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广州相思子种子检验规程研究



全 文 :收稿日期:2012 - 01 - 29
基金项目:广西科技攻关计划项目(编号:桂科攻 0992003 B-38)、广西
科学研究与技术开发计划项目(编号:桂科转 0998001-21)。
作者简介:董青松(1971 -) ,女,副主任技师;主要从事药用植物种子标
准研究。
通讯作者:马小军,E-mail:xjma@ public. bta. net. cn。
广州相思子种子检验规程研究
董青松1, 何俊兵2, 蒙爱东1, 颜钟亚2, 白隆华1, 马小军3
(1.广西药用植物园, 南宁 530023; 2.广西玉林制药集团有限责任公司, 广西 玉林 537001;
3.中国医学科学院中国协和医科大学药用植物研究所, 北京 100094)
Study on Rules for Abrus Cantoniensis Seed Testing
DONG Qing-song1,HE Jun-bing2,MENG Ai-dong1,YAN Zhong-ya2,BAI Long-hua1,MA Xiao-jun3
摘要:为规范中药材种子市场,保证广州相思子种子的质量,参
照《国际种子检验规程》(ISTA 1996)和 GB /T 3543 - 1995《农作
物种子检验规程》及当前种子检验的研究成果,通过对广州相
思子种子扦样、净度分析、发芽试验、真实性鉴定、水分测定、四
唑测定、重量测定等检验方法的研究,确定其室内检验的标准
检验方法,并制定广州相思子种子检验规程。
关键词: 广州相思子;种子检验规程;发芽试验;
水分测定;四唑测定
中图分类号: S 567 文献标志码: C
文章编号: 1001 - 4705(2012)05-0123-03
广州相思子(Abrus cantoniensis Hance)为广西主
产、大宗栽培药材鸡骨草的基原植物之一,为豆科相思
子属植物。药用全株,有清热解毒,舒肝止痛的功效。
主治黄疸,胁肋不舒,胃脘胀痛,急、慢性肝炎,乳腺
炎[1]。药材生产上用种子进行繁殖,由于缺乏种子检
验规程和有效的管理,种子交易中劣种子坑农的事件
时有发生,给药农带来很大损失。为对广州相思子种
子的质量进行评价,参照《国际种子检验规程》(ISTA
1996)[2]和 GB /T 3543 - 1995 农作物种子检验规程及
当前种子检验的研究成果,对其种子扦样和表示种子
质量的种子净度、发芽率、真实性、含水量、生活力、千
粒重等指标的检验和鉴定方法进行研究,确定广州相
思子的种子检验规程。
1 材料与方法
1. 1 材 料
1. 1. 1 供试种子
来源于广西贵港市鸡骨草生产基地的市售种子,
经董青松鉴定为广州相思子种子。
1. 1. 2 仪器及试剂
各试验所需仪器及试剂见表 1。
表 1 各试验所需仪器设备及试剂
序号 试验名称 仪器设备及试剂
1 扦样 长柄短筒圆锥形扦样器、横隔式分样器。
2 净度分析
净度分析台、电子天平(称量 100. 000 0 g、感量
为 0. 1 mg;称量 2 000 g、感量 0. 01 g) ,种子套
筛,放大镜。
3 发芽试验
JMNJ-3 精白机、LRH-400-G 光照培养箱、硬塑
发芽盒、发芽纸(市售,种子发芽专用,pH
6. 0 ~ 7. 5) ;砂子(pH 6. 0 ~ 7. 5,直径 0. 05 ~
0. 8 mm,洗净后 160 ℃高温消毒 2 h,使用时用
无菌水拌成湿砂)。浓硫酸(市售,含量在
95% ~98%) ;高锰酸钾;农用链霉素;强氯精。
4 真实性鉴定 放大镜。
5 水分测定
植物粉碎机、电热干燥箱(误差为 ± 1 ℃)、铝
盒(直径 5. 5 cm,130 ℃ 1 h预先烘至恒重)、干
燥器、电子天平(感量为 0. 01 g、0. 001 g)、筛子
(孔眼直径为 4. 0 mm)、密封罐。
6 四唑测定
恒温烘箱。
红四氮唑(C19H15N4Cl = 334. 81 2,3,5-三苯基
氯化四唑) ,磷酸二氢钾(KH2PO4) ,十二水磷
酸氢二钠(Na2HPO4·12 H2O) ,蒸馏水。
7 重量测定 电子天平(称量 100. 000 0 g、感量为 0. 1 mg)。
1. 2 方 法
1. 2. 1 扦 样
根据广州相思子种子的市场流通情况和单次可能
的交易量,为获得一个大小适宜的供检样品,正确划分
种子批,确定其种子批的最大重量和样品最小重量。
同时确定初次样品、混合样品、送验样品、试验样品的
获取方法[3]。
1. 2. 2 净度分析
按 GB /T 3543. 2 - 1995 农作物种子检验规程 净
度分析[4]执行。
1. 2. 3 发芽试验
设计了不同的种子预处理(破除硬实、抑菌处
理)、发芽温度、发芽床、光照条件各项试验,观察其幼
苗发芽规律,总结其幼苗鉴定及试验持续时间[5]。
1. 2. 4 种子真实性鉴定
