全 文 ：表 6 加样回收率试验结果
编号
样品还原糖
含有量 /mg
加入量 /
mg
测得量 /
mg
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
1 1． 1600 0． 759 0 1． 890 7 98． 53
2 1． 160 0 0． 759 0 1． 904 3 99． 23
3 1． 160 0 0． 759 0 1． 935 9 100． 88
4 1． 160 0 1． 012 0 2． 125 9 97． 88
5 1． 160 0 1． 012 0 2． 179 8 100． 36 99． 75 1． 14
6 1． 160 0 1． 012 0 2． 153 3 99． 14
7 1． 160 0 1． 265 0 2． 421 5 99． 86
8 1． 160 0 1． 265 0 2． 456 1 101． 28
9 1． 160 0 1． 265 0 2． 439 2 100． 59
表 7 样品含量测定结果表
样品 还原糖含量 总水溶性糖含量 多糖含量
金钗 2． 80 17． 74 14． 94
鼓槌 2． 25 12． 22 9． 97
流苏 1． 99 17． 15 15． 16
叠鞘 1． 15 11． 25 10． 10
本研究采用 DNS 法既能测定多糖含量，又能测定还原糖含
量，能全面了解不同品种石斛中糖类成分含量。试验中还参照
2010 年版《中国药典》铁皮石斛项下苯酚 －硫酸法对以上样品中
多糖含量进行了测定，测定结果总体趋势与 DNS法相同，但数值
偏高，可能是由于还原糖、蛋白质等的影响所致。表明，不同测定
方法的结果有所差异。
研究中仅对多糖类成分总含量进行了测定，未对石斛中多糖
具体组成进行分析。今后将采用 HPLC、GC － MS 联用等色谱分
离分析方法对多糖组成进行分析。
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收稿日期:2012-11-07; 修订日期:2013-03-20
基金项目:教育部留学回国人员科研启动基金(No． LXHG200803)
作者简介:米娜瓦尔·哈帕尔(1985-) ，女(维吾尔族) ，新疆乌鲁木齐人，现为新疆医科大学基础医学院在读硕士研究生，主要从事心血管药理研究工
作．
* 通讯作者简介:艾尼瓦尔·吾买尔(1962-) ，男(维吾尔族) ，新疆乌鲁木齐人，现任新疆医科大学基础医学院教授，博士研究生导师，博士学位，主要
从事心血管药理研究工作．
维药罗勒有效提取物在体外
对细胞内花生四烯酸代谢途径的影响
米娜瓦尔·哈帕尔1，依巴代提·吐乎提1，阿布力子·阿布杜拉2，
阿尔孜古丽·吐尔逊3，娜迪热·热依木4，艾尼瓦尔·吾买尔1*
(1．新疆医科大学基础医学院，新疆 乌鲁木齐 830011;
2．新疆医科大学基础学院自治区重点实验室，新疆 乌鲁木齐 830011;
3．新疆医科大学第一附医院，新疆 乌鲁木齐 830011;
4．新疆医科大学第二附属医院，新疆 乌鲁木齐 830063)
摘要:目的 通过体外实验，研究维药罗勒(Ocimum basilicum L． OBL)有效提取物对花生四烯酸代谢途径的影响，从而进
一步说明其抗炎作用机制。方法 将用 OBL －乙酸乙酯和 OBL －正丁醇依次对 LPS处理的 RAW264． 7 细胞进行干预，采
用 ELISA法测定并比较上清液中 LTB4 和 PGE2 的浓度，求出其抑制率。结果 OBL －乙酸乙酯和 OBL －正丁醇提取物对
LTB4 和 PGE2 均有不同程度的抑制作用，对 LTB4 的最大抑制率分别为 42． 78%、38． 63%，对 PGE2 的最大有抑制率分别
为 57． 95%、51． 0%;对 LTB4 和 PGE 2 的抑制作用中 OBL －乙酸乙酯的强于 OBL －正丁醇(P ＜ 0． 05) ;相同浓度的药物
对 PGE2 的抑制率大于 LTB4(P ＜ 0． 05)。结论 维药罗勒可能是一种双重抑制药，它通过抑制环氧合酶 － 2 和 5 －酯氧化
酶的活性而发挥抗炎作用。
关键词:维药罗勒; 抗炎; 有效提取物; 5 －酯氧化酶; 环氧化酶 － 2
