全 文 ：紫外-可见分光光度法测定龙爪槐叶中总黄酮含量
张亚超，王 憬，王志玲，勾凌燕，刘会敏，刘景东
［摘 要］ 目的 建立龙爪槐叶中总黄酮质量控制的方法。方法 龙爪槐叶粉碎后，置索氏提取器中，甲醇连续提取，
低温放置 24 h以上，过滤去除叶绿素及杂质，滤液即为提取液。以芦丁为标准，亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠显色，采用紫外-可
见分光光度法测定总黄酮含量，测定波长为 500 nm。结果 芦丁的线性范围为 8 ～ 48 μg·ml －1，回归方程:A = 10． 7318 C －
0． 0514，r = 0． 9991，平均回收率为 94． 85%，RSD = 1． 84%。结论 龙爪槐叶甲醇提取后直接测定总黄酮含量，方法简便，结果
准确，可用于龙爪槐叶总黄酮的质量控制。
［关键词］ 龙爪槐叶;总黄酮;紫外-可见分光光度法
［中图分类号］ R284． 1 ［文献标志码］ A ［文章编号］ 1008-9926(2012)05-448-03
［DOI］ 10． 3969 / j． issn． 1008-9926． 2012． 05． 22
Determination of Levels of Total Flavonoids in Leaves of
Sophora japonica by a Spectrometric Method
ZHANG Ya-chao，WANG Jing，WANG Zhi-ling，GOU Ling-yan，LIU Hui-min，LIU Jing-dong
Bethune Military Medical College，Shijiazhuang 050081，China
［Abstract］ Objective To establish a method for quality control of the total flavonoids level in leaves of
Sophora japonica f． pendula Loud． Arb． Brit． Methods The extractions of total flavonoids in leaves of Sophora
japonica f． pendula Loud． Arb． Brit． were prepared by consecutive extraction with absolute methanol． Color was
formed by mixing the extractions of total flavonoids with NaNO2-Al (NO3)3-NaOH solution． With authentic rutin as
the standard，the color was determined using the wavelengths of 500 nm by a spectrometer． Results The linear range
of rutin was between 8 μg·ml －1 and 48 μg·ml －1 ． The regression equation was A = 10． 7318 C － 0． 0514 with a re-
gression coefficient of 0． 9991． The average recovery of the method was 94． 85% with an RSD of 1． 84% ． Conclu-
sion It is easy，highly accurate to determine the level of total flavonoids in leaves of Sophora japonica f． pendula
Loud． Arb． Brit． by a spectrometric method，with which the quality of total flavonoids in leaves of Sophora
japonica f． pendula Loud． Arb． Brit can be controlled easily．
［Key words］ leaves of Sophora japonica f． pendula Loud． Arb． Brit．;total flavonoids;UV-Vis Spec-
trometry
国槐(Sophora japonica L．)属豆科植物，其根
皮、叶、花、果实等都具有很好的药用价值，现代研究
已证明它们具有良好的抗病原微生物和抗癌等作
用，这与其不同部位所含有的黄酮类成分有关［1］，
其中槐叶所含黄酮类成分以芦丁的含量最高。近年
来，国槐的数量在城市规划中迅速减少，而龙爪槐的
数量在逐年增加。龙爪槐(Sophora japonica f． pen-
dula Loud． Arb． Brit)是国槐的自然变种，与国槐有
基金项目:全军“十一五”面上课题，No． 06MB335
作者简介:张亚超，高级实验师。研究方向:化学分析与仪器分析
作者单位:050081 河北石家庄，白求恩医务士官学校
通讯作者:王志玲:Tel(0311)87977093;E-mail:zhlwang@ yahoo．
com． cn
着紧密的亲缘关系，作为城市美化的树种，在街道两
旁、公园及社区等许多地方都有种植，但有关龙爪槐
