全 文 ：·研究报告·
石香薷挥发油对流感 A3病毒的抑制作用
严银芳1 ,陈　晓1 ,杨小清2 ,董长垣1 ,吴少华2 ,陈敬炳3 ,王从云3
(1.武汉大学 基础医学院医学病毒学研究所 ,湖北 武汉　430071;2.湖北省医学科学院 ,湖北 武汉　430070;
3.湖北省中医药研究院 ,湖北 武汉　430070)
摘　要　评估了 MCMVO体内外抗流感 A 3病毒作用。在 Vero细胞中测定 MCMVO 对流感 A3 病毒所致细胞病变
的抑制作用;在鸡胚中检测对流感 A 3病毒血凝效价的抑制作用;在小白鼠体内测定对流感病毒性肺炎的治疗作用 。
结果显示 , MCMVO在浓度大于 4.9 mg/ L时能有效抑制流感 A3 病毒所致 Vero细胞 CPE。在 9 日龄鸡胚中浓度
为 500 mg/ L , 250 mg/ L和 50 mg/ L 的 MCMVO能使流感 A3 病毒血凝效价由 1∶1 280 分别下降到 1∶20 , 1∶40 和
1∶160。在给药剂量在 100μg/(g·d)以上时 ,对小鼠流感病毒性肺炎有明显的治疗作用。结果表明 , MCMVO具有
抗流感A 3 病毒作用。
关键词　石香薷;挥发油;抗病毒作用
中图分类号　R978.7　　　文献标识码　A　　　文章编号　1005-7021(2002)01-0032-02
　　石香薷(Mosla chinensis Maxim , MCM)属唇形
科 ,为一年草本植物 ,主治夏月感冒 ,腹痛泄泻等 ,曾
有研究证明其挥发油具有广谱抗菌作用和提高免疫
应答力 。本文报道石香薷挥发油体内外对流感 A3
病毒的抑制作用 。
1　材料与方法
1.1　MCMVO的提取制备
取干燥石香薷(采自湖北省东部地区),切碎 ,加
适量水通入水蒸汽蒸馏 , 得到 MCMVO , 收率为
1.0%。取 50 mL MCMVO溶于 5 % Tw een-80水
溶液 1 000 mL中 ,分装备用。
1.2　病毒和细胞
流感 A3 病毒(雅防 InfvA387-2En)由本室所存。
Vero细胞购自武汉大学典型培养物保存中心。病
毒先在 9日龄鸡胚进行尿囊腔 、羊膜腔无菌接种 、活
化增殖病毒 ,如此反复 3 次 ,鸡胚传代接种后 ,病毒
的血凝效价由 1∶8 增至 1∶640 ,将活化病毒在 Vero
细胞中增殖 ,待细胞病变达+++时收获病毒 ,测其
血凝效价可达 1∶1 280 以上 。病毒在 Vero 细胞中
增殖周期为 3 ～ 4 d ,病毒特异性 CPE 呈细胞多灶性
小片融合 ,圆缩直至脱落 。
1.3　细胞培养中抑制病毒试验
1.3.1　MCMVO对细胞毒性作用的测定　Vero 细
胞接种于 96 孔组织培养板 ,待细胞长满后 ,弃去生
长液 ,PBS 洗 1次 ,加入不同浓度的 MCMVO(用含
2 %小牛血清维持液稀释), 每一浓度 4 孔 , 置 37
℃培养 ,每日镜检 ,记录细胞中毒情况。
1.3.2　上述实验表明 MCMVO 在 Vero 细胞中最
大无毒浓度为 156 mg/ L ,在此浓度下用 2 %小牛血
清细胞维持液作倍比稀释。另取长成细胞单层的
96 孔培养板 , 弃去生长液 , PBS 洗 1 次 , 接种
100TCID50流感 A3 病毒 , 37 ℃吸附 1 h ,弃去病毒
液 ,加入不同浓度的 MCMVO-细胞维持液 , 37 ℃培
养。每日镜检 , 观察 CPE , 待 100TCID50病毒对照
CPE达+++时(96 h),记录 CPE 抑制情况 。将各
孔细胞反复冻 3 次 ,同组各孔合并 , 5 000 r/min 离
心 15 min ,Vero 细胞中测定病毒效价 。
1.4　体内抑制病毒实验
1.4.1　不同浓度 MCMVO 接种 9 日龄鸡胚 ,每组