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2013． 06． 020
中图分类号:R29 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2013)06-1332-03
The effects of polar extracts of Uyghur Ocimum basilicum L． on the Arachidonic acid
metabolic pathway in vitro
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时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 6 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2013 VOL． 24 NO． 6
Minawar happar1，Ibadet Tohti1 Abliz Abudula2，Arzigul Tursun3，Nadira Reyim4，Anwar Umar1
(Department of pharmcology，Xinjiang Medical University，Urumqi 830011，China;2． Department of Biochemis-
try，Xinjiang Medical University，Urumqi 830011，China;3． Cellular Bio． Lab of the First Affiliated Hospital，
Xinjiang MedicalUniversity，Urumqi 830011，China;4． The Second Affiliated Hospital，Xinjiang Medical Universi-
ty，Urumqi 830063，China)
Abstract:Objective In vitro experiments to study the polar extracts of Uyghur Ocimum basilicum L． on arachidonic acid meta-
bolic pathway，thus further its anti － inflammatory mechanism．Methods The LPS － induced RAW264． 7 cells were interfered with
OBL － ethyl acetate and OBL － butanol，the concentration of LTB4 and PGE2 in the supernatant was measured by ELISA and cal-
culated the inhibition rate． Results The concentration of LTB4 and PGE2 were inhibited by OBL － ethyl acetate and OBL － buta-
nol extract in varying degrees，the maximal inhibition ratio on LTB4 were 42． 78%、38． 63%，the maximal inhibition ratio on
PGE2 were 57． 95%、51． 0% respectively;the inhibition rates of ethyl acetate part was stronger than the OBL － butanol (P ＜ 0．
05) ;the inhibition rates on PGE2 was higher than LTB4 in (P ＜ 0． 05 )at the same dose． Conclusion OBL may be a dual inhibi-
tor，which play an anti － inflammatory effects by inhibiting the activity of the enzyme cyclooxygenase － 2 and 5 － ester oxidation．
