全 文 ：＊通讯作者，Ｅ－ｍａｉｌ：ｗａｎｇｘｉａｏｌｉｚｈｅｎｙｕａｎ＠１２６．ｃｏｍ
收稿日期：２０１１－０８－２９；修回日期：２０１２－０４－２３
基金项目：贵州省农业攻关项目“贵州优良豆科牧草根际高效复
合接种剂的研制与开发”（黔科合ＮＹ字［２００９］３０６７）；贵州省农业攻
关项目“贵州野生地八角引种选育及应用推广研究”（黔科合 ＮＹ字
［２００８］３０４３）
作者简介：陆瑞霞（１９６２－ ），女，贵州独山人，畜牧师，毕业于贵
州大学，从事草地资源与管理研究，发表文章３篇，获得贵州省农业
丰收奖二等奖、三等奖各１项，贵州省科学技术进步奖三等奖１项，
贵州省农业厅科技进步奖一等奖１项．
文章编号：１６７３－５０２１（２０１２）０４－０１０１－０８
地八角根际溶磷菌溶磷能力及菌株特性研究
陆瑞霞１，王小利１，＊，李显刚２，姚 拓２，赵相勇１
（１．贵州省草业研究所，贵州 贵阳 ５５０００６；２．甘肃农业大学草业学院，甘肃 兰州 ７３００７０）
摘要：采用ＰＫＯ无机培养基，从地八角根际分离具有溶磷能力的菌株，通过溶磷圈法筛选出７株解磷能力较强
的菌株进行深入研究。利用钼蓝比色法对菌株在液体培养条件下的溶磷能力进行测定，结果表明：筛选的菌株分解
磷酸钙的能力差异不大，溶磷量在１２３．３７～１３５．２３μｇ／ｍＬ之间，各菌株的溶磷量与分泌有机酸量、培养介质ｐＨ值
之间均不存在显著相关性；各菌株均具有分泌ＩＡＡ能力，大多数菌落呈淡黄色或乳白色、不规则、不透明、扁平、无色
素；除１株菌表现为中性外，其他６株表现为产碱性；所有菌株在以甘露醇、蔗糖、１／２甘露醇＋１／２蔗糖、葡萄糖、木
糖、麦芽糖取代蛋白胨的碳源培养基上均生长良好。其中，ＤＢＲ２菌株经１６ＳｒＤＮＡ序列分析，初步鉴定为肠杆菌。
关键词：地八角；溶磷菌；分离鉴定；溶磷性能
中图分类号：Ｓ１８２ 文献标识码：Ａ
磷是植物生长发育所必需的营养元素，我国大
多数耕地土壤缺磷，土壤中９５％以上的磷为难溶
态，植物难于吸收。施入土壤中的磷肥，植物当季的
利用率仅仅为５％～２５％［１］，大部分与土壤中的金
属离子结合形成难溶性的磷酸盐［２］。但土壤中存在
大量的溶磷微生物，能够将难溶性的磷酸盐转化为
可溶态，供植物吸收利用，而且还可促进植物对其他
营养元素的吸收及通过分泌生长调节物质促进植物
生长。因此，开展溶磷菌资源的研究与开发具有极
其重要的现实意义。由于不同种类溶磷菌的溶磷能
力存在较大差异，所以从植物根际筛选高效的溶磷
菌尤为重要。目前，国内外关于植物根际溶磷菌的
研究已有零星报道［３～１０］，多集中在菌株菌剂对植株
的促生效应研究，如 Ｈａｒｉｐｒａｓａｄ［１１］、朱培淼［１２］等研
究发现，接种溶磷菌剂后作物鲜重、干重、株高、根长
以及吸收磷量均有不同程度的增加。但其研究的范
围、深度极其有限，仍需不断地探索。
地八角（Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｂｈｏｔａｎｅｎｓｉｓ）是一种优良的
豆科牧草，茎叶柔软，叶量丰富，适口性好，粗蛋白质
含量高，是家畜的良好饲料，每年可刈割或放牧利用
２～３次，是人工草地混播和天然草地补播改良中主
要的豆科牧草［１３］。为了解决贵州地区优良豆科牧
草地八角的养分供给，降低环境污染，保护生态，促
进草地畜牧业可持续发展，本研究从贵州当地栽培
的地八角根际分离筛选高效的溶磷菌，以期为研制
地八角高效的根际复合接种剂提供菌种，实现贵州
喀斯特山区微生物资源深度利用与产业化技术开
发。
１ 材料与方法
１．１ 材料来源
采样地点位于贵州省草业研究所独山县试验
地，东经１０６°１２′～１０８°１８′、北纬２５°０４′～２７°２９′之
间，平均海拔９９７ｍ，属典型亚热带温暖湿润的季风
气候，年均气温１３．６～１９．６℃，年均降雨量１１００～
１４００ｍｍ。采样地土壤ｐＨ ５．９７，含有机质１６．９５
ｇ／ｋｇ，全氮２．１８ｇ／ｋｇ，水解氮１５７．０ｍｇ／ｋｇ，有效磷
１５．０ｍｇ／ｋｇ，速效钾１０．２ｍｇ／ｋｇ。以５点法取样，取
附着于地八角健康根系的根际土壤，按常规方法混
合后装入标记好的无菌封口袋，低温保存并立即带
回实验室进行溶磷菌分离。
１．２ 培养基
分离溶磷菌培养基（ＰＫＯ）为葡萄糖１０．０ｇ、
ＮａＣｌ ０．２ｇ、（ＮＨ４）２ＳＯ４０．５ｇ、ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ ０．１
ｇ、ＫＣｌ ０．２ｇ、ＭｎＳＯ４０．０３ｇ、ＦｅＳＯ４·７Ｈ２Ｏ ０．００３ｇ、
酵母粉０．５ｇ、琼脂１５～２０．０ｇ，加蒸馏水至１０００ｍｌ，
—１０１—
第３４卷 第４期 中 国 草 地 学 报 ２０１２年７月
Ｖｏｌ．３４ Ｎｏ．４ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｇｒａｓｓｌａｎｄ Ｊｕｌ．２０１２
ｐＨ ６．８～７．２，含磷酸钙３．０ｇ。测定３－吲哚乙酸
（ＩＡＡ）用Ｋｉｎｇ培养基［１４］，产酸产碱测定用无氮液
体培养基（ＮＦＭ）［１５］，保存用ＬＢ培养基。
１．３ 溶磷菌分离与初选
将采集的地八角根系上的虚土抖掉，按常规细
菌分离法涂布样品悬液于ＰＫＯ培养基上，待菌落
长出后，挑取具有溶磷菌特征的单个菌落纯化并保
存在ＬＢ试管斜面中（４℃）。以点接种法接种纯分
离物于 ＰＫＯ 培养基上，置于２８℃培养箱中培养
１０ｄ，根据溶磷圈直径（Ｄ）和菌落直径（ｄ）比值大小
初步确定溶磷能力。
１．４ 溶磷菌溶解磷酸钙及分泌有机酸测定
菌株用 ＬＢ 液体培养基制成浓度约为 １０８
ｃｆｕ／ｍＬ的菌悬液，按菌悬液与培养基比例为１∶１００
接种，每菌株３次重复，对照不接菌。接种液置于
２８℃、１５０ｒ／ｍｉｎ摇床培养７ｄ，再将菌液经１００００
ｒ／ｍｉｎ、４℃离心１５ｍｉｎ，取上清液１ｍｌ于１００ｍｌ容量
瓶中，用硫酸钼锑抗混合显色剂法测定菌液中磷含
量，结果用有效磷增量表示［１６］，同时作磷标准曲线
和测定菌液ｐＨ 值；另取５ｍｌ上清液，用０．１ｍｏｌ／Ｌ
ＮａＯＨ溶液（酚酞为指示剂）滴定，计算各菌株分泌
有机酸量［１７］。
１．５ 溶磷菌分泌ＩＡＡ性能测定
１．５．１ 定性判断
每菌株处理按菌悬液与培养基比例为１∶１００
接种，每菌株处理重复３次，对照不接菌，接种后的
Ｋｉｎｇ培养基置于２８℃、１２５ｒ／ｍｉｎ的摇床振荡培养
１０ｄ。取菌株悬浮液１ｍｌ滴置于检测板上，加入等
量ＰＣ比色液，同时在比色液中分别加５０μｇ／ｍＬ、
３０μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ 的 ＩＡＡ １ｍｌ作 梯 度 对 照，
１５ｍｉｎ内室温下观察其颜色变化，根据颜色变化确
定菌株分泌ＩＡＡ的强度［１８］。
１．５．２ 定量测定
挑选具有分泌ＩＡＡ能力的菌株悬液于１００００
ｒ／ｍｉｎ下离心１０ｍｉｎ，取上清液１ｍｌ等比例加Ｓ２比
色液，混匀，在黑暗中静置３０ｍｉｎ后立即用紫外分
