日)
04-15 05-15 06-15 07-15 08-15 09-15 10-15
槲皮素 1.08 0.52 0.43 0.45 0.43 0.40 0.26
山柰酚 0.13 0.10 0.05 0.02 0.03 0.02 0.02
3　讨　论
国内以往的文献报道植物叶 、茎或果实中的黄
酮含量主要采用亚硝酸钠 -三氯化铝比色法测
定[ 5] 。该方法影响因素多 ,测定结果含量偏高 ,不
能真实地反映黄酮的含量。少数采用高效液相测定
法也主要是考察芦丁的量 [ 6] 。龙爪槐叶中游离的
槲皮素极低 ,绝大部分以芦丁的形式存在 ,此外还有
一些山奈酚苷和异鼠李素苷。因为没有山奈酚苷和
异鼠李素苷的标准品 ,无法直接测定黄酮苷的总含
量。本文采用酸水解后高效液相测定槲皮素 、山柰
酚和异鼠李素的含量 ,更能较准确地反映植物中黄
酮的实际含量 。
我们的研究结果显示 ,龙爪槐叶中黄酮醇苷元
的种类与银杏叶类似 。德 、法等国家规定银杏叶中
黄酮醇苷的含量不少于 0.8%(水解后 HPLC测定 ,
计算方法是将槲皮素 、山柰酚与异鼠李素的数据乘
以 2.5)[ 7] 。按照银杏叶中总的黄酮醇苷计算方法 ,
龙爪槐叶中黄酮醇苷总量远远高于银杏叶。不同生
长期的龙爪槐叶样品测定结果显示槲皮素和山柰酚
含量有随季节变化的规律 , 4 ～ 5月份含量最高 ,以
后均较低 。在石家庄地区 , 4月中旬槐树刚刚长出
嫩叶 ,大量的黄酮类化合物可能起到防止太阳紫外
线辐射对嫩叶的损伤作用。本文结果与文献报道的
绿叶植物总黄酮含量变化的规律一致 ,为选择龙爪
槐叶采集时间提供了科学的依据。
槲皮素 、山柰酚及其苷是植物界分布最广 、具有
·244· 白求恩军医学院学报 2010年 8月第 8卷第 4期　JournalofBethuneMilitaryMedicalColege, Vol.8, No.4, August, 2010
多种生物活性的黄酮类化合物 ,其生物学活性作用
越来越受到重视 。龙爪槐叶中含有丰富的黄酮类化
合物 ,其应用尚未得到应有的重视。
【参考文献】
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出版社.2008:2.
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师范学院学报 (自然科学版), 2009, 16(2):29-31.
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中芦丁的含量 [ J] .泰山医学院学报 , 2004, 25(4):280-281.
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芦丁含量 [ J] .基层中药杂志 , 2002, 16(1):26-27.
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医药 , 2007, 11(11):1030-1032.
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医药 , 2009, 5(9):173-175.
[ 7] 　谢培山.银杏叶标准提取物 EGb761®及银杏叶制剂的质量评
价 [ J] .中国中药杂志 , 1999, 24(2):116-118.
(2010-02-23收稿　 2010-06-11修回)
(本文编辑　庄甲举)
自酸蚀粘接剂加复合树脂粘接正畸托槽临床评价
付建宏 ,欧阳东
作者单位:100027 武警北京总队医院口腔科
　　[摘要 ] 　目的　评价自酸蚀粘接剂 +复合树脂粘接正畸托槽的临床使用效果。方法　随机选择 20名非拔牙患者 , 采用
自身对照的方法进行为期 18个月的临床观察 , 记录脱落托槽所在牙位及脱落后粘接剂在牙釉质表面的残留量 ,分别计算脱落
率及残留指数。结果　自酸蚀粘接剂与传统釉质酸蚀粘接剂粘接正畸托槽的脱落率相近(P>0.05), 分别为 11.5%和 10.
5%。使用两种方法托槽脱落后釉质表面粘接材料残留指数无显著差异(P>0.05)。结论　自酸蚀粘接剂使用简单 , 粘接强
度可靠 , 能够满足正畸临床需要。
[关键词 ] 　自酸蚀粘接剂;复合树脂;托槽;粘接
[中图分类号 ] 　R783.5　　　[文献标识码 ] 　A　　　[文章编号 ] 　1672-2876(2010)04-0245-03
Clinicalevaluationofself-etchingmethodpluscompositeresinforbracketbonding
FUJianhong, OUYANGDong.DepartmentofStomatology, ArmedPoliceHospitalofBeijing, Beijing　100027, China
【Abstract】　Objective　Toevaluatetheself-etchingmethodpluscompositeresinfororthodonticbracketbonding.Methods　
Twentysubjectswereselectedrandomlyforthis18-monthclinicalstudywiththesplit-mouthmethod.Thelocationofbondfailureand
amountofadhesiveremnantonthetoothsurfacewererecorded.Thebondfailurerateandadhesiveremnantindexwerevaluated.Re-
sults　Thebondfailurerateofself-etchingmethodwas11.5% andthatoftraditionalbondingmethodwas10.5%.Neitherthebond
failureratenortheadhesiveremnantindexhadsignificantdifference(P>0.05)whencomparedbetweenthetwomethods.Conclusion
　Thebondstrengthofself-etchingmethodforbracketcansatisfythequalificationoforthodontictreatment.
【Keywords】　Self-etchingprimer;Compositeresin;Bracket;Bonding
　　众多体外研究证实 ,使用自酸蚀粘接剂 +复合
树脂与传统釉质酸蚀粘接剂 +复合树脂粘接正畸托
槽的粘接强度相似 [ 1, 2] 。其中有些实验结果还表明
当使用前者粘接托槽时 ,即使牙面被唾液污染也不
会明显降低其粘接强度。国内也有学者对两种粘接
系统进行过临床对比实验 [ 3] ,但观察时间较短 ,缺
乏长期观察结论 。正畸治疗的特殊性在于持续时间
较长 ,一般都在 2年左右。因此 ,要验证一种新材料
是否可以满足正畸临床需要 ,就必须进行较长时间
的临床观察 。为了进一步明确自酸蚀粘接剂粘接正
畸托槽的临床效果 ,我们进行了为期 18个月的实
验 ,并得出托槽脱落率 、釉质表面粘接材料残留指
数 ,以期为临床应用提供数据支持 。
1　资料与方法
1.1　研究对象　随机选择在我科就诊的 20例非拔
牙患者 ,男 9例 ,女 11例 ,年龄 12 ～ 17岁。采用直
丝弓矫治技术进行正畸治疗 ,观察时间 18个月。
1.2　方法
1.2.1　粘接正畸托槽　所有患者粘接前用抛光剂
彻底清洁牙面 ,每位受试者随机选择一侧(10个牙
齿), 使用自酸 蚀粘接剂 (TransbondPlus, 3M
Unitek)涂擦 10 s,稍事轻吹 (保持牙面湿润状态),
将少量复合树脂(TransbondXT, 3MUnitek)均匀放
置在托槽背板上 ,托槽尽可能与牙面贴合 ,在完全固
·245·白求恩军医学院学报 2010年 8月第 8卷第 4期　JournalofBethuneMilitaryMedicalColege, Vol.8, No.4, August, 2010