Key words:Ocimum basilicum L; Anti － inflammatory; Effectively extract; 5 － ester oxidase; Cyclooxygenase － 2
炎症是机体所发生的一个很重要的基本病理过程，人类许多
疾病的发生与炎症有着不可分割的关系，炎症伴随着多种疾病，
它涉及自身免疫性疾病，糖尿病，心血管疾病，动脉粥样硬化，感
染，过敏反应等多种疾病［1］。炎症反应严重时它将危及患者的
生命。要有效地抑制以上与炎症相关的疾病，就得从抑制炎症这
一点入手。对炎症机制的不断研究探索，许多研究资料指出花生
四烯酸及其代谢产物在炎症中起着重要的作用［2 ～ 4］。
花生四烯酸(Arachidonic acid，AA)是哺乳动物的必需脂肪
酸，其代谢途径主要有两条［5］:①环氧化酶(Cyclooxygenase，
COX)途径，经过 COX的作用，游离的 AA 生成前列腺素(PGs)、
前列环素(PGI2)和血栓素(TXs)等;②脂氧酶(Lipoxygenase，
LOX)途径，受 LOX 作用游离的 AA 生成白三烯(LTs)、脂氧素
(LXs)和羟基二十四碳四烯酸等。其中代谢产物前列腺素类和
白三烯类是介导炎症反应的炎症介质。研究表明，COX 途径和
LOX途径之间存在着一定的平衡制约关系。若阻挡 COX 途径，
则大量的 AA 进入 LOX 途径，会有更多的 LTs生成，从而诱发变
态反应、呼吸衰竭和支气管痉挛等;反之，当 LOX 途径被阻断时，
PGs 合成就会增加，最终也会导致炎症并使其进一步发展。因而
更有效地抑制炎症的发生和发展，减少毒副作用，同时对花生四
烯酸的两条代谢途径进行抑制将会是抗炎药研究的一个亮
点［6，7］。
罗勒(Ocimum basilicum L． OBL)是维吾尔医应用历史悠久
的常用药材之一，在新疆各地批量栽培，药源丰富，是一味很有开
发前途的维吾尔医药材。在临床应用上，维吾尔医针对罗勒有调
节异常黑胆质、补心、调血、开窍、利尿通经、消肿、退热、调节情绪
等作用。罗勒主含挥发油类、黄酮及其苷类、香豆素类，此外还含
有三萜类和生物碱类等成分［8］。本课题组之前通过建立慢性炎
症和急性炎症的动物模型，研究发现罗勒乙酸乙酯提取物具有抗
炎作用［9］。本课题将采用以证明为抗血栓有效部位的乙酸乙酯
提取物和正丁醇提取物，以不同浓度干预经脂多糖 LPS 刺激后
的小鼠腹腔巨噬细胞 RAW264． 7 并测定上清液中 PGE2 和 LTB4
的含量，进一步研究维药罗勒的抗炎作用机制。
1 材料
小鼠腹腔巨噬细胞(RAW264． 7)购于中科院上海细胞库(中
国典型培养物保藏中心 CCTCC) ，罗勒，2010 年 9 月份采自新疆
吐鲁番市托克逊县种植基地，品种由新疆医科大学药学院天药 /
生药学教研室帕丽达·阿不力孜教授鉴定。倒置荧光显微镜
(OLYMPUS，日本) ，高速多功能冷冻离心机(BR4i 型，法国) ，生
物安全柜(Haier，中国) ，CO2培养箱(Thermo，美国) ，全波长酶标
仪(Benchmark PLUS) ，DMEM干粉培养基(GIBCO公司) ;胎牛血
清 FBS(GIBCO公司) ;吲哚美辛(Sigma 公司，I8280 － 5G) ;脂多
糖 LPS(Sigma公司，L2880) ;PEG2 ELISA 试剂盒(GBD 公司，批
号:BA3248) ，花生四烯酸 AA(Sigma 公司，A3555 － 10MG) ;胰蛋
白酶;PBS缓冲液;LTB4 ELISA 试剂盒(武汉中美科技有限公
司，批号:BA2043) ;NDGA(Sigma公司)。
2 方法
2． 1 罗勒的提取与分离 将剪碎阴干后的罗勒地上部分，称取适
量，室温条件下用 75%乙醇密闭浸泡 24 h后超声提取，采用旋转
蒸发仪减压浓缩回收乙醇得到乙醇提取物，再用适量水分散提取
物后，依次用乙酸乙酯，正丁醇萃取，萃取后得到的 OBL －乙酸乙
酯，OBL －正丁醇提取物挥干溶剂，冷冻干燥。实验时用适量的
二甲基亚砜(DMSO)溶解干燥物后，用 DMEM培养基稀释成所需