光光度计（波长５３０ｎｍ）测定ＯＤ值，根据标准曲线
计算菌液中ＩＡＡ含量（μｇ／ｍＬ）。ＰＣ比色液和Ｓ２
比色液的组成与配方见文献［１９］。
１．６ 菌落特征观察、产酸产碱性能及碳源利用特性
测定
将菌株以平板划线法分别培养于ＰＫＯ培养基
上，置于２８℃培养箱中培养２４～４８ｈ，观察并记录主
要菌落特征。将各菌株悬液接种在３０ｍｌ已灭菌
ＮＦＭ液体培养基中，２８℃、１２５ｒ／ｍｉｎ恒温摇床上振
荡培养７２ｈ后，如菌悬液颜色为绿色或草绿色，表明
为中性菌株；变成黄色，为产酸菌株；变成蓝色为产
碱菌株。在ＬＢ培养基中分别以甘露醇、蔗糖、１／２
甘露醇＋１／２蔗糖、木糖、麦芽糖、葡萄糖取代蛋白
胨，制成不同碳源的培养基，观察并记录各菌株在不
同碳源培养基上的菌落生长情况。
１．７ 菌株１６ＳｒＤＮＡ序列分析
由宝生物（大连）公司提供ＤＮＡ基因组提取试
剂盒提取菌株基因组ＤＮＡ。所用引物由上海捷瑞生
物工程有限公司合成，上游引物：５′－ＧＡＧＡＧＴＴＴ－
ＧＡＴＣＣＴＧＧＣＴＣＡＧ－３′；下游引物：５′－ＣＴＡＣＧＧＣ－
ＴＡＣＣＴＴＧＴＴＡＣＧＡ －３′。２５μｌ ＰＣＲ反应体系组成
为１０×ｂｕｆｅｒ（Ｍｇ２＋）２．５μｌ、ｄＮＴＰ Ｍｉｘｔｕｒｅ（２．５ｍｍｏｌ／Ｌ
ｅａｃｈ）２．０μｌ、上游与下游引物（１０μＭ）各１μｌ、模板
（５０ｎｇ／μＬ）１．０μｌ、ＴａＫａＲａ Ｔａｑ酶（５Ｕ／μＬ）０．２５μｌ、
ｄｄＨ２Ｏ １７．２５μｌ。反应条件：９４℃预变性５ｍｉｎ；９４℃
变性３０ｓ，４５℃退火３０ｓ，７２℃延伸１２０ｓ，３０次循环。
ＰＣＲ扩增产物经１．０％琼脂糖凝胶电泳，使用琼脂
糖ＤＮＡ回收试剂盒回收目的片段，以Ｔ载体法克
隆ＰＣＲ产物，将阳性克隆送上海生工测序，测序结
果提交ＧｅｎＢａｎｋ中的Ｂｌａｓｔ数据库进行同源性比
对，经 Ｃｌｕｓｔａｌ １．８软件进行多重序列比较后，用
Ｍｅｇａ２．０软件构建菌株系统进化树。
２ 结果分析
２．１ 溶磷菌的溶磷能力
２．１．１ 初步筛选
ＤＢＲ２和ＤＢＲ１５菌株在ＰＫＯ培养基上的溶磷
圈如图１所示。溶磷圈直径（Ｄ）与菌落直径（ｄ）的
比值（Ｄ／ｄ）是表征溶磷菌溶磷能力的一个指标，可
初步确定菌株的溶磷能力。从表１可以看出：（１）各
分离物分解磷酸钙的能力差异较大。有些菌株虽然
生长较快，但透明圈并不大，其菌落与透明圈大小几
乎接近；有些菌株虽然生长较慢，但透明圈与菌落的
直径比值达到８．２０，其中１５株菌株菌落周围出现
了明显的透明圈，在ＰＫＯ无机磷培养基上的 Ｄ／ｄ
值具有一定的差异。第１０ｄ，各菌株溶磷的Ｄ／ｄ值
范围在１．３２～８．２０之间。（２）通过对溶磷菌圈直径
与菌落直径比值的观察，初步确定 ＤＢＲ４、ＤＢＲ９、
ＤＢＲ３、ＤＢＲ２、ＤＢＲ５、ＤＢＲ１２、ＤＢＲ１５菌株溶磷效果
比较好，Ｄ／ｄ值均大于２．２０。
—２０１—
中国草地学报 ２０１２年 第３４卷 第４期
图１ 菌株ＤＢＲ２和ＤＢＲ１５在ＰＫＯ无机磷培养基上的溶磷圈
Ｆｉｇ．１ Ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ－ｓｏｌｕｂｉｌｉｚｉｎｇ ｈａｌｏ ｏｆ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ－ｓｏｌｕｂｉｌｉｚｉｎｇ ｂａｃｔｅｒｉａ ｏｎ ＰＫＯ ｍｅｄｉｕｍ ｏｆ ｓｔｒａｉｎ ＤＢＲ２ａｎｄ ＤＢＲ１５
表１ 地八角根际溶磷菌在ＰＫＯ无机磷培养基上的Ｄ／ｄ值
Ｔａｂｌｅ １ Ｄ／ｄ ｖａｌｕｅ ｏｆ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ－ｓｏｌｕｂｉｌｉｚｉｎｇ ｂａｃｔｅｒｉａ ｏｎ ＰＫＯ ｍｅｄｉｕｍ ｆｒｏｍＡｓｔｒａｇａｌｕｓ ｂｈｏｔａｎｅｎｓｉｓ ｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅ
菌株号
Ｓｔｒａｉｎ ｃｏｄｅ
重复 Ｒｅｐｅａｔｅｄ
Ｄ１（ｃｍ）Ｄ２（ｃｍ）Ｄ３（ｃｍ）Ｄ４（ｃｍ）
平均Ｄ（ｃｍ）
Ａｖｅｒａｇｅ
重复 Ｒｅｐｅａｔｅｄ
ｄ１（ｃｍ）ｄ２（ｃｍ）ｄ３（ｃｍ）ｄ４（ｃｍ）
平均ｄ（ｃｍ）
Ａｖｅｒａｇｅ
Ｄ／ｄ值
Ｄ／ｄ ｖａｌｕｅ
ＤＢＲ１ １．４９ １．５０ １．５ １．５０ １．５０ ０．６５ ０．７０ ０．７０ ０．７１ ０．６９ ２．１７±０．１１
ＤＢＲ２ １．８５ １．８０ １．７０ １．７９ １．７９ ０．８５ ０．７９ ０．８０ ０．７９ ０．８１ ２．２１±０．１１
ＤＢＲ３ １．７５ １．７５ １．６３ １．６８ １．７０ ０．７７ ０．７０ ０．６０ ０．７０ ０．６９ ２．４６±０．１８
ＤＢＲ４ １．４５ １．３０ １．３ １．４０ １．３６ ０．５５ ０．４５ ０．４０ ０．６０ ０．５０ ２．７２±０．１３
ＤＢＲ５ １．５０ １．４０ １．４０ １．４ １．４３ ０．６ ０．６０ ０．５５ ０．４８ ０．５６ ２．５５±０．２５
ＤＢＲ６ ２．３５ ２．３５ ２．５０ ２．３０ ２．３８ ０．２０ ０．３０ ０．４０ ０．２５ ０．２９ ８．２０±０．１４
ＤＢＲ７ １．７９ １．８２ １．７５ １．８０ １．７９ ０．９０ ０．９５ ０．９０ ０．９０ ０．９１ １．９７±０．１５
ＤＢＲ８ １．６５ １．６５ １．６５ １．６５ １．６５ ０．８０ ０．８０ ０．７５ ０．７５ ０．７８ ２．１２±０．１０
ＤＢＲ９ １．５５ １．６５ １．６５ １．６３ １．６２ ０．４５ ０．６３ ０．５８ ０．６８ ０．５９ ２．７５±０．４５
ＤＢＲ１０ １．７０ １．５５ １．６９ １．７０ １．６６ ０．８０ ０．７０ ０．７９ ０．８１ ０．７８ ２．１８±０．１１
ＤＢＲ１１ １．３９ １．４１ １．２８ １．２５ １．３３ １．０５ １．０５ ０．９５ １．００ １．０１ １．３２±０．１０
ＤＢＲ１２ １．６０ １．６０ １．５５ １．７０ １．６１ ０．６５ ０．７５ ０．６５ ０．８０ ０．７１ ２．２７±０．１０
ＤＢＲ１３ １．６５ １．６８ １．６２ １．６０ １．６４ ０．７５ ０．８０ ０．７５ ０．７７ ０．７７ ２．１３±０．１０
ＤＢＲ１４ １．８０ １．８０ １．７ １．７５ １．７６ ０．８５ ０．８１ ０．８０ ０．７５ ０．８０ ２．１５±０．１２
ＤＢＲ１５ １．９０ １．７５ １．７９ １．８５ １．８２ ０．８８ ０．７８ ０．７５ ０．８３ ０．８１ ２．２４±０．１０
２．１．２ 溶磷菌复选
试验定量测定了菌株溶解磷酸钙的效果，结
果见表２。各菌株溶解磷酸钙能力差异不大，溶磷
量在１２３．３７～１３５．２３μｇ／ｍＬ之间。相比而言，
ＤＢＲ２菌株的溶磷能力较强，ＤＢＲ５菌株溶磷能力
较弱，差异达极显著水平（Ｐ＜０．０１），其余菌株之