用数种设备或手工随机数取 400 粒,分为 4 个重
复,每个重复 100 粒,采用种子外观形态法,通过对种
·321·
种子检验 董青松 等:广州相思子种子检验规程研究
子形态、大小、颜色等特征的鉴定检验种子真实性,结
果以真实种子的平均值表示,保留一位小数。
1. 2. 5 水分测定
设计了样品整粒和粗磨、高恒温烘箱法和低恒温
烘箱法的对比试验[6]。
1. 2. 6 生活力的生化测定-四唑测定(TTC)
设计了预湿方法和时间、染色前的准备、不同染色
液浓度、染色温度及染色时间、染色结果与发芽试验的
结果对比、染色图谱的鉴定各项试验[7]。
1. 2. 7 重量测定
参照文献[8]的百粒法、千粒法、全量法,各进行 4
次重复,对各方法取得的种子实测千粒重进行比较分
析,确定最适宜方法。
2 结果分析
2. 1 扦 样
2. 1. 1 划分种子批
扦样前通过了解所扦种子的品种、产地、数量、贮
藏方法、贮藏条件、贮藏时间和贮藏期间发生的情况、
处理方法等,为分批扦样时参考。按同一来源、同一品
种、同一年度、同一时期收获和质量基本一致、在规定
数量之内划分种子批。
2. 1. 2 初次样品的扦取
按 GB /T 3543. 2 - 1995 农作物种子检验规程扦样
执行。
2. 1. 3 混合样品的配制、送验样品及试验样品的分取
本品种种子批最大重量和样品最小重量见表 2。
其他按 GB /T 3543. 2 - 1995 农作物种子检验规程扦样
执行。
表 2 广州相思子种子批最大重量和样品最小重量
种子批
最大重量
(kg)
样品最小重量(g)
送验样品
净度分
析试样
其他植物种
子计数试样
水分测
定试样
1 000 500 50 500 100
2. 1. 4 样品保存
(1)检验前:尽量做到收到样品就开始检验,如果
耽搁了,须将样品保存在凉爽和通风良好的室内,使种
子质量的变化降到最低限度。
(2)检验后:为便于复验,将样品放在适宜条件下
(4 ~ 8 ℃)保存 1 年,使质量的变化降到最低限度。
2. 2 净度分析
按 GB /T 3543. 3 - 1995 农作物种子检验规程净度
分析执行。
广州相思子种子净度分析的主要难点为划分净种
子、重型杂质、杂质、其他植物种子,根据实际,种子各
成分划分时要遵循的是:大于原来大小一半,附着种皮
的种子列为净种子;重量大于种子 10 倍以上的杂质列
为重型杂质;破裂或受损种子单位的碎片为原来大小
的一半或不及一半的列为杂质,种皮完全脱落的种子
单位列为杂质;其他植物种子按净种子的原则选出。
2. 3 发芽试验
综合种子预处理、发芽温度、发芽床、光照条件、幼
苗鉴定、试验持续时间等各项发芽试验研究结果[4],
广州相思子种子的发芽技术规定为:从经充分混合的
净种子中,用数种设备或手工随机数取 400 粒,分为 4
个重复,每个重复 100 粒,技术规定见表 3,结果计算
和表示按 GB /T 3543. 4 - 1995 农作物种子检验规程
发芽试验[9]的规定执行。
表 3 广州相思子发芽试验技术规定
发芽床
温度
(℃)
初次计
数时间
(d)
末次计
数时间
(d)
附加说明,包括破除休眠的建议
纸上(TP) 25,30 5 10
破除硬实:95% ~98%浓硫酸腐蚀 8 ~
9 min;或 JMNJ-3 型精白机磨 2 min /400
粒。种子消毒:强氯精 500 倍液浸泡 2
h;或 0. 5% KMnO4水溶液浸泡 1 h。
2. 4 种子真实性鉴定
广州相思子种子真实性的鉴别依据:种子卵状椭
圆形或矩圆形,扁平,棕色、黑褐色或棕褐色,表面光
亮,偶有棕黑相间的花斑,长 2. 8 ~ 5. 2 mm,宽 2. 0 ~
3. 6 mm,厚 1. 3 ~ 2. 3 mm。种脐凹陷,线形,种阜呈冠
状,长圆形,蜡黄色或浅褐色。子叶肥大,黄绿色或白
色;胚根白色,短小。
2. 5 水分测定
综合样品整粒和粗磨、高恒温和低恒温烘箱法各
试验结果[5],广州相思子种子水分测定的技术规定见
表 4。结果计算和表示按中华人民共和国国家标准
GB /T 3543. 6 - 1995 农作物种子检验规程 水分测
定[10]执行。
表 4 广州相思子种子水分测定技术规定
样品准备 铝盒大小 样品大小(g) 温度(℃) 干燥时间(h)
粗磨 直径 5. 5 cm 4 ~ 5 130 ~ 133 2
2. 6 生活力的生化测定-四唑测定(TTC)
综合预湿方法和时间、染色前的准备、不同染色液
浓度、染色温度及染色时间、染色结果与发芽试验的结
果对比、染色图谱的鉴定等试验结果[6],广州相思子
种子四唑测定的技术规定为表 5。
2. 7 重量测定
广州相思子种子各重量测定方法间的比较分析见
表 6。
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第 31 卷 第 5 期 2012 年 5 月 种 子 (Seed) Vol. 31 No. 5 May. 2012