的浓度，在以 0． 22 μm滤器过滤，备用。
2． 2 细胞培养 复苏后的小鼠腹腔巨噬细胞株 RAW264． 7 转入
细胞培养瓶中，加入含有 10%胎牛血清、青霉素 100 μg /ml、链霉
素 100 μg /ml 的 DMEM 高糖培养基，37℃，5% CO2 培养箱中培
养，约 3 ～ 5 d细胞铺满 80%瓶底后，用 0． 25%胰蛋白酶消化约 3
～ 5 min后传代。根据需要部分细胞继续传代培养，部分收集计
数后冻存备用。
2． 3 细胞给药浓度的的选择 考虑到避免测定指标值过小和保
证实验条件的一致性，在此试验当中，选择罗勒有效提取物的给
药浓度时，采用 MTT试验中细胞存活率为 90%左右的药物浓度。
即 OBL －乙酸乙酯和 OBL －正丁醇提取物最大给药浓度为 100
μg /ml。再设五个浓度梯度(梯度为 2 倍) ，配置时以 DMEM培养
基稀释。
2． 4 实验分组 空白组:正常生长的 RAW264． 7 细胞。模型组:
正常生长的 RAW264． 7 细胞以终质量浓度 1 mg /L LPS 刺激致
炎。阳性对照组:吲哚美辛(COX 抑制药，终浓度为 10 －7 mol /
L) ，NDGA(5 － LOX抑制药，终浓度 100 μmol /L)。实验组:分为
3 组，罗勒有效提取物给药浓度分别为 25，50，100 μg /ml。
2． 5 细胞炎症因子含量检测 将指数生长期的 RAW264． 7 细胞
以 1 × 105个 /ml的密度接种于 96 孔培养板中，每孔 200 μl，设空
白组，模型组，阳性对照组和给药组，每组 4 个复孔，放置 37 ℃，
5%CO2 培养箱中培养 24 h。次日更换旧培养基，除空白组以外
的其它孔均加入终质量浓度 1 mg /L 的 LPS 进行干预，继续在
37 ℃，5%CO2 培养箱中培养。12 h后阳性对照组和给药组分别
加入配置好的药物溶液，空白组和模型组加入终体积分数为
0． 5%的 DMSO，放置孵箱继续孵育。24 h 后每个组加入终浓度
为 10 μmol /L的底物 AA，37℃孵育 30 min，收集细胞上清液，－
20℃冻存待测。用 ELISA法(按照试剂盒说明严格进行操作)分
别测定细胞上清液中 PGE2 和 LTB4 的浓度，并计算抑制率。
抑制率(%)=(模型组 OD 值 －给药组 OD 值)/模型组 OD
值 × 100%
2． 6 统计学处理 数据用 SPSS16． 0 统计软件对实验数据进行处
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2013 VOL． 24 NO． 6 时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 6 期
理，结果以 珋x ± s表示，多组数据进行方差齐性检验之后，采用单
因素方差分析，检验水准 α = 0． 05。
3 结果
3． 1 罗勒有效提取物在体外对 COX － 2 酶活性的影响 由表 1
得出，模型组与空白组比较，差异具有统计学意义(P ＜ 0． 01) ，证
明细胞模型建造成功。各个药组与模型组相比，差异具有统计学
意义(P ＜ 0． 01) ，可以判断 OBL －乙酸乙酯提取物和 OBL －正丁
醇提取物对 PGE2 均有抑制作用，OBL －乙酸乙酯提取物的抑制
作用大于 OBL －正丁醇提取物。高浓度的罗勒提取物对 PGE2
的抑制作用强于市场上的 COX抑制药吲哚美辛。对 PGE2 的抑
制作用随着给药浓度的提高逐渐增大，存在着一定的量效关系，
该结果表明罗勒有效提取物可以抑制 COX － 2 酶的活性。
表 1 罗勒不同提取物对 COX －2 酶活性的影响(珋x ± s)
组别
加药浓度 /
μg·ml －1
PGE2 浓度 /
ng·ml －1
抑制率
(%)
空白组 － 23． 76 ± 0． 43 －
模型组 1 38． 41 ± 0． 84## －
吲哚美辛组 10 －7mol·L －1 24． 83 ± 0． 43＊＊ 35． 36
OBL －乙酸乙酯 100 16． 15 ± 1． 02＊＊ 57． 95
50 17． 74 ± 0． 84＊＊ 53． 81
