全 文 ：高效液相色谱法测定肋柱花中獐牙菜苦苷的含量
王秀梅 ,巴根那 ,白明纲
(内蒙古民族大学蒙医药学院 ,内蒙古 通辽　028041)
摘　要:目的:建立高效液相色谱法测定肋柱花中獐牙菜苦苷含量的方法.方法:采用高效液相色谱法.色谱柱
为 Diamonsil C18(250 mm×4.6mm , 5 μm);流动相为甲醇-水(25∶75);流速为 1.0 ml/ min;检测波长为 237
nm;柱温为 50℃.结果:獐牙菜苦苷对照品进样量在 0.313 mg～ 1.875mg 范围内与峰面积具有良好的线性关
系 , r=0.999 99;平均回收率为 99.50%、CV(%)=0.92(n =6).结论:该方法简便 、快捷 、准确 、重复性好 , 可
用于肋柱花中獐牙菜苦苷的含量测定.
关键词:蒙药;肋柱花;獐牙菜苦苷;高效液相色谱法
中图分类号:R927.2　　文献标识码:A　　文章编号:1671-0185(2007)03-0320-03
Determination of Swertiamain Content in Herba Lomatogonii by HPLC
WANG Xiu-Mei ,Bagenna ,BAI M ing-gang
(College of Mongolian Medicine and Pharmacy , Inner Mongolia
University for Nationalities , Tongliao 028041 , China)
Abstract:Objective:To establish a method fo r the determination of Swertiamains content in
Mongolian medicine Lomatogonium rotatum (L.)Fries by HPLC.Methods:Determining the
Sw ertiamain content in Mongolian medicine Lomatonium rotatum (L.)Fries by HPLC on the
chromatog raphic column of Diamonsil C18 (250mn×4.6mn , 5μm)and w ith Methyl-Water
(25:75 v/v)as a mobile phase and the flow rate of 1.0 ml·min-1.The detective w aveleng th w as
237nm , and the temperature of the column was 50℃.Results:The obvious linear relat ionship
was show ed between the input mass of Swertiamain as reference substance ranging f rom 0.313mg
to 1.875mg and the peak area , r=0.999 99.The average recovery is 99.50%,CV(%)=0.92(n
=6).Conclusion:The method is simple , rapid , accurate and possesses good reproducibility.It
can be used for determining the content of Swertiamain in M ongolian medicine Herba Lomatogo-
nii.
Key words:Mongolian medicine;Herba Lomatogonii;Swertiamain;HPLC
肋柱花是蒙医常用药材 ,蒙古名音译为哈比日根-地格达 ,亦称特木尔-地格达 , 来源于龙胆科肋柱花属植物肋柱花
〔Lomatogonium rotatum (L.)F ries ex Nym.〕的干燥全草.具有平息“协日” ,清热 , 健胃 ,愈伤功能;用于“协日”热 ,瘟疫 ,流
感 ,伤寒 ,中暑头痛 ,肝胆热 , 黄疸 ,胃协日 , 伤热等病症〔1〕.是蒙医治疗肝胆疾病的主要传统药物 , 临床疗效显著 , 收载于《中
华人民共和国卫生部药品标准·蒙药分册》(1998年版).在本品的部颁标准鉴别项下记有其粉末显微鉴别和黄酮类成分颜
色反应的定性分析方法 ,但尚无含量测定项目.研究结果表明 , 肋柱花药材中所含黄酮类化合物主要有木犀草素及其荭草
素 、异荭草素等多种木犀草素的 C-苷 , 异牡荆素 、芒果苷等口山酮类成分以及獐牙菜苦苷等环烯醚萜类成分.它们具有不同
收稿日期:2006-01-12
作者简介:王秀梅(1980-),女(蒙古族),内蒙古乌兰浩特人 ,在读研究生 ,研究方向为蒙药质量标准研究.