4只 ,卵黄囊内接种 0.3 mL ,观察 10 d ,求出 MCM-
VO对鸡胚最大无毒接种量为 500 μg/ g ,作抑制病
毒实验时 ,选择了不同剂量 MCMVO(500 μg/g , 250
μg/g ,50 μg/g)接种卵黄囊 ,孵育 48 h 后接种 0.1
mL 流感 A3 病毒(血凝效价为 1∶160)于羊膜腔中 ,
每组 4 只 ,实验设病毒对照 、药物对照和正常对照
组。病毒对照组只接种流感 A3 病毒 ,不用药;药物
对照组只给 MCMVO(500 μg/g),不接种流感 A3 病
毒。37 ℃孵育 48 h , 4 ℃过夜 ,分别取尿囊液作血凝
试验测定血凝效价。
1.4.2　实验用小鼠购自湖北医科大学动物室 ,雌雄
各半 ,平均体重 20 g/只 ,小鼠随机分组 ,每组 10只。
在感染前 24 h 开始灌胃给药 ,连续 5 d。空白对照
组灌服相同体积的 5 % Tween-20。在乙谜浅度麻
醉下滴鼻感染流感 A3 病毒 15 LD50 。感染后 96 h
解剖取肺称重 ,以肺重除以体重 , 逐个算出肺指数
值 ,与病毒对照组比较 ,进行组间 t测验。
1.5　气相层析-质谱联用对MCMVO成分的鉴定
PYE-204气相色谱仪 , SE-54石英毛细管柱(30
m×0.32 mm),柱温 100 ℃,程序升温 4 ℃/min到
220 ℃。载气为氮气 ,柱前压 78.4 kPa。进样量0.8
μL。质谱仪 VGMM 70-70H ,分辨率 500 ,电离方式
EI ,电子能量 70 EV ,离子源温度 200 ℃。数据处理
机岛津 CHROMATO PACC FIB所得质谱图与标准
收稿日期:2000-12-04
作者简介:严银芳　男 ,硕士 ,副研究员。现从事抗病毒药物研究。
32 微生物学杂志 2002年 1月第 22卷 第 1期　JOURNAL OF MICROBIOLOGY Jan.2002 Vol.22 No.1
质谱图核对 ,确定化合物名称 。以面积归一法进行
数据处理 ,计算各化合物含量 。
2　结　果
2.1　组织培养中对流感病毒的抑制作用
我们将接种 100TCID50流感A3 病毒的 Vero 细
胞分别用 156 , 78.1 , 39.1 , 196 , 9.8 , 4.9 , 2.45 ,
1.23 mg/L ,8 种不同浓度的药物-细胞维持液处理 ,
结果表明 ,MCMVO 在浓度大于 4.7 mg/L 均能有
效抑制 CPE的出现 。见表 1 ,图 1 。
图 1　MCMVO对流感病毒 A3 型在 Vero细胞中复制的抑制作用
A:正常 vero 细胞单层;B:流感 A3 病毒感染 100 TCID50vero 细胞后观察到的CPE;C:MCMVO(1.25 g/ L)对 vero 细胞的毒性作用;D:
MCM VO(78.1 mg/ L)对 100TCID 50流感 A3 病毒感染 vero 细胞 CPE的抑制作用
表1　MCMVO在 Vero 细胞中对流感 A3 病毒的抑
　　　制作用
CPE出现情况 细胞内病毒产量(log TC ID 50)
156.0 - 0
78.1 - 0
39.1 - 0
19.6 - 0
9.8 +- 1.85
4.90 + 4.24
2.45 ++ 5.56
1.23 +++ 5.81
2.2　体内对流感 A3病毒的抑制作用
MCMVO在鸡胚中对流感 A3 病毒血凝效价的
抑制作用(见表 2)。正常小鼠肺指数值在一定范围
内 ,小鼠感染流感 A3 病毒后引发小鼠肺炎 ,肺指数
增加。因而肺炎指数可作为小鼠感染流感 A3 病毒
的指标。实验表明 ,MCMVO在给药剂量为 100 μg/
(g·d)以上时 ,对小鼠肺炎有明显治疗作用(表 3)。