间无显著差异。菌株溶磷能力定量与定性测定结
果表明，对同一菌株而言，并不是 Ｄ／ｄ值越大，在
液体振荡培养条件下溶解无机磷能力就越强。如
ＤＢＲ２在固体培养基上Ｄ／ｄ值最低，其溶磷能力却
是最高的；ＤＢＲ４在固体培养基上 Ｄ／ｄ值是最高
的，但其溶磷能力却相对较低。这与李玉娥［２］等
在苜蓿和红豆草根际溶磷菌研究中所得的结果
一致。
—３０１—
陆瑞霞 王小利 李显刚 姚 拓 赵相勇 地八角根际溶磷菌溶磷能力及菌株特性研究
表２ 地八角根际溶磷菌株在ＰＫＯ培养液中的溶磷量、ｐＨ值及总有机酸量
Ｔａｂｌｅ ２ Ｃａｐａｃｉｔｙ ｏｆ ｄｉｓｓｏｌｖｉｎｇ ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ，ｐＨ ａｎｄ ｔｏｔａｌ ｏｒｇａｎｉｃ ａｃｉｄ ｏｎ ＰＫＯ ｍｅｄｉｕｍ ｏｆ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ－ｓｏｌｕｂｉｌｉｚｉｎｇ
ｂａｃｔｅｒｉａ ｆｒｏｍＡｓｔｒａｇａｌｕｓ ｂｈｏｔａｎｅｎｓｉｓ ｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅ
菌株号
Ｓｔｒａｉｎ ｃｏｄｅ
溶磷量（μｇ／ｍＬ）
Ｃａｐａｃｉｔｙ ｏｆ ｄｉｓｓｏｌｖｉｎｇ ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ（μｇ／ｍＬ）
ｐＨ值
ｐＨ ｖａｌｕｅ
总有机酸量（ｍｍｏｌ／Ｌ）
Ｔｏｔａｌ ｏｒｇａｎｉｃ ａｃｉｄ（ｍｍｏｌ／Ｌ）
ＤＢＲ２ １３５．２３±３．６５ａＡ ５．７３ １０．００±０．００
ＤＢＲ３ １３４．６３±４．９６ａＡ ５．２０ １４．００±２．００
ＤＢＲ４ １２８．７０±５．６３ａｂＡＢ ６．６５ １２．６６±１．１５
ＤＢＲ５ １２３．３７±１．５０ｂＢ ５．７０ １３．３３±１．１５
ＤＢＲ９ １３０．６３±２．７９ａｂＡＢ ５．６８ １１．３３±１．１５
ＤＢＲ１２ １２９．１０±４．１６ａｂＡＢ ５．７１ １３．３３±１．１５
ＤＢＲ１５ １２７．７３±３．９５ａｂＡＢ ５．７０ １２．００±２．００
注：相同字母表示差异不显著，不同小写字母表示差异达０．０５水平，不同大写字母表示差异达０．０１水平，下表同。
Ｎｏｔｅ：Ｔｈｅ ｓａｍｅ ｏｒ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｅｔｔｅｒｓ ｍｅａｎ ｎｏ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｏｒ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｓｍａｌ ｌｅｔｔｅｒｓ（Ｐ＜０．０５），
ｃａｐｉｔａｌ ｌｅｔｔｅｒｓ（Ｐ＜０．０１）．Ｔｈｅ ｓａｍｅ ａｓ ｂｅｌｏｗ．
２．２ 溶磷量与分泌有机酸量及ｐＨ值之间的关系
溶磷 菌 株 分 泌 有 机 酸 范 围 在 １１．３３～
１４．００ｍｍｏｌ／Ｌ之间（表２），菌株ＤＢＲ２分泌有机酸量
最低，但其溶磷量却是最高的；菌株ＤＢＲ５分泌有机
酸量相对较高，但其溶磷能力却是最低的。统计分析
表明，７株溶磷菌分泌有机酸含量与溶磷量间不存在
显著的相关性（Ｒ＝０．３０５，Ｐ＝０．５０６＞０．０５）。说明有
机酸分泌量并不能完全反映溶磷菌株的溶磷能力。
与未接种培养液（ｐＨ值为７．００）相比，接种菌株培养
液ｐＨ值有下降趋势。表明这些菌株在培养过程中
会分泌弱酸性物质。统计分析显示，７株溶磷菌溶磷
量与培养液 ｐＨ 值间不存在显著相关性（Ｒ＝
－０．３１７，Ｐ＝０．４８８＞０．０５）。综合上述分析，溶磷菌
溶磷作用并不完全取决于培养过程中有机酸的分泌
量与ｐＨ值的改变。
２．３ 菌株分泌ＩＡＡ能力
定性检测各供试菌株分泌ＩＡＡ结果见表３，菌
株ＤＢＲ１２、ＤＢＲ２和ＤＢＲ３显色反应不太明显，菌株
ＤＢＲ４显色反应为深粉红色，菌株ＤＢＲ５和ＤＢＲ１５
显色反应为粉红色，菌株ＤＢＲ９显色反应为浅粉红
色。定量测定菌株分泌ＩＡＡ结果发现，各菌株分泌
ＩＡＡ量在１１．０３～１７．５７μｇ／ｍＬ之间（表３），菌株
ＤＢＲ４分泌ＩＡＡ量最大，ＤＢＲ１２分泌ＩＡＡ量最小，
除ＤＢＲ１２、ＤＢＲ２和ＤＢＲ３菌株间分泌ＩＡＡ量无极
显著差异外，各个菌株间分泌ＩＡＡ量差异均达到极
显著水平（Ｐ＜０．０１）。多数菌株分泌ＩＡＡ的定性与
定量测定结果基本吻合。
表３ 地八角根际溶磷菌株分泌ＩＡＡ的性能
Ｔａｂｌｅ ３ Ｓｅｃｒｅｔｉｎｇ ＩＡＡ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｏｆ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ－ｓｏｌｕｂｉｌｉｚｉｎｇ
ｂａｃｔｅｒｉａ ｆｒｏｍＡｓｔｒａｇａｌｕｓ ｂｈｏｔａｎｅｎｓｉｓ ｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅ
菌株号
Ｓｔｒａｉｎ ｃｏｄｅ
颜色反应
Ｃｏｌｏｒ ｒｅａｃｔｉｏｎ
ＩＡＡ值（μｇ／ｍＬ）
ＩＡＡ ｖａｌｕｅ（μｇ／ｍＬ）
ＤＢＲ２ － １１．６６±１．１２ｄＤＥ
ＤＢＲ３ － １１．２９±０．２２ｄＥ
ＤＢＲ４ ＋＋＋ １７．５７±０．３２ａＡ
ＤＢＲ５ ＋＋ １４．９２±０．３５ｂＢ
ＤＢＲ９ ＋ １２．９９±０．７０ｃＣＤ
ＤＢＲ１２ － １１．０３±０．３６ｄＥ
ＤＢＲ１５ ＋＋ １３．６１±０．５１ｃＢＣ
注：“＋＋＋”表示深粉红；“＋＋”表示粉红；“＋”表示浅粉红；
“－”表示未分泌。
Ｎｏｔｅ：“＋＋＋”ｄｅｅｐ ｐｉｎｋ；“＋＋”ｐｉｎｋ；“＋”ｌｏｗ ｐｉｎｋ ａｎｄ
“－”ｎｏ ｃｏｌｏｒ．
２．４ 溶磷菌菌落观察及生理生化特性
对所分离的７株溶磷菌菌落形态观察表明，供
试的溶磷菌菌落大多数呈淡黄色或乳白色、不规则、
不透明、扁平、无色素（表４）。菌株产酸产碱性能测
定结果表明，供试的７株溶磷菌中除１株的菌悬液
为绿色，表现为中性外，其余６株的菌悬液为蓝色，
表现为碱性（表５）。碳源利用特性测定结果表明，
所有菌株在以甘露醇、蔗糖、１／２甘露醇＋１／２蔗糖、
葡萄糖、木糖、麦芽糖取代蛋白胨的碳源培养基上均
生长良好（表６）。
—４０１—
中国草地学报 ２０１２年 第３４卷 第４期
表４ 地八角根际溶磷菌在ＰＫＯ无机磷培养基上第１０ｄ的菌落特征
Ｔａｂｌｅ ４ Ｔｈｅ ｃｏｌｏｎｙ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ－ｓｏｌｕｂｉｌｉｚｉｎｇ ｂａｃｔｅｒｉａ ｏｎ ＰＫＯ
ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｄｉｕｍ ｆｒｏｍＡｓｔｒａｇａｌｕｓ ｂｈｏｔａｎｅｎｓｉｓ ｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅ
菌株号
Ｓｔｒａｉｎ ｃｏｄｅ
大小
Ｓｉｚｅ
形态
Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ
干湿
Ｄｒｙ－ｗｅｔ
高度
Ｈｅｉｇｈｔ
透明度
Ｔｒａｎｓｐａｒｅｎｃｙ
颜色
Ｃｏｌｏｒ
边缘
Ｅｄｇｅ
色素
Ｐｉｇｍｅｎｔ
ＤＢＲ２ 大 圆形 半湿润 扁平 不透明 乳白色 整齐 无
ＤＢＲ３ 大 不规则 半湿润 扁平 透明 淡黄色 锯齿 无
ＤＢＲ４ 中 不规则 半湿润 扁平 不透明 淡黄色 整齐 无
ＤＢＲ５ 中 不规则 半湿润 扁平 不透明 淡黄色 锯齿 无
ＤＢＲ９ 中 不规则 半湿润 扁平 不透明 淡黄色 整齐 无
ＤＢＲ１２ 大 不规则 半湿润 扁平 不透明 乳白色 锯齿 无
ＤＢＲ１５ 大 不规则 半湿润 扁平 不透明 乳白色 锯齿 无
表５ 地八角根际溶磷菌产酸产碱性能测定
Ｔａｂｌｅ ５ Ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ａｃｉｄ ａｎｄ ａｌｋａｌｉ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ－
ｓｏｌｕｂｉｌｉｚｉｎｇ ｂａｃｔｅｒｉａ ｆｒｏｍＡｓｔｒａｇａｌｕｓ ｂｈｏｔａｎｅｎｓｉｓ ｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅ
菌株号
Ｓｔｒａｉｎ ｃｏｄｅ
颜色
Ｃｏｌｏｒ
产酸或产碱
Ａｃｉｄ ｏｒ ａｌｋａｌｉ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ
ｐＨ值
ｐＨ ｖａｌｕｅ
ＤＢＲ２ 蓝色 产碱 ７．２５
ＤＢＲ３ 蓝色 产碱 ７．６４
ＤＢＲ４ 蓝色 产碱 ７．１８
ＤＢＲ５ 蓝色 产碱 ７．１９
ＤＢＲ９ 绿色 中性 ７．００
ＤＢＲ１２ 蓝色 产碱 ７．６４
ＤＢＲ１５ 蓝色 产碱 ７．５０
２．５ 菌株１６ＳｒＤＮＡ序列分析
提取菌株ＤＢＲ２的基因组ＤＮＡ，利用合成的上
下游引物进行ＰＣＲ扩增，扩增产物经１．０％琼脂糖
凝胶电泳检测，发现扩增的条带单一。切胶回收
ＰＣＲ产物后进行 Ｔ－Ｖｅｃｔｏｒ克隆测序，得到序列长
度 为 １４４４ｂｐ。将 序 列 输 入 Ｇｅｎｂａｎｋ 中 进 行
ＢＬＡＳＴ同源性比对，结果表明该片段与阴沟肠杆
菌（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｃｌｏａｃａｅ）、Ｌｕｄｗｉｇｉ肠杆菌（Ｅｎｔｅｒ－
ｏｂａｃｔｅｒ ｌｕｄｗｉｇｉｉ）１６ＳｒＤＮＡ的序列同源性最高，在
９９％以上。挑取与该菌株相似的序列经Ｃｌｕｓｔａｌ １．８
软件多重序列比较后，用 Ｍｅｇａ ２．０软件中的邻接
法（Ｎｅｉｇｈｂｏｒ－Ｊｏｉｎｉｎｇ）构建系统发育树，菌株ＤＢＲ２
与肠杆菌属形成一个族群，依此比对结果并结合生
理生化特征，将该菌株初步鉴定为肠杆菌（Ｅｎｔｅｒ－
ｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．）。
表６ 地八角根际溶磷菌对碳源的利用
Ｔａｂｌｅ ６ Ｃａｒｂｏｎ ｓｏｕｒｃｅ ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ－ｓｏｌｕｂｉｌｉｚｉｎｇ ｂａｃｔｅｒｉａ ｆｒｏｍＡｓｔｒａｇａｌｕｓ ｂｈｏｔａｎｅｎｓｉｓ ｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅ
菌株号
Ｓｔｒａｉｎ ｃｏｄｅ
碳源培养基Ｃａｒｂｏｎ ｓｏｕｒｃｅ
甘露醇
Ｍａｎｎｉｔｏｌ
蔗糖
Ｓｕｃｒｏｓｅ
１／２甘露醇＋１／２蔗糖
１／２Ｍａｎｎｉｔｏｌ＋１／２Ｓｕｃｒｏｓｅ
葡萄糖
Ｇｌｕｃｏｓｅ
木糖
Ｘｙｌｏｓｅ
麦芽糖
Ｍａｌｔｏｓｅ
ＤＢＲ２ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋
ＤＢＲ３ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋
ＤＢＲ４ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋
ＤＢＲ５ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋
ＤＢＲ９ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋
ＤＢＲ１２ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋
ＤＢＲ１５ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋
注：“－”、“＋”、“＋＋”、“＋＋＋”分别表示４８ｈ菌株生长状况为不生长、生长、生长较好、生长茂盛。
Ｎｏｔｅ：“－”，“＋”，“＋＋”，“＋＋＋”Ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ ｎｏ ｇｒｏｗｔｈ，ｇｒｏｗｔｈ，ｇｏｏｄ ｇｒｏｗｔｈ，ｌｕｓｈ ｇｒｏｗｔｈ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ（４８ｈｇｒｏｗｔｈ ｓｔａｔｕｓ）．
—５０１—
陆瑞霞 王小利 李显刚 姚 拓 赵相勇 地八角根际溶磷菌溶磷能力及菌株特性研究
图２ 基于１６ＳｒＤＮＡ序列同源性构建的系统发育树
Ｆｉｇ．２ Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒｅｅ ｂａｓｅｄ ｏｎ １６ＳｒＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｈｏｍｏｌｏｇｙ
３ 讨论与结论
３．１ 讨论
溶磷菌的解磷机理具多样性，大多数研究者认
为，微生物的解磷作用主要取决于其分泌有机酸量
及其种类，如柠檬酸、草酸、葡萄糖酸、苹果酸、琥珀
酸、乙酸和乳酸等［２０］。其中Ａｇｎｉｈｏｔｒｉ［２１］认为，分泌
有机酸是微生物溶磷的主要原因，且所分泌的有机
酸种类比数量对溶磷影响更大。但本研究中各菌株
的溶磷量与分泌有机酸量、培养介质ｐＨ 值之间均
不存在显著相关性，这与林启美［２２］的研究结果一
致。溶磷菌分泌有机酸的数量及其种类的较大差异
和不同有机酸与Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋、Ｆｅ２＋、Ｆｅ３＋、Ａｌ ３＋等离
子的结合能力各异，均可能是影响解磷量的关键因
素。此外，溶磷菌将难溶性磷酸盐转化为可溶态是