化学成分的报道还很少［2-3］。本文以芦丁为对照品，
采用紫外-可见分光光度法对龙爪槐叶中总黄酮含
量进行测定［4］，为龙爪槐天然资源的开发利用提供
数据参考。
1 材料
1． 1 仪器 日本岛津 UV-265FW-紫外-可见分光光
度计，SartoriusSB电子分析天平(德国) ，索氏提取器
等。
1． 2 试药 芦丁对照品(中国药品生物制品检定
所，批号:100080-200707) ，甲醇、亚硝酸钠、硝酸铝、
氢氧化钠等试剂均为分析纯。龙爪槐叶样品〔选择
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石家 庄 市 区 采 集、分 别 为 长 安 公 园，批 号:
201106051)、西清公园(批号:201106052)、植物园
(批号:201106053)、西郊公园(批号:201106054)及
水上公园(批号:201106055)等 5 个采摘点，每个采
摘点选取 5 棵龙爪槐树，采集槐叶，混合后常水清
洗，60 ℃烘干，粉碎后过 100 目筛，细粉作为供试品
备用。
2 方法与结果
2． 1 溶液制备 (1)供试品溶液 精密称取龙爪
槐叶细粉 2． 0 g，置索氏提取器中，加入甲醇 100 ml，
水浴回流至提取液无色(约 10 h) ，放冷，移置100 ml
量瓶中，用少量甲醇洗涤容器，洗液并入量瓶中，甲
醇定容至刻度，将其置于 0 ～ 4 ℃低温保存24 h以
上，0． 22 μm 滤膜滤过后备用。(2)对照品溶液
精密称取芦丁对照品适量，加入甲醇定容，配制浓度
为 0． 2 mg·ml －1对照品溶液。
2． 2 检测波长的确定 精密量取对照品和供试品
溶液各 2． 0 ml，分别置于 25 ml 量瓶中，分别加入
5%的亚硝酸钠溶液 1． 0 ml，混匀，放置 5 min;加入
10%的硝酸铝溶液 1． 0 ml，摇匀，放置 5 min;再加入
4%氢氧化钠溶液 10． 0 ml，加水定容至 25． 0 ml，摇
匀并放置 15 min。以相应的试剂溶液做参比，300 ～
700 nm波长范围内扫描。两种溶液均在 500 nm 处
有最大吸收峰，且吸收曲线基本一致，因此将500 nm
确定为样品的测定波长。
2． 3 标准曲线的绘制 精密吸取芦丁标准液 1． 0、
2． 0、3． 0、4． 0、5． 0、6． 0 ml，置 25． 0 ml 量瓶中，分别
加水至 6． 0 ml，空白液为 6． 0 ml 蒸馏水，按 2． 2 项
下的方法，自“加入 5 %的亚硝酸钠溶液 1． 0 ml”
起，依法操作，以相应的试剂溶液做参比液，在 500
nm测定吸光度。以浓度(C)为横坐标，吸光度
(A)为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为:
A = 10． 7318 C － 0． 0514，r = 0． 9991
结果表明芦丁在 8 ～ 48 μg·ml －1的浓度范围内
与吸光度呈良好的线性关系。
2． 4 方法精密度考察 精密吸取对照品溶液
1． 0 ml，共 6 份，按照 2． 2 项下的方法测定，RSD 为
0． 98%，结果表明测定方法精密度良好。
2． 5 稳定性试验 精密吸取供试品溶液(批号:
20110601)1． 0 ml，按照 2． 2 项下的方法操作，每隔
10 min测定 1 次，结果显示，1 h 内测得吸光度值的
RSD为 1． 1 %，表明显色在 30 min内稳定。
2． 6 重复性试验 精密称取龙爪槐叶细粉(批号:
201106051)2． 0 g，共 6 份，按照 2． 1 项下的方法制
备供试品溶液。精密吸取供试品溶液 1． 0 ml，按照
2． 2 项下的方法，测定，计算总黄酮含量平均为
4． 27%，RSD为 1． 79 %，结果表明测定方法重复性
良好。
2． 7 加样回收率试验 精密称取已知含量的龙爪
槐叶细粉(批号:201106051，含量 4． 20%)6 份，分
别定量加入高于、等于、低于供试品含量的卢丁对
照品，按照 2 ． 1 项下的方法制备供试品溶液。再
按照 2 ． 2 项下方法操作，分别计算加样回收率，结
果见表 1。
表 1 加样回收率试验结果
称样量 /
g
相当对照品 /
mg
加入量 /
mg
测得量 /
mg
回收率 /
%
珋x /
%
RSD /
%
1． 9968 83． 87 63． 24 142． 22 92． 27
2． 0020 84． 08 63． 18 143． 10 93． 41
1． 9812 83． 21 84． 10 164． 19 96． 29 94． 85 1． 84
2． 0018 84． 08 83． 94 162． 14 92． 99
2． 0044 84． 18 105． 13 187． 66 98． 43
2． 0141 84． 59 104． 98 185． 05 95． 69
2． 8 样品总黄酮含量测定 取石家庄 3 个采集点
样品，按照 2． 1 项下方法制备供试品溶液，照 2． 2 项
下方法测定，根据芦丁标准曲线方程计算每份龙爪
槐叶中总黄酮的含量，结果见表 2。
表 2 石家庄地区采集样品测定结果(n = 3)
批号 采集地点 总黄酮含量 /% RSD /%
201106051 长安公园 4． 20 0． 80
201106052 西清公园 4． 35 1． 43
201106053 植物园 4． 19 1． 67