　表 2　MCMVO在鸡胚中抑制流感A3病毒实验
MCMVO/(μg·g -1) 药物对照
病毒 正常 (MCMVO)
500 250 50 对照 对照500/(μg·g -1)
血凝效价 20 40 160 1 280 0 0
表 3　MCMVO 对小鼠流感病毒性肺炎的治疗作用
组别 剂量/μg/(g·d)肺指数值/ x 抑制率/ % P 值
15LD 50病毒对照 1.50
正常对照 0.94
200 1.25 16.7 <0.05
MCMVO 100 1.30 13.3 <0.05
50 1.42 4.0 >0.05
2.3　MCMVO的组成成分
　表 4　MCMVO 15种组成成分和相对含量
峰号 出峰时间 化合物名称 分子式 相对含量/ %
/min
1 9.102 水芹烯 C 10H16 0.1497
2 9.380 α-蒎烯 C 10H16 0.6176
3 9.930 樟烯 C 10H16 0.2256
4 11.492 β-月桂烯 C 10H16 3.2030
5 12.001 α-侧柏烯 C 10H16 0.3033
6 12.510 α-松油烯 C 10H14 2.5659
7 13.053 1-甲基-4-异丙基苯 C 10H14 7.6078
8 13.282 1.8-按树脑 C10H18O 5.6133
9 13.662 反-罗勒烯 C 10H16 0.3572
10 14.300 γ-松油烯 C 10H16 6.5566
11 15.255 α-异松油烯 C 10H16 0.3385
12 24.094 百里香酚 C10H14O 51.6200
13 24.584 香荆芥酚 2-甲基-5-异丙基酚C10H14O 3.9880
14 27.480 反式-丁香烯 C 15H24 1.4197
15 27.480 α-蛇麻烯 C 15H24 4.5360
通过气质-色谱系统初步鉴定了 MCMVO 15 种
主要成分的名称 ,并通过面积归一法数据处理计算
(下转 56页)　　
331期　　　　　　　　　　　　　　　　严银芳等:石香薷挥发油对流感 A3 病毒的抑制作用　　　　　
疗 MRSA带菌患者的过程中引起手指污染 ,具体过
程为:MRSA带菌患者※病房医护人员的手指※洗
手消毒不彻底残留下的细菌※其他患者※病房医护
工作人员 。可以说医务人员起了传播媒介作用。若
切断这一传播途径 ,不仅应实施对 MRSA带菌者进
行隔离 ,也应尽可能地减少洗手后残留细菌数 ,检查
治疗患者前后严格洗手 ,彻底认真消毒是很重要的 。
这在患者不能隔离 ,特别是新入院患者尚未确定是
否为 MRSA带菌者的情况下尤为必要 。依文献报
道 MRSA国际流行型别演变多由Ⅵ 型向Ⅱ型演变 ,
本室[ 3]也曾报道过沈阳地区主要流行Ⅳ型 ,本次研
究监测结果表明 ,沈阳一些大医院也开始有由Ⅳ型
为主向以 Ⅱ型为主过渡的趋势 。血浆凝固酶 Ⅱ型明
显增多 ,其原因可能与 MRSA的耐药机制有关。目
前第二 、三代头孢系列的大量应用必然会导致青霉
素结合蛋白的高效诱导表达 ,结果对 β-内酰胺剂亲
和力下降 ,导致高度耐药菌株的选择 。另外噬菌体
在金葡菌菌株之间进行的耐药基因转移也是其耐药
株增多的原因之一 。第 Ⅲ亚群噬菌体的转移能力很
强 ,并且血浆凝固酶型别与噬菌体型相关连 ,属于噬
菌体Ⅲ亚群的金葡菌其血浆凝固酶为 Ⅱ型 。
4　结　论
沈阳地区城市大医院 MRSA 感染较为严重 ,流
行的主要血浆凝固酶型别为 Ⅱ型和Ⅳ型。继续监测
跟踪 MRSA血浆凝固酶型别演变 ,探讨其演变规律
是控制 MRSA感染蔓延的重要内容 ,这对预防医院
内感染症的发生具有重要的医学意义 。
参　考　文　献
[ 1] 　程玉琳 ,任冰.金黄色葡萄球菌分子生物学分型方法进展[ J] .
