全 文 ：4 讨论
4． 1 最大吸收波长的考察 取乌头碱、新乌头碱、
次乌头碱对照品溶液，在 200 ～ 400 nm 期间进行扫
描，结果 3 种溶液均在 235 nm 处有吸收峰，故选用
235 nm作为检测波长［8-9］。
4． 2 提取方法的考察 根据附子的性质，采用氨水
浸润，乙醚超声法进行提取。考察了影响提取的主
要因素包括氨水用量、乙醚用量、超声时间，并以乌
头碱、次乌头碱、新乌头碱总量为指标，采用 L9(3
4)
正交试验优选最佳提取工艺，即加 10%氨水 2 mL，
浸润，再精密加入乙醚 50 mL，超声提取 30
min［10-12］。
4． 3 由上述测定结果可知:四川江油产生附子的次
乌头碱、新乌头碱量远高于陕西产生附子，而乌头碱
量却明显低于陕西生附子。附子的几种炮制品中，
盐附子的 3 种双酯型生物碱基本检测不到，黑顺片、
熟附片(鲜片蒸)、熟附片(干片蒸)仅能检测到少量
的次乌头碱，而炮附片除次乌头碱外仍能检测到较
高量的新乌头碱，说明经过炮制后，盐附子的毒性已
经大大降低，黑顺片、熟附片(鲜片蒸)、熟附片(干
片蒸)中仅有微量的毒性成分，而炮附片中主要毒
性成分的含量仍较高。附子皮中的双酯型生物碱量
较生附子有所降低但明显高于炮制品。
4． 4 本实验从化学的角度阐释了附子炮制减毒的
科学依据。通过比较生附子及其炮制品中 3 种主要
类型生物碱相对量的变化规律，结果表明附子炮制
品中乌头碱几乎全部破坏，而新乌头碱和次乌头碱
的量大大降低，从而达到减毒的目的。
参考文献:
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HPLC法测定不同产地傣药肾茶中的迷迭香酸
张丽丽， 敬应春， 彭崇胜， 吴红兵， 邱明丰*
(上海交通大学药学院，上海 200240)
收稿日期:2011-11-16
基金项目:云南省科技厅项目(2008IF018，2009BC014) ;上海市科委项目(08DZ1971303)
作者简介:张丽丽(1985—) ，女，硕士生，从事中药新制剂研究，Tel:(021)34205051，E-mail:susan． lilizh1224@ 163． com
* 通信作者:邱明丰(1970—) ，男，副教授，从事中药新制剂与新剂型研究。Tel:(021)34204052，E-mail:mfqiu@ sjtu． edu． cn
摘要:目的 建立傣药肾茶中迷迭香酸的测定方法，并测定不同产地肾茶中的迷迭香酸。方法 采用高效液相色谱法，
色谱柱 Agilent TC-C18(2) (250 mm ×4． 6 mm，5 μm) ;流动相为乙腈-0． 1%磷酸(25 ∶ 75) ;体积流量 1． 0 mL /min;柱温 25
℃;检测波长 210 nm，图谱采集时间为 20 min。结果 迷迭香酸在 0． 16 ～ 1． 6 μg(r = 1)范围内呈良好线性关系，平均回
收率为 97． 49%，RSD = 1． 15%(n = 9)。结论 该法简便、准确可行，可用于傣药肾茶中迷迭香酸的测定及肾茶的质量控
制。
关键词:傣药;肾茶;迷迭香酸;高效液相色谱法
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中图分类号:R284． 1 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2011)08-1378-04
Determination of rosmarinic acid in Dai Medicine-Orthosiphonari Status(Shen-
cha)from different habitats by HPLC
ZHANG Li-li， JING Ying-chun， PENG Chong-sheng， WU Hong-bing， QIU Ming-feng*
(School of Pharmacy，Shanghai Jiao Tong University，Shanghai，200240)
KEY WORDS:Dai Medicine;Orthosiphonari Status(Shencha) ;rosmarinic acid;HPLC
傣药肾茶(西双版纳傣医称“芽糯妙”，意译为
“猫 须 草”)来 源 于 Clerodendranthus spicatus
(Thunb．)C． Y． Wu 的全草，傣医应用历史长达
2000 多年，傣医认为其清香，苦，凉。入土、水塔，具
有清热解毒、利水通淋之功效，用于膀胱湿热所致的
尿急、尿热、尿痛，非特异性下尿路感染见上述症候
者［1-2］。肾茶中主要含有迷迭香酸、熊果酸、黄酮类
及氨基酸等多种成分［3］。其中迷迭香酸药理活性
主要包括抗炎、抗氧化、免疫抑制等，是肾茶主要有
效成分之一［4-5］，测定方法主要有分光光度法［6］和