一个复杂的过程，有学者研究认为微生物的溶磷能
力可能与微生物分泌的磷酸酶活性及产生的多肽等
有关。因此，在今后的研究中应采用传统与现代分
子技术相结合的方法，综合考虑和测定溶磷菌生存
环境周围可能的因素及自身特性，才能为筛选和利
用这种微生物资源提供可靠的理论依据。
对菌株分泌ＩＡＡ及产酸产碱性能的测定是全
面了解菌株的基础。研究表明，植物根际促生菌产
生的ＩＡＡ的作用不仅在于其直接的促生作用，如改
变细胞内环境，导致细胞壁糖溶解、可塑性增加以及
促进ＲＮＡ及蛋白质的合成，还可抑制几丁质酶等
的活性，使有益细菌更易定殖于植物。本研究筛选
的各菌株具有分泌ＩＡＡ能力及产碱性能，可能是生
活在贵州偏酸性土壤中的微生物长期进化结果；各
菌株定殖在植物根际，有助于植物适宜生长及其根
毛对ＩＡＡ的吸收［２３］。
本研究的溶磷菌ＤＢＲ２经１６ＳｒＤＮＡ序列分析
并结合生理生化特征，初步鉴定为肠杆菌。目前，国
内外在溶磷微生物方面研究较多的有芽孢杆菌
（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、假单胞杆菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、欧文氏菌
（Ｅｒｗｉｎｉａ）等，其中由芽孢杆菌组成的复合解磷菌
剂广泛用于水稻、豌豆等多种农作物及牧草上，对发
挥解磷功能和提高作物产量都具有很好的效果［２４］，
而肠杆菌类溶磷细菌在对相关植物的促生效果等方
面研究报道较少。这需要在以后的研究中加强肠杆
菌溶磷机理的研究，为土壤中溶磷菌的遗传及溶磷
机理多样性研究奠定理论基础。
虽然我国溶磷微生物的研究已有一段时间，但
发展不快，应用不普遍，尤其对于牧草及草坪溶磷微
—６０１—
中国草地学报 ２０１２年 第３４卷 第４期
生物的特性研究甚少。尽管在植物根际溶磷菌资源
研究中取得了一些可喜的成果，但仍需不断探索。
特别是溶磷菌的基础性研究相当薄弱，植物－溶磷
菌联合体系建立过程中的形成机理和根际微生态系
统中植物、土壤和细菌三者间的相互作用机理尚待
阐明。因此，广泛开展溶磷菌资源研究，建立各植物
的溶磷体系，阐明其互作及促生机理，筛选和培育高
效优良溶磷促生菌株，扩大资源库，服务于农牧业生
产是今后研究的重点。
３．２ 结论
地八角根际土壤周围存在着相当数量且溶磷能
力各异的溶磷菌株，这对地八角健康生长及疏松土
壤结构极其有利。试验中获得的ＤＢＲ２溶磷菌株拥
有１３５．２３μｇ／ｍＬ的溶磷量，并在无色氨酸条件下分
泌出１１．０３μｇ／ｍＬ的ＩＡＡ，尽管其为机会病原菌的
肠杆菌属细菌，但所具有的这两项功能可能对地八
角或其他牧草有促生、增产或提高根际难溶性磷利
用率的作用，有作为溶磷接种剂的潜力。
参考文献（Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ）：
［１］ 王光华，周可琴，金剑．不同碳源对三种溶磷真菌溶解磷矿粉能
力的影响［Ｊ］．生态学杂志，２００４，２３（２）：３２－３６．
Ｗａｎｇ Ｇｕａｎｇｈｕａ，Ｚｈｏｕ Ｋｅｑｉｎ，Ｊｉｎ Ｊｉａｎ．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ Ｃ
ｓｏｕｒｃｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ｓｏｌｕｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｏｃｋ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｙ ｔｈｒｅｅ ｐｈｏｓ－
ｐｈａｔｅｓｏｌｕｂｉｌｉｚｉｎｇ ｆｕｎｇｉ（ＰＳＦ）［Ｊ］．Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊ．Ｅｃｏｌｏｇｙ，２００４，
２３（２）：３２－３６．
［２］ Ｋａｂｚｎｅｌｓｏｎ Ｈ，Ｐｅｔｅｒｓｏｎ Ｅ Ａ，Ｒｏｕａｔｔ Ｊ Ｗ．Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ－ｄｉｓｓｏｌ－
ｖｉｎｇ ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ｏｎ ｓｅｅｄ ａｎｄ ｉｎ ｔｈｅ ｒｏｏｔ ｚｏｎｅ ｏｆ ｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．
Ｃａｎａｄｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｏｔａｎｙ，１９６２，４０（９）：１１８１－１１８６．
［３］ 李玉娥，姚拓，朱颖，等．兰州地区苜蓿和红豆草根际溶磷菌筛
选及菌株部分特性研究［Ｊ］．中国草地学报，２００９，３１（１）：４５－
５１．
Ｌｉ Ｙｕ’ｅ，Ｙａｏ Ｔｕｏ，Ｚｈｕ Ｙｉｎｇ，ｅｔ ａｌ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓ－
ｔｉｃｓ ｏｆ ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ－ｓｏｌｕｂｉｌｉｚｉｎｇ ｂａｃｔｅｒｉａ ｉｎ ｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅ ｏｆ ａｌｆａｌｆａ
ａｎｄ ｓａｉｎｆｏｉｎ ｉｎ Ｌａｎｚｈｏｕ［Ｊ］．Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｇｒａｓｓｌａｎｄ，
２００９，３１（１）：４５－５１．
［４］ 秦芳玲，王敬国，李晓林，等．ＶＡ菌根真菌和解磷细菌对红三
叶草生长和氮磷营养的影响［Ｊ］．草业学报，２０００，９（１）：９－１４．
Ｑｉｎ Ｆａｎｇｌｉｎｇ，Ｗａｎｇ Ｊｉｎｇｇｕｏ，Ｌｉ Ｘｉａｏｌｉｎ，ｅｔ ａｌ．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ＶＡ
ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ ｆｕｎｇｉ ａｎｄ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ－ｓｏｌｕｂｉｌｉｚｉｎｇ ｂａｃｔｅｒｉａ ｏｎ
ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ ｕｐｔａｋｅ ｏｆ ｒｅｄ ｃｌｏｖｅｒ［Ｊ］．Ａｃｔａ Ｐｒａｔａｃ－
ｕｌｔｕｒｅ Ｓｉｎｉｃａ，２０００，９（１）：９－１４．
［５］ Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ Ａ Ｈ，Ｌｉｕ Ｓ Ｔ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ａ