国外医学微生物学分册 , 1998 , 21(1):20～ 23.
[ 2] 　フ“ ト” ウ球菌ユㄗク“ ラ-セ”型别用免疫血清[ J] .体外诊断用
医药品(生研), 1991.
[ 3] 　娄金丽 ,白华 ,刘立文.耐甲氧西林葡萄球菌的临床检测[ J] .中
华医学检验杂志 , 1996 , 19(6):361～ 363.
　　(上接 33页)
了各化合物的含量(表 4)。
3　讨　论
香薷为常见中药 ,在历代本草及中国药典中均
有记载 ,常用的香薷品种有海洲香薷 、石香薷 、土香
薷等 。它们的形态 、药用功效和化学成分大同小异 。
国外有研究表明土香薷具有抗病毒作用[ 3] ,并对其
抗病毒有效成分进行了研究。近年来国内对香薷类
挥发油成分进行了研究 ,李章万等报道鉴定了海洲
香薷的 16个组成成分[ 4] , 朱甘培[ 5]自海洲香薷挥
发油分离并鉴定了以香薷酮 、反式-石竹烯 、律草烯 、
芳樟醇等为主的 43 个成分 ,自石香薷的栽培品种
江香薷挥发油中分离并鉴定了以香荆芥酚 、百里香
酚 、1-甲基-4-异丙基苯 、γ-松油烯等为主的 50 个化
学成分 。我们自 MCMVO中分离鉴定了 15个主要
成分 ,但有效抗病毒成分有待进一步研究 。
MCMVO治疗小鼠流感病毒性肺炎的机理可
能有:(1)MCMVO抗流感 A3 病毒活性 。(2)MCM-
VO具有提高机体免疫应答力。(3)MCMVO 具有
广谱抗菌作用 ,治疗小白鼠的继发性感染 。
参　考　文　献
[ 1] 　江苏新医学院.中药大词典[ M] ,上海:上海科学出版社 , 1985 ,
609.
[ 2] 　湖南省衡阳市卫生防疫站等.细叶香薷的抗菌作用及预防流感
初步效果观察[ J] .中草药通讯 , 1973 ,(1):44.
[ 3] 　巢志茂摘译.中国药用植物抗病毒成分筛选中有关人类起源化
合物荧蒽的分离[ J] , 国外医学(中医中药分册), 1996 , 18(2):
41～ 42.
[ 4] 　李章万 ,周同惠.香薷挥发油成分的研究[ J] .药学学报 , 1983 ,
18(5):363～ 368.
[ 5] 　朱甘培.海洲香薷与石香薷栽培品种江香薷挥发油气相色谱-质
谱分析比较[ J] .药学学报 , 1992 , 27(4):287～ 293.
INHIBITION OF Mosla chinensis VOLATILEOIL(MCVO)ON INFLUENZA VIRUS A3
Yan Yinfang et al.
(Virus Inst.Hubei Med.Univ.430071)
Abstract　Volatile oil of Mosla chinensis against influenza virus A3 was examined and evaluated in vivo and in vitro using 9 days
chicken embryo by inhibition against hemagglutination valance and mice by therapy of pneumonia.The results showed that concentra-
tio n of MCVO at 4.9μg/m L could effectively inhibit CPE caused by influenza virus A3 in vero cells.The concentration of MCVO on
9 day chicken embryo at 500μg/ mL , 250μg/m L , and 50μg/mL could reduce the hemagglutination valance from 1∶1 280 to 1∶20 , 1∶
40 , and 1∶160 respectively.When the dosage taken at 100μg/ g/ d to the mice it has obvious treatment against pneumonia.
Keywords　Mosla chinensis , volatile oil , antiviral activity.
56 微　生　物　学　杂　志　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　22卷