全 文 ：华西药学杂志W CJ· PS　2008, 23(5)：600 ～ 601 　　
作者简介:冷静(1979-),女 ,四川中江 ,硕士 ,工程师,正攻读中药学专业的博士学位。
＊通讯作者(Correspondentauthor)
HPLC测定金果榄中的青牛胆苦素
冷　静 1 ,付晓泰 2 ,傅超美1＊ ,任运强 2
(1.成都中医药大学 ,四川 成都 610075;2.重庆医药工业研究院有限责任公司 , 重庆 400061)
摘要:目的　采用HPLC测定金果榄中青牛胆苦素的含量。方法　色谱柱为Extend-C18(200mm×4.6mm, 5μm);流动相为
甲醇 -0.2%聚乙二醇水溶液(1：1);检测波长 203 nm;流速 0.8ml·min-1;外标法峰面积定量。结果　线性范围为 0.332 ～
3.320μg(r=0.9998), 平均回收率为 97.6%, RSD=2.2%。结论　所建方法简便 、快速 、准确。
关键词:金果榄;青牛胆苦素;高效液相色谱
中图分类号:R917　 文献标识码:A　 　文章编号:1006-0103(2008)05-0600-02
DeterminationofcolunmbininTinosporacapilipesGagnep.byHPLC
LENGJing1 , FUXian-tai1 , FUChao-mei1＊ , RENYun-qiang1
(1.ChengduUniversityofTranditionalChineseMedicine, Chengdu610075, China;2.ChongqingPharmaceuticalResearchInstituteCo.
Ltd., Chongqing400061, China)
Abstact:OBJECTIVE　ToestablishanHPLCmethodfordeterminationofcolunmbininTinosporacapillipesGagnep.METHODS　
Extend-C
18
columnwasused.Themobilephaseconsistedofmethanol-waterwith0.2% polyethyleneglycol(1：1).Detectionwave-
lengthwassetat203nm.RESULTS　Thelinearrangeforcolunmbinwas0.332-3.320μg(r=0.9998).Theaveragerecoverywas
97.6% withRSDof2.2%.CONCLUSION　Themethodissimple, rapidandaccurate.
Keywords:TinosporacapilipesGagnep.;Colunmbin;HPLC
CLCnumber:R917　　　 Documentcode:A　 　ArticleID:1006-0103(2008)05-0600-02
　　金果榄为防己科植物青牛胆 Tinosporasagitata
(Oliv.)Gagnep.或金果榄 TinosporacapilipesGag-
nep.的干燥块根 ,又名青牛胆 、地苦胆等。味苦寒 ,
归肺 、大肠经。为 《中国药典 》历版所收载 ,在民间
有广泛的应用基础。用于治疗咽喉肿痛 、痈疽疔毒 、
泄泻 、痢疾 、脘腹热痛等症 [ 1] ,其抗菌消炎的药理作
用明确 ,有较好的开发前景 。金果榄中的主要化学
成分有防己碱(palmatine)、药根碱(jatrorhizine)、非
洲防己碱(columbamine)、异非洲防己碱(isocolum-
bamine)、青牛胆苦素 (columbin)、异非洲防己苦素
(isocolumbin)和金果榄苷 (tinuside)等。 《中国药
典 》2005年版中 ,以盐酸巴马汀 、盐酸药根碱为对照
品进行金果榄的薄层鉴别 ,采用薄层扫描法测定盐
酸巴马汀的含量 [ 1] ;也有报道采用 RP-HPLC法测
定两者的含量 ,来控制金果榄药材的质量 [ 2] 。由于
多种中药如黄连 、黄柏等均含有盐酸巴马汀 ,金果榄
以盐酸巴马汀为指标进行质量控制 ,特征性差且含
量低。青牛胆苦素(苦味素内酯类)为金果榄中含
量较高的有效成分[ 3] ,特征性较好 ,文献[ 4]采用比
色法测定金果榄总内酯。现采用 HPLC测定金果榄
中的青牛胆苦素 ,方法准确可靠。
1　实验部分
1.1　仪器与试药
1100型高效液相色谱仪 ,包括 Agilent1100二
极管阵列检测器 , Windows-nt数据处理器 (美国
Agilent公司)。青牛胆苦素对照品(自制 ,按文中色
谱条件采用峰面积归一法测定含量 ,纯度 >98%);
金果榄药材(市售)经重庆医药工业研究院有限责
任公司分析检测中心鉴定为金果榄 Tinosporacapili-
pesGagnep.,粉碎过 60目筛备用;甲醇为色谱纯;水
为重蒸水;其他试剂为分析纯 。