第 22 卷　第 3 期 内蒙古民族大学学报(自然科学版) Vol.22　No.3
2007年 6 月 Journal of Inner Mongolia University for Nationalities Jun.2007
DOI :10.14045/j.cnki.15-1220.2007.03.022
程度的利胆 、保肝生物活性〔2 , 3〕.所以 , 为了进一步完善和提高肋柱花的药品标准 , 有效地定量控制和保证药品质量 , 我们
参照有关文献〔4〕 , 研究建立了采用高效液相色谱法对肋柱花中的特征成分獐牙菜苦苷进行含量测定的方法.
1　仪器与试药
Shimadzu LC-vp 高效液相色谱仪 ,配置 LC-10ATvp 输液泵 、SPD-M10Avp 检测器 、SCL-10Avp 色谱工作站(日本
岛津);UP-2501PC 分光光度计(日本岛津);BS2103 型电子分析天平(北京塞多利斯天平有限公司);KQ-100 型超声波清
洗器(昆山市超声波仪器有限公司).
獐牙菜苦苷对照品 ,由中国药品生物制品检定所提供 ,批号为 0785-200203(供含量测定用);甲醇为色谱醇;所用水为
重蒸馏纯净水 ,其余试剂均为分析纯.
肋柱花 ,由内蒙古锡林郭勒盟蒙医研究所提供 , 经内蒙古民族大学蒙医药学院布和巴特尔教授鉴定为龙胆科植物肋柱
花〔Lomatogonium rotatum (L.)F ries ex Nym.〕的干燥全草.
2　方法与结果
2.1　色谱条件与系统实用性试验　色谱柱:Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm , 5μm);流动相:甲醇-水(25∶75);流速:
1.0ml/min;柱温:50℃;检测波长:237 nm.在此条件下 ,色谱柱理论板数(n)按獐牙菜苦苷计算应不底于 1 500 ,獐牙菜苦苷
色谱峰的拖尾因子(T)为 1.0(见图 1).
图 1　獐牙菜苦苷对照品(A)和肋柱花样品(B)的高效液相色谱图
Figure1　 HPLC chromatograms of Swertiamain as reference substance(A)and Herba Lomatogonii sample(B)
2.2　对照品储备液的制备　精密称取獐牙菜苦苷 5 mg , 置10 ml量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻度 , 摇匀 ,取 1 ml加 3 ml
甲醇即得(每 1 ml中含獐牙菜苦苷 0.125 mg).
2.3　供试品溶液的制备　取肋柱花药材粉末(过三号筛)约 1.00 g ,精密称定 , 置 50 ml锥形瓶中 ,精密加入甲醇溶液 25
ml ,密塞 ,称定重量 ,超声 50 min ,放冷 , 再称定重量 , 用甲醇溶液补足减失的重量 , 摇匀 , 滤过 , 精密量取续滤液 1 ml , 置 25
ml量瓶中 ,加甲醇至刻度 ,摇匀 , 即得.
2.4　线性关系及其工作范围的考察　精密吸取对照品储备溶液 2.5 μl、5.0 μl 、7.5μl 、10.0 μl 、12.5 μl、15.0 μl , 注入液相
色谱仪 ,记录色谱图 , 测定其峰面积(A).并以峰面积(Y)对獐牙菜苦苷的进样量(X)进行线性回归 , 得回归方程:
Y =9943898 X -11915 , r=0.999 99
结果表明 ,獐牙菜苦苷对照品进样量在 0.313 mg～ 1.875 mg 范围内 ,与峰面积具有良好的线性关系 ,相关性显著.
表 1　不同浓度獐牙菜苦苷对照品的测定结果
Table 1　The detective results of Swertiamain of the different concentrations as reference substance
C(mg /ml) 0.313 0.625 0.938 1.250 1.563 1.875
A(峰面积) 300 709 609 243 916 991 1 231 243 1 543 443 1 848 315
2.5　精密度试验　精密吸取同一份供试品溶液 10 μl , 在上述色谱条件下依法重复进样 5 次 , 记录色谱图 , 测定其峰面积.
结果 CV%=0.16 ,表明精密度良好.
2.6　稳定性试验　同一份供试品溶液 , 分别于 0 h 、4 h 、8 h、12 h 、16 h ,精密吸取 10 μl , 注入液相色谱仪 , 记录色谱图 ,测定
其峰面积.结果 CV%=0.63 , 表明供试品溶液在 16 h 内测定稳定性良好.