ｍｉｎｅｒａｌ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｓｏｌｕｂｉｌｉｚｉｎｇ ｇｅｎｅ ｆｒｏｍ Ｅｒｗｉｎｉａ ｈｅｒｂｉｃｏｌａ
［Ｊ］．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９８７，５：７２－７４．
［６］ 尹瑞龄，王华，赵小蓉．一些细菌和真菌的解磷能力及其机理初
探［Ｊ］．微生物学报，２００１，２８（２）：２６－２９．
Ｙｉｎ Ｒｕｉｌｉｎｇ，Ｗａｎｇ Ｈｕａ，Ｚｈａｏ Ｘｉａｏｒｏｎｇ．Ｃａｐａｃｉｔｙ ｏｆ ｓｏｍｅ
ｂａｃｔｅｒｉａ ａｎｄ ｆｕｎｇｉ ｉｎ ｄｉｓｓｏｌｖｉｎｇ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｒｏｃｋ［Ｊ］．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ－
ｏｇｙ，２００１，２８（２）：２６－２９．
［７］ Ｐａｕｌ Ｎ Ｂ，Ｓｕｎｄａｒａ ｒａｏ Ｗ Ｖ Ｂ．Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ－ｄｉｓｓｏｌｖｉｎｇ ｂａｃｔｅｒｉａ
ｉｎ ｔｈｅ ｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅ ｏｆ ｓｏｍｅ ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ ｌｅｇｕｍｅｓ［Ｊ］Ｐｌａｎｔ ａｎｄ
Ｓｏｉｌ，１９７１，３５：１２７－１３２．
［８］ Ｍｏｌａ Ｍ．Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｍｉｎｅｒａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｏｒｇａｎｉｃ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｉｎ ｓｏｉｌ
［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ ａｎｄ Ｓｏｉｌ，１９９１，７８：３９３－３９９．
［９］ Ａｂｄ－Ａｌａ Ｍ Ｈ．Ｐｈｏｓｐｈａｔｅｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｏｒｇａｎｉｃ ｐｈｏｓ－
ｐｈｏｒｕｓ ｂｙ ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｌｅｇｕｍｉｎｏｓａｒｕｍ ｂｉｏｖａｒ ｖｉｃｅａｅ［Ｊ］．Ｌｅｔｔ．
Ａｐｐ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏ．，１９９４，１８：２９４－２９６．
［１０］ Ｉｌｍｅｒ Ｐ，Ｓｃｈｉｎｎｅｒ Ｆ．Ｓｏｌｕｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｏｒｇａｎｉｃ ｃａｌｃｉｕｍ
ｐｈｏｓｐｈａｔｅｓ ｓｏｌｕｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ［Ｊ］．Ｓｏｉｌ Ｂｉｏｌ．Ｂｉｏ－
ｃｈｅｍ．，１９９５，２７（３）：２５７－２６３．
［１１］ Ｈａｒｉｐｒａｓｅｄ Ｐ，Ｎｉｒａｎｊａｎａ Ｓ Ｒ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ
ｏｆ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｓｏｌｕｂｉｌｉｚｉｎｇ ｒｈｉｓｏｂａｃｔｅｒｉａ ｔｏ ｉｍｐｒｏｖｅ ｐｌａｎｔ
ｈｅａｌｔｈ ｏｆ ｔｏｍａｔｏ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ Ｓｏｉｌ，２００９，３１６：１３－２４．
［１２］ 朱培淼，杨兴明，徐阳春，等．高效解磷细菌的筛选及其对玉米
苗期生长的促进作用［Ｊ］．应用生态学报，２００７，１８（１）：１０７－
１１２．
Ｚｈｕ Ｐｅｉｍｉａｏ，Ｙａｎｇ Ｘｉｎｇｍｉｎｇ，Ｘｕ Ｙａｎｇｃｈｕｎ，ｅｔ ａｌ．Ｈｉｇｈ ｅｆ－
ｆｅｃｔｉｖｅ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ－ｓｏｌｕｂｉｌｉｚｉｎｇ ｂａｃｔｅｒｉａ：Ｔｈｅｉｒ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ
ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｃｏｒｎ ｓｅｅｄｌｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ［Ｊ］．Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒ－
ｎａｌ ｏｆ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｅｃｏｌｏｇｙ，２００７，１８（１）：１０７－１１２．
［１３］ 张川黔，何胜江，宋高翔，等．贵州野生牧草的引种驯化［Ｊ］．西
南农业学报，１９９６，９（４）：６９－７６．
Ｚｈａｎｇ Ｃｈｕａｎｑｉａｎ，Ｈｅ Ｓｈｅｎｇｊｉａｎｇ，Ｓｏｎｇ Ｇａｏｘｉａｎｇ，ｅｔ ａｌ．Ｉｎ－
ｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｏｍｅｓｔｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｗｉｌｄ ｌｅｇｕｍｉｎｏｕｓ ｇｒａｓｓｅｓ ｉｎ
Ｇｕｉｚｈｏｕ［Ｊ］．Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ Ｃｈｉｎａ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉ－
ｅｎｃｅｓ，１９９６，９（４）：６９－７６．
［１４］ 李玉娥，姚拓，荣良燕．溶磷菌溶磷和分泌ＩＡＡ特性及对苜蓿
生长的影响［Ｊ］．草地学报，２０１０，（１）：８４－８８．
Ｌｉ Ｙｕ’ｅ，Ｙａｏ Ｔｕｏ，Ｒｏｎｇ Ｌｉａｎｇｙａｎ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ＩＡＡ
ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｄｉｓｓｏｌｖｉｎｇ ｏｆ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ－ｓｏｌｕｂｉｌｉｚｉｎｇ
ｂａｃｔｅｒｉａ ａｎｄ ｉｔｓ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ａｌｆａｌｆａ ｇｒｏｗｔｈ［Ｊ］．Ａｃｔａ Ａｇｒｅｓｔｉａ
Ｓｉｎｉｃａ，２０１０，（１）：８４－８８．
［１５］ Ｈａｆｅｅｚ Ｆ Ｙ，Ｍａｌｉｋ Ｋ Ａ．Ｍａｎｕａｌ ｏｎ ｂｉｏｆｅｒｔｉｌｉｚｅｒ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
［Ｍ］．Ｐａｋｉｓｔａｎ：Ｎｉｂｇｅ，２０００：１３２－１３５．
［１６］ Ｓｍｉｔｈ Ｋ Ｐ，Ｇｏｏｄｍａｎ Ｒ Ｍ．Ｈｏｓｔ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ
ｗｉｔｈ ｂｅｎｅｆｉｃｉａｌ ｐｌａｎｔ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｍｉｃｒｏｂｅｓ［Ｊ］．Ａｎｎａｌ Ｒｅｖｉｅｗ
ｏｆ Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，１９９９，９６：４７８６－４７９０．
［１７］ 万鏴，康丽华，廖宝文，等．红树林根际解磷菌分离、培养及解
磷能力的研究［Ｊ］．林业科学研究，２００４，１７（１）：８９－９４．
Ｗａｎ Ｌｕ，Ｋａｎｇ Ｌｉｈｕａ，Ｌｉａｏ Ｂａｏｗｅｎ，ｅｔ ａｌ．Ｍａｎｇｒｏｖｅ ＰＳＢ：
Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ，ｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ－ｄｉｓｓｏｌｖｉｎｇ ａｂｉｌｉｔｙ［Ｊ］．Ｆｏｒｅｓｔ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００４，１７（１）：８９－９４．
［１８］ 席琳乔，姚拓，杨俊基，等．联合固氮菌株分泌能力及其对燕麦
的促生效应测定［Ｊ］．草原与草坪，２００５，（３）：２３－２７．
Ｘｉ Ｌｉｎｑｉａｏ，Ｙａｏ Ｔｕｏ，Ｙａｎｇ Ｊｕｎｊｉ，ｅｔ ａｌ．Ｐｏｒｐｅｒｔｙ ｏｆ ａｓｓｏｃｉａ－
ｔｉｖｅ ｎｉｔｒｏｇｅｎ－ｆｉｘｉｎｇ ｂａｃｔｅｒｉａ ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ＩＡＡ ａｎｄ ｉｔｓ ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ
ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｏａｔ［Ｊ］．Ｇｒａｓｓｌａｎｄ ａｎｄ Ｔｕｒｆ，２００５，（３）：２３－２７．
［１９］ 姚拓．饲用燕麦和小麦根际促生菌特性研究及其生物菌肥初
步研制［Ｄ］．兰州：甘肃农业大学，２００２．
—７０１—
陆瑞霞 王小利 李显刚 姚 拓 赵相勇 地八角根际溶磷菌溶磷能力及菌株特性研究
Ｙａｏ Ｔｕｏ．Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｇｒｏｗｔｈ－ｐｒｏｍｏｔｉｏｎ ｂａｃｔｅｒｉａ
ｆｒｏｍ ｏａｔｓ ａｎｄ ｗｈｅａｔ ａｎｄ ｉｎｉｔｉａｌ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｂｉｏｆｅｒｔｉｌｉｚｅｒ
［Ｄ］．Ｌａｎｚｈｏｕ：Ｇａｎｓｕ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２００２．
［２０］ Ｃｈｅｎ Ｙ Ｐ，Ｒｅｋｈａ Ｐ Ｄ，Ａｒｕｎ Ａ Ｂ，ｅｔ ａｌ．Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｓｏｌｕｂｉｌｉｚ－
ｉｎｇ ｂａｃｔｅｒｉａ ｆｒｏｍ ｓｕｂｔｒｏｐｉｃａｌ ｓｏｉｌ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｔｒｉｃａｌｃｉｕｍ ｐｈｏｓ－
ｐｈａｔｅ ｓｏｌｕｂｉｌｉｚｉｎｇ ａｂｉｌｉｔｉｅｓ［Ｊ］．Ａｐｐｌｉｅｄ Ｓｏｉｌ Ｅｃｏｌｏｇｙ，２００６，
３４：３３－４１．
［２１］ Ａｇｎｉｈｏｔｒｉ Ｖ Ｐ．Ｓｏｌｕｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｓｏｌｕｂｌｅ ｐｈｏｓｐｈａｔｅｓ ｂｙ
ｓｏｍｅ ｓｏｉｌ ｆｕｇｉ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｎｕｒｓｅｒｙ ｓｅｅｄ ｂｅｄｓ［Ｊ］．Ｃａｎ．Ｊ．
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，１９７０，１６：８７７－８８０．
［２２］ 林启美，王华，赵小蓉，等．一些细菌和真菌的解磷能力及其机
理初探［Ｊ］．微生物学通报，２００１，２８（２）：２６－３０．
Ｌｉｎ Ｑｉｍｅｉ，Ｗａｎｇ Ｈｕａ，Ｚｈａｏ Ｘｉａｏｒｏｎｇ，ｅｔ ａｌ．Ｃａｐａｃｉｔｙ ｏｆ
ｓｏｍｅ ｂａｃｔｅｒｉａ ａｎｄ ｆｕｎｇｉ ｉｎ ｄｉｓｓｏｌｖｉｎｇ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｒｏｃｋ［Ｊ］．Ｍｉ－
ｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００１，２８（２）：２６－３０．
［２３］ 姚拓．高寒地区燕麦根际联合固氮菌研究Ⅱ．固氮菌的溶磷性
和分泌植物生长素特性测定［Ｊ］．草业学报，２００４，１３（３）：８５－
９０．
Ｙａｏ Ｔｕｏ．Ａｓｓｏｃｉａｔｉｖｅ ｎｉｔｒｏｇｅｎ－ｆｉｘｉｎｇ ｂａｃｔｅｒｉａ ｉｎ ｔｈｅ ｒｈｉｚｏ－
ｓｐｈｅｒｅ ｏｆ Ａｖｅｎａ ｓａｔｉｖａｉｎ ａｎ ａｌｐｉｎｅ ｒｅｇｉｏｎⅡＰｈｏｓｐｈａｔｅ－ｓｏｌｕｂｉ－
ｌｉｚｉｎｇ ｐｏｗｅｒ ａｎｄ ａｕｘｉｎ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ａｃｔａ Ｐｒａｔａｃｕｌｔｕｒｅ
Ｓｉｎｉｃａ，２００４，１３（３）：８５－９０．
［２４］ Ｂｅｃｋｉｅ Ｈ Ｊ，Ｍｏｕｌｉｎ Ａ Ｐ，Ｇｌｅｄｄｉｅ Ｓ Ｃ．Ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｏｆ ａｌｆａｌｆａ ｔｏ
ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｂｉｌａｊｉ［Ｊ］．Ｃａｎａｄｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９８，７８（１）：９１－１０２．
Ｃａｐａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ Ｄｉｓｓｏｌｖｉｎｇ Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ
Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ－ｄｉｓｓｏｌｖｉｎｇ Ｂａｃｔｅｒｉａ ｉｎ Ｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅ ｏｆ
Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｂｈｏｔａｎｅｎｓｉｓ ｉｎ Ｇｕｉｚｈｏｕ
ＬＵ Ｒｕｉ－ｘｉａ１，ＷＡＮＧ Ｘｉａｏ－ｌｉ １，ＬＩ Ｘｉａｎ－ｇａｎｇ２，ＹＡＯ Ｔｕｏ２，ＺＨＡＯ Ｘｉａｎｇ－ｙｏｎｇ１
（１．Ｇｕｉｚｈｏｕ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｐｒａｔａｃｕｌｔｕｒｅ，Ｇｕｉｙａｎｇ５５０００６，Ｃｈｉｎａ；２．Ｐｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，
Ｇａｎｓｕ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｌａｎｚｈｏｕ７３００７０，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｂｙ ｕｓｉｎｇ ＰＫＯ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｄｉａ，ｉｎｏｒｇａｎｉｃ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｄｉｓｓｏｌｖｉｎｇ ｂａｃｔｅｒｉａ ｗａｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｒｈｉ－
ｚｏｓｐｈｅｒｅ ｏｆ Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｂｈｏｔａｎｅｎｓｉｓ．Ｓｏｍｅ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈｅｒ ｃａｐａｃｉｔｙ ｏｆ ｄｉｓｓｏｌｖｉｎｇ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｗｅｒｅ ｉｄｅｎｔｉ－
ｆｉｅｄ ｂｙ ｍｅａｎｓ ｏｆ ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ ｈｏｌｅ，Ｆｕｒｔｈｅｒ ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ ｄｉｓｓｏｌｖｉｎｇ ｃａｐａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｉｔｈ
ｔｈｅ ｍｏｌｙｂｄｅｎｕｍ ｂｌｕｅ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｌｉｔｔｌｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｉｎ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ－ｄｉｓｓｏｌｖｉｎｇ
ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ｃａｐａｂｉｌｉｔｙ，ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｄｉｓｓｏｌｖｉｎｇ ｃａｐａｃｉｔｙ ｗａｓ １２３．３７～１３５．２３μｇ／ｍＬ．Ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｎｏ ｏｂ－
ｖｉｏｕｓ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｄｉｓｓｏｌｖｉｎｇ ｃａｐａｃｉｔｙ ａｎｄ ｐＨ，ｏｒｇａｎｉｃ ａｃｉｄ．Ｍｏｓｔ ｏｆ ｔｈｅ ｓｔｒａｉｎｓ ｈａｄ
ｔｈｅ ａｂｉｌｉｔｙ ｔｏ ｐｒｏｄｕｃｅ ＩＡＡ．Ｓｅｖｅｎ ｓｔａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｆｏｒ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｓｔｕｄｙ，ａｎｄ ｍｏｓｔ
ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｃｏｌｏｎｙ ｗａｓ ｐａｌｅ ｙｅｌｏｗ ｏｒ ｍｉｌｋ－ｗｈｉｔｅ，ｉｒｒｅｇｕｌａｒ，ｏｐａｑｕｅ，ｆｌａｔ，ｎｏｎ－ｐｉｇｍｅｎｔ，Ｉｎ ａｄｄｉｔｉｏｎ ｔｏ ａ ｂａｃ－
ｔｅｒｉａ ｓｈｏｗｉｎｇ ｎｅｕｔｒａｌ，ｔｈｅ ｏｔｈｅｒｓ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ａｌｋａｌｉｎｅ；ａｌ ｓｔｒａｉｎｓ ｇｒｅｗ ｗｅｌ ｉｎ ｃａｒｂｏｎ ｓｏｕｒｃｅ ｍｅｄｉｕｍ ｏｆ ｍａｎ－
ｎｉｔｏｌ，ｓｕｃｒｏｓｅ，１／２ｍａｎｎｉｔｏｌ＋１／２ｓｕｃｒｏｓｅ，ｇｌｕｃｏｓｅ，ｘｙｌｏｓｅ，ｍａｌｔｏｓｅ ｒｅｐｌａｃｅｄ ｐｅｐｔｏｎｅ，ｓｔｒａｉｎ ＤＢＲ２ｗａｓ
ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ａｓ Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｂｙ １６ＳｒＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｂｈｏｔａｎｅｎｓｉｓ；Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ－ｄｉｓｓｏｌｖｉｎｇ ｂａｃｔｅｒｉａ；Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ；Ｃａ－
ｐａｃｉｔｙ ｏｆ ｄｉｓｓｏｌｖｉｎｇ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ
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中国草地学报 ２０１２年 第３４卷 第４期