25 23． 36 ± 0． 73＊＊ 39． 18
OBL －正丁醇 100 18． 82 ± 0． 88＊＊ 51． 0
50 22． 36 ± 0． 73＊＊ 41． 79
25 25． 07 ± 0． 43＊＊ 34． 73
与空白组比较，##P ＜ 0． 01;与模型组相比，* P ＜ 0． 05，＊＊ P ＜ 0． 01;
n = 3
3． 2 罗勒有效提取物在体外对 LOX － 5 酶活性的影响 由表 2
得出，模型组与空白组比较，差异具有统计学意义(P ＜ 0． 01) ，证
明细胞模型建造成功。各个药组与模型组相比，差异具有统计学
意义(P ＜ 0． 01) ，可以判断 OBL －乙酸乙酯提取物和 OBL －正丁
醇提取物对 LTB4 均有抑制作用，OBL －乙酸乙酯提取物的抑制
作用大于 OBL －正丁醇提取物。对 LTB4 的抑制作用随着给药
浓度的提高逐渐增大，存在着一定的量效关系。可见，维药罗勒
以上有效提取物对 5 － LOX酶的活性有抑制作用。
表 2 不同提取物对 5 － LOX酶活性的影响(珋x ± s)
组别
加药浓度 /
μg·ml －1
LTB4 浓度 /
ng·L －1
抑制率
(%)
空白 － 121． 69 ± 5． 48 －
模型 1 293． 45 ± 7． 41## －
NDGA 100μmol·L －1 133． 24 ± 4． 46＊＊ 54． 59
OBL －乙酸乙酯 100 167． 91 ± 23． 99＊＊ 42． 78
50 174． 04 ± 16． 91＊＊ 40． 69
25 186． 83 ± 3． 38＊＊ 36． 33
OBL －正丁醇 100 180． 08 ± 15． 25＊＊ 38． 63
50 181． 89 ± 13． 46＊＊ 38． 02
25 215． 71 ± 30． 32＊＊ 26． 49
与空白组比较，#P ＜ 0． 05;与模型组比较，* P ＜ 0． 05，＊＊ P ＜ 0． 01;
n = 3
4 讨论
COX 与 5 － LOX 是花生四烯酸系统中的主要代谢酶，机体
受到外源性物质的刺激后会释放出花生四烯酸，它会经 COX 和
5 － LOX两条途径生成一系列代谢产物，这些代谢产物都具有广
泛的生理、病理活性，均与炎症的发生和发展有密切的联系。依
此来看，能同时抑制多个酶或介质的化合物比作用于单一活性酶
或介质的化合物可能会对炎症更有影响［10］。研究表明，AA 的两
种代谢途径即 COX 途径和 LOX 途径之间存在着一定的平衡制
约关系［11，12］。因而，为更有效地抑制炎症，只有同时抑制 AA 的
两种代谢途径才能减少毒副作用，更好的抑制炎症介质的生成。
传统的 NSAIDs和最近的 COX － 2 选择性抑制剂都只是抑制
COX，在一般剂量下不能抑制 5 － LOX 的活性［13］。现代实验已
经证明，同时对 COX和 5 － LOX具有抑制作用的双重抑制剂，与
单纯 COX抑制剂相比，具有疗效高、副作用小的特点。由于两者
在体内具有的平衡制约关系，因此对该系统进行定量评价对于抗
炎中药的研发更具有一定的指导意义。本试验考虑到不同测定
方法对实验结果带来一定的误差影响，因此采用了相同的测定原
理，以 ELISA，即酶联免疫吸附法为测定炎症因子含量的方法评
价了罗勒提取物对花生四烯酸途径的影响，为药物在花生四烯酸
体中综合评价的准确性提供了保障。
虽然 OBL －乙酸乙酯提取物和 OBL －正丁醇提取物对花生
四烯酸作用强弱有所不同，但对 COX － 2 和 5 － LOX均有抑制作
用，该作用受到药物剂量的影响，同样浓度的药物对 COX － 2 的
抑制率大于对 5 － LOX的抑制率。这可能由药物对 COX － 2 和 5
－ LOX的选择性有差异所致，但究竟什么原因导致其对 COX － 2
更具选择性，原因待进一步研究。总之，本实验研究证明罗勒提
取物在体外对 COX － 2 和 5 － LOX都有不同程度的抑制作用，从
底物的角度证明，罗勒发挥抗炎作用的机制可能与其同时抑制
COX － 2 和 5 － LOX有关。
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