1.2　方法与结果
1.2.1　色谱条件　色谱柱为 Extend-C18(200 mm×
4.6mm, 5μm);流动相为甲醇 -0.2%聚乙二醇水溶
液(1：1);流速 0.8ml·min-1;柱温为室温;进样量 10
μl。在此色谱条件下 ,青牛胆苦素色谱峰与相邻色谱
峰可达基线分离 ,分离度为 2.33。以青牛胆苦素峰
计 ,色谱柱理论板数为 3.587×103(图 1)。
DOI :10.13375/j.cnki.wcjps.2008.05.026
图 1　青牛胆苦素对照品(A)和金果榄(B)溶液的HPLC图
Fig1　HPLCchromatogramsofcolunmbinsolution(A)andTino-
sporacapilipesGagnep.solution(B)
1.2.2　溶液的制备　精密称取约 0.4 g金果榄药
材粉末 ,置索氏提取器中 ,加入 50 ml乙醚 ,置水浴
中回流 2h,过滤 ,滤液于蒸发皿水浴上蒸干 ,残渣用
甲醇溶解后转移至 10 ml量瓶中 ,并用甲醇定容 ,摇
匀 ,用 0.45 μm微孔滤膜过滤 ,作为供试品溶液 。
精密称取约 3 mg青牛胆苦素对照品 ,置 10ml量瓶
中 ,用甲醇制成 0.332mg·ml-1的对照品溶液。
1.2.3　线性关系的考察　精密量取 0.1、0.2、0.4、
0.6、0.8、1.0 m1对照品溶液 ,分别置 1 ml量瓶中 ,
甲醇稀释定容。吸取 10 μl稀释液 ,分别进样 ,记录
峰面积 ,以进样量为横坐标 、峰面积为纵坐标进行线
性回归 ,得回归方程为:A=2.292 ×104M+12.48
(r=0.9998), 表明青牛胆苦素进样量 0.332 -
3.320 μg与峰面积的线性关系良好。
1.2.4　精密度试验　精密吸取 10 μl青牛胆苦素
对照品溶液 ,连续进样 5次 ,青牛胆苦素峰面积的
RSD=0.54%。
1.2.5　重复性试验　取同一批金果榄药材样品 ,制
备 5份供试品溶液 ,分别进样 ,按 “ 1.2.8”项下方法
测定青牛胆苦素的含量 ,平均含量为 1.26%, RSD=
1.24%。
1.2.6　稳定性试验　取同一供试品溶液 ,分别于
0、2、4、6、8、12、24 h进样 10 μl,记录青牛胆苦素的
峰面积 ,其峰面积的 RSD=0.8%。表明供试品溶液
在 24h内稳定 。
1.2.7　回收试验　精密称取已测定含量的金果榄
药材粉末(含青牛胆苦素 1.26%)6份 ,每份 0.2 g,
分别精密加入 1 ml0.332mg·ml-1青牛胆苦素对照
品溶液 ,按 “ 1.2.8”项方法测定青牛胆苦素的含量 。
其平均回收率为 97.6%, RSD=2.2%。
1.2.8　样品的测定 　取金果榄药材粉末 , 按
“1.2.2”项下方法制备成供试品溶液 ,在 “1.2.1”项
色谱条件下 ,分别取供试品溶液和对照品溶液各 10
μl,分别进样 ,以峰面积按外标法计算含量 ,测得 10
批样品含量测定分别为 1.26%、 1.13%、 1.28%、
1.38%、1.44%、 1.35%、 1.48%、 1.42%、 1.24%、
1.33%,平均含量为 1.33%, RSD=1.12%。
2　讨论
青牛胆苦素几乎不溶于水 ,溶于三氯甲烷和二
氯甲烷等有机溶剂 。实验对金果榄供试液的制备曾
试用了甲醇 、乙醇 、三氯甲烷 、乙醚和石油醚等几种
溶剂 ,同时也考察了回流 、超声 、冷浸等几种提取方
法。结果表明 ,乙醚索氏回流提取效果最好。实验
中采用二极管阵列检测器对青牛胆苦素峰与供试品
色谱图中相应的色谱峰进行光谱分析 ,发现二者紫
外光谱吸收图谱一致 ,均为纯净峰 。青牛胆苦素只
有末端吸收 ,考虑灵敏度的因素 ,确定检测波长为
203 nm。因条件所限 ,未能采用蒸发光散射检测器
对青牛胆苦素进行测定 。
采用 HPLC法测定金果榄药材中青牛胆苦素的
含量 ,方法稳定 、快速 、准确 ,可作为其质量控制的有
效方法。另外采用测定方法文中含有青牛胆苦素的
金果榄 、黄柏 、栀子等药材 ,分离度良好 。
参考文献:
[ 1] 　 中华人民共和国国家药典委员会.中国药典 [ S] .一部.北京:
化学工业出版社 , 2005:50-151.
[ 2] 　 杨宏 ,王天志 ,杜蕾蕾 ,等.RP-HPLC测定金果榄药材中巴
马汀和药根碱的含量 [ J].华西药学杂志.2004, 19(3):195-
196.
[ 3] 　 宋纯清 ,徐任生 ,徐亚明 ,等.金果榄化学成分的研究Ⅰ .新呋
喃三萜苷———金果榄苷的结构 [ J] .化学学报 , 1988, 46:
1049-1052.
[ 4] 　 袁崇均 ,王笳 ,杨红.大孔树脂一比色法测定金果榄中总内酯
的含量 [ J] .卫生职业教育 , 2002, 20(4):94-95.
收稿日期:2007-09
601第 5期 冷　静 ,等。 HPLC测定金果榄中的青牛胆苦素