3 讨论
历版中国药典总黄酮的含量多以芦丁为标准，
应用亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠显色体系进行比色
测定，该法的测定原理基于黄酮成分 B 环具有邻二
羟基结构［5］，可与该显色体系显色，能够较准确地
反映植物中总黄酮的含量。芦丁是存在于国槐中的
主要黄酮成分，钱彦丛等［6］的研究结果显示龙爪槐
叶与国槐叶中黄酮化合物种类基本相同，主要为芦
丁和槲皮素。故本文以芦丁作对照品，应用亚硝酸
钠-硝酸铝-氢氧化钠显色体系对龙爪槐叶中总黄酮
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进行了考察。
此外，药典中规定槐米总黄酮的提取步骤是
先以乙醚萃取去除叶绿素等干扰成分，然后以甲
醇提取总黄酮。本文在实验中发现龙爪槐叶总黄
酮的提取可以直接采用甲醇提取，经 0 ～ 4 ℃低温
放置 24 h以上，样品中叶绿素呈片状结晶形式沉
于容器底部，以 0． 22 μm 滤膜过滤去除。另外，淀
粉和其它糖类化合物等因在甲醇中溶解度低，溶
出的量很少，也可有效降低杂质的干扰。此法所
得的甲醇提取液可直接用于分光光度法测定总黄
酮含量，使样品液的处理更简便快捷。因此，本试
验采用的紫外-可见分光光度法可用于龙爪槐叶中
总黄酮的质量控制。
［参考文献］
［1］ 王 憬，刘景东，勾凌燕，等．国槐槐叶中芦丁含量与生长时间
关系的研究［J］．现代中药研究与实践，2010，24(3) :65-66
［2］ 赵艳波，施晓光． 高效液相色谱法测定荷叶中总黄酮的含量
［J］．中国医院药学杂志，2010，30(20) :2795-2796
［3］ 周红英，李同德，苏雪惠，等．紫外分光光度法测定三种槐叶中
芦丁的含量［J］．泰山医学院学报，2004，25(4) :280-281
［4］ 钱彦丛，刘景东．薄层扫描法测定龙爪槐叶中的芦丁含量［J］．
基层中药杂志，2002，16(1) :26-27
［5］ 郭亚健．对《中国药典》2005 年版槐花总黄酮含量测定的修订
建议［J］． 中国药品标准，2008，9(5) :327-328
［6］ 钱彦丛，刘景东，郝 勇，等．槐叶和龙爪槐叶中芦丁的薄层鉴
别［J］．黑龙江医药，2002，15(8) :435-436
(收稿日期:2012-06-26;修回日期:2012-07-24)
(本文编辑 狄亚敏)
( 上接 427 页)
表 2 肝得宁水蜜丸稳定性试验结果
检查项目 批号
加速稳定性
0 个月 1 个月 2 个月 3 个月 6 个月
长期稳定性
0 个月 3 个月 6 个月 9 个月 12 个月 18 个月 24 个月
水分 /%(W/W)080220 7． 56 7． 49 7． 37 7． 36 7． 37 7． 56 7． 56 7． 49 7． 45 7． 38 7． 36 7． 39
080223 8． 33 8． 27 8． 25 8． 19 8． 17 8． 33 8． 27 8． 28 8． 24 8． 26 8． 23 8． 24
080226 7． 91 7． 89 7． 81 7． 85 7． 77 7． 91 7． 93 7． 87 7． 83 7． 84 7． 81 7． 77
溶散时限 /min 080220 42 42 42 42 43 42 45 46 48 50 52 52
080223 38 38 39 40 42 38 40 42 44 46 49 50
080226 51 51 52 52 52 51 50 52 51 52 51 52
含量测定 /mg·g － 1 080220 0． 9992 1． 0003 0． 9982 0． 9980 0． 9976 0． 9992 0． 9997 0． 9991 0． 9991 0． 9987 0． 9981 0． 9980
080223 0． 9857 0． 9814 0． 9865 0． 9850 0． 9844 0． 9857 0． 9856 0． 9857 0． 9849 0． 9857 0． 9843 0． 9844
080226 1． 0061 1． 0068 1． 0064 1． 0051 1． 0046 1． 0061 1． 0065 1． 0066 1． 0060 1． 0053 1． 0048 1． 0043
4 讨论
本品在模拟市售包装条件下，室温贮存 24 个
月，其性状、鉴别、检查及含量测定均达到其质量标
准要求，表明本品室温放置 24 个月，其质量稳定，
故使用期限定为 24 个月。
在制剂工艺生产中由于有植物原粉入药，且水
蜜丸生产工艺复杂，故成品灭菌方法的选择至关重
要。从微生物限度检查结果可以看出，本品采用钴-
60γ射线辐照灭菌法，辐照剂量为 5 kGy，方法有效。
从本品的溶散时限结果不难看出，多数检测结
果在 45 ～ 55 min 之间，虽然符合规定，但其结果非
常接近 1 h的溶散时限限度，为了保证药物的正常
吸收，建议在制备工艺生产中考虑适当添加崩解剂。
［参考文献］
［1］ 国家药典委员会． 中华人民共和国药典(一部) ［S］． 北京:中
国医药科技出版社，2010:附录 52-53;附录 6;附录 79-88;附录
36-38
(收稿日期:2011-06-30;修回日期:2011-09-22)
(本文编辑 狄亚敏)
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