2.7　重复性试验　称取同一批样品约 1.00 g ,共 5 份 ,精密称定 ,照上述 2.3 项下方法制得供试品溶液 5 份 ,按含量测定
方法 ,分别精密吸取 10 μl , 注入液相色谱仪, 记录色谱图 ,测定其峰面积 ,并计算含量.结果 ,平均含量为 7.69%, CV%=0.97.
表明 , 该含量测定方法具有良好的重复性.
321第 3期 王秀梅等:高效液相色谱法测定肋柱花中獐牙菜苦苷的含量
2.8　回收率试验　取已知含量的肋柱花药材粉末(过三号筛), 约 0.10 g , 精密称定 ,分别加入一定量的獐牙菜苦苷对照
品 ,照上述 2.3 项下方法制得供试品溶液 , 在规定色谱条件下按含量测定方法进行测定 , 并按下列公式计算回收率结果见
表 2.獐牙菜苦苷平均回收率为 99.50%, CV%=0.92.
回收率(%)=测得量(mg)-样品中含量(mg)加入对照品量(mg) ×100%
表 2　回收率试验结果
Table 2　Results of rate of recovery
编 号 取 样 量(g)
样品中含量
(mg)
对照品加入量
(mg)
测 得 量
(mg)
回 收 率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
1 0.101 6 7.70 8.2 15.89 99.83
2 0.101 6 7.70 8.2 15.85 99.32
3 0.100 4 7.61 8.3 15.94 100.40
4 0.100 4 7.61 8.3 15.95 100.52 99.50 0.92
5 0.100 8 7.64 8.4 15.93 98.63
6 0.100 8 7.64 8.4 15.90 98.31
2.9 　样品测定　照高效液相色谱法(《中国药典》 2005 年版一部附录 VI D)测定.精密吸取对照品溶液(每 1 ml中含獐牙
菜苦苷 0.125 mg)与供试品溶液各 10μl ,注入液相色谱仪 ,记录色谱图 , 测定其峰面积值 , 并计算獐牙菜苦苷含量.结果见
表 3.
表 3　肋柱花中獐牙菜苦苷的含量
Table 3　Swertiamain content in Herba Lomatogonii
编　号 獐牙菜苦苷含量(%) Ave(%) S(%) CV(%)
1 7.563
2 7.595
3 7.690 7.639 0.064 0.84
4 7.717
5 7.631
3 　讨论
3.1　检测波长的选择　采用 SPD-M10Avp检测器 , 取獐牙菜苦苷对照品溶液在 190 ～ 400 nm 的波长范围内进行光谱扫
描.根据獐牙菜苦苷的紫外吸收 , 选择了 237 nm 作为检测波长.
3.2　流动相的选择　实验中比较研究了肋柱花的流动相甲醇-0.3%甲酸(25:75 v/ v)和甲醇-水(25:75 v/v)的效果.
结果 ,前者溶剂干扰大 , 故选用了后者.
3.3　提取时间的确定　考察不同提取时间对供试品溶液含量的影响.结果 , 提取时间为 20 min、30 min 、40 min、50 min 、60
min 的供试品溶液含量比较 ,确定采用了 50min的提取时间.
3.4　小结　该方法简便 、快捷 、准确 、重复性好 ,可用于肋柱花中獐牙菜苦苷的含量测定.同时 ,该试验为《中华人民共和国
卫生部药品标准》肋柱花的质量标准的进一步完善提高奠定了基础.
参　考　文　献
〔1〕 中华人民共和国卫生部.中华人民共和国卫生部药品标准(蒙药分册)〔S〕.1998.15.
〔2〕吴柒柱 , 包巴特尔 ,白海花.蒙药肋柱花的研究进展〔J〕.时珍国医国药 , 2004 , 15(6):366-367.
〔3〕国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草〔M〕.上海:上海科学技术出版社 , 1998.252.
〔4〕国家药典委员会.中华人民共和国药典〔S〕.一部.北京:化学工业出版社 , 2005.185 , 451.
〔责任编辑　德·呼格吉乐图〕
322 内　蒙　古　民　族　大　学　学　报 2007年