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(上接第 118 页)
(4)扦插密度:行距以第 2 行短穗最长叶尖靠抵
第 1 行插穗 8 ~ 10 cm为准,株距约为 4 cm。
3 苗圃管理
3. 1 搭棚遮阴
苗圃建立扦插完成后,搭棚遮阴,可采用遮阳网搭
建,高 1. 8 m,根据苗圃的土壤湿润情况适时浇水。
3. 2 勤除杂草
做到苗圃见草就除,采用人工拔除,或是在茶行间
种植绿肥,一般在初夏和晚秋季节结合松土进行。
3. 3 整地施肥
次年 3 ~ 8 月各施 1 次肥,施复合肥 5 ~ 7. 5 kg /
667 m2。贵州以山地为主,在土层深厚,坡度在 25 ~
30°的山坡中下部缓坡地带做茶园。茶园地应先带状
深翻垦地,做成 1 ~ 1. 5 m的垄,鱼鳞坑整地,品字形排
列。坑深 30 ~ 40 cm,宽 40 cm,在坑中施足厩肥、堆
肥、农家肥,然后覆土 10 cm左右。
3. 4 病虫害防治
定期观察,定期作病害预防。摘除病虫害芽叶是
茶树病虫害防治的重要手段之一。其中物理、机械防
治可分为诱杀和人工捕杀两种方法。诱杀是利用昆虫
的各种趋性或害虫种群自身的化学信息联系以及对色
泽的趋性进行引诱并杀死害虫。人工捕杀是用人工捕
杀的方法直接消灭。微生物防治是辅助喷施真菌制
剂、细菌制剂、病毒制剂等微生物农药进行害虫防治。
表 5 广州相思子种子四唑测定技术规定
预湿
方式
预湿
时间
(h)
染色
前的
准备
溶液
浓度
(%)
30 ℃染色
时间
(h)
鉴定前
的处理
有生活力种子
允许不染色、较弱或
坏死的最大面积
备注
纸间或
水中
30 ℃恒温
水浸种
5 ~ 6 h,或纸间
12 h
剥去
种皮
1 5 ~ 6 观察表面 种子硬实,破除硬实
处理同发芽试验。
表 6 各重量测定方法间差异性分析
测定
方法
实测千粒重(g)
1 2 3 4
P0. 05 P0. 01
百粒法 15. 96 16. 03 15. 97 15. 97 15. 98 a A
千粒法 15. 73 16. 22 16. 34 15. 98 16. 07 a A
全量法 15. 60 15. 99 15. 60 15. 99 15. 80 a A
广州相思子种子用百粒法、千粒法、全量法所得的结
果在 5%和 1%的显著水平上没有差异,说明对于广州相
思子种子的重量测定,百粒法、千粒法和全量法均适用。
在实际操作中,百粒法为国际上通用,千粒法为我
国常用方法,全量法也是国际上规定的方法[11]。为与
国际接轨,从标准化的角度出发,应选择百粒法作为广
州相思子种子的重量测定方法。
3 结 论
综合以上研究结果,得到广州相思子种子检验规
程,包括扦样、净度分析、发芽试验、真实性鉴定、水分
测定、四唑测定(TTC)、重量测定。
研究小组使用此规程在近年间对 35 批广州相思
子的种子质量进行了检验,方法稳定,结果可信,证明
此规程适用于广州相思子种子的生产、经营、管理和使
用各方在种子生产、调运、播种、贮藏以及国内外贸易
时所进行的种子质量检验。
参考文献:
[1]中华人民共和国药典委员会编著. 中华人民共和国药典
(一部) [M].北京:化学工业出版社,2005.
[2]国际种子检验协会(ISTA). 1996 国际种子检验规程[M].
北京:中国农业出版社,1999.
[3]中华人民共和国国家标准 GB /T 3543. 2 - 1995 农作物种子
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[4]中华人民共和国国家标准 GB /T 3543. 3 - 1995 农作物种子
检验规程 净度分析[S] .
[5]董青松,颜钟亚,白隆华,等.鸡骨草种子发芽试验条件的研
究[J].种子,2006(2) :81 - 84.
[6]董青松,孙卫邦,韩春燕,等.广州相思子种子水分测定研究
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[8]中华人民共和国国家标准 GB /T 3543. 7 - 1995 农作物种子
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[9]中华人民共和国国家标准 GB /T 3543. 4 - 1995 农作物种子
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[10]中华人民共和国国家标准 GB /T 3543. 6 - 1995 农作物种
子检验规程 水分测定[S].
[11]支巨振. 1995 农作物种子检验规程实施指南[M]. 北京:
中国标准出版社,2004.
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种子检验 董青松 等:广州相思子种子检验规程研究