高效液相色谱法［7］。目前肾茶饮片［8］和肾茶袋泡
茶均无迷迭香酸的测定项目。本实验建立了测定不
同产地肾茶中迷迭香酸的高效液相色谱法，为科学
控制肾茶质量提供科学依据，为肾茶制剂质量控制
提供参考。
1 仪器与试药
Agient 1200 型液相色谱仪，G1322A JP7306-
7557 在线真空脱气机，G1311A DE62968658 四元
泵，G1329A DE64770852 自 动 进 样 器，G1316A
DE63070860 柱温箱，G1315D DE64259927 DAD 检
测器，ChemStation B． 03． 01 色谱工作站(安捷伦科
技有限公司) ;KQ-250DB 型数控超声波清洗器(昆
山市超声仪器有限公司) ;AL204 Mettler Toledo电子
天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)。
迷迭香酸对照品(批号:100415，上海融禾医药
科技发展有限公司，纯度大于 98%) ;20 个肾茶样品
经中国医学科学院药用植物研究所云南分所李学兰
研究员鉴定为肾茶 Orthosiphonari Status 全草，样品
编号及来源见表 1。乙腈为色谱纯，水为双蒸水，其
他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件 Agilent TC-C18(2) (250 mm × 4． 6
mm，5 μm) ;流动相:乙腈-0． 1%磷酸(25 ∶ 75) ;体
积流量:1． 0 mL /min;柱温:25 ℃;检测波长:210
nm，图谱采集时间为 20 min。
表 1 样品编号及来源
Tab． 1 Number and origins of the samples
样品编号 来源
1 云南
2 云南
3 云南
4 海南
5 云南
6 广西
7 广西
8 广东
9 福建
10 浙江
样品编号 来源
11 云南
12 云南
13 广东
14 云南
15 老挝
16 云南
17 云南
18 福建
19 福建
20 福建
2． 2 对照品溶液的制备 取迷迭香酸对照品约 4
mg，精密称定，置 25 mL 量瓶中加 50%甲醇溶解定
容，得 0． 16 mg /mL的对照品溶液。
2． 3 供试品溶液的制备 取 1 ～ 20 号肾茶粉末(过
4 号筛)各约 0． 36 g，精密称定，置 50 mL量瓶中，加
50%甲醇超声提取 30 min，冷却，定容，摇匀，有机相
微孔滤膜(0． 45 μm)滤过，备用。
2． 4 系统适应性试验 分别将迷迭香酸对照品及
供试品溶液 10 μL进样高效液相色谱仪，理论塔板
数以迷迭香酸峰计算不低于 20 000，迷迭香酸峰与
周围峰分离度好。对照品及供试品色谱图见图 1。
2． 5 线性范围考察 分别精密吸取迷迭香酸对照
品溶液 1、2、4、6、8、10 μL进样，采集色谱图，测定峰
面积，以峰面积为纵坐标(Y) ，以对照品的量(μg)
为横坐标(X) ，进行回归处理，得回归方程:Y =
2 447X － 9． 474，r = 1． 000。迷迭香酸在 0． 16 ～ 1． 6
μg范围内呈良好线性关系。
2． 6 精密度试验 精密吸取对照品溶液，相同色谱
条件下重复进样 6 次，进样量 4 μL，结果显示峰面
积 RSD为 0． 43%。
2． 7 稳定性试验 取 20 号样品制备供试品溶液，
分别在0、2、4、8、12 h精密吸取进样，采集图谱，测
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图 1 迷迭香酸对照品(A)与肾茶供试液(B)色谱
Fig． 1 HPLC trace of rosmarinic acid (A)and Ortho-
siphonari Status (B)
定迷迭香酸峰面积，其 RSD 为 1． 95%，表明样品中
迷迭香酸在 12 h内稳定。
2． 8 重复性试验 取 20 号样品按 2． 3 项下制备方
法，分别制备 6 份供试液，同一方法采集图谱，测定
迷迭香酸峰面积，并计算其质量分数，其 RSD 为
0． 36%。
2． 9 回收率试验 取肾茶粉末(20 号)9 份，每份
约 0． 18 g，精密称定，分别置 50 mL 量瓶中，按样品
中成分含有量的 80%、100%、120%，分别精密加入
迷迭香酸对照品溶液(0． 16 mg /mL) ，再加 50%甲
醇超声提取 30 min，冷却，定容，摇匀，0． 45 μm微孔
滤膜滤过，进样 10 μL，采集图谱，根据迷迭香酸峰
面积计算(mg) ，并计算回收率(%) ，结果见表 2。
2． 10 样品测定 将收集的肾茶按 2． 3 项下方法制
成供试品溶液，同样色谱条件下进样(n = 3) ，采集
图谱，测定结果见表 3。不同产地肾茶中迷迭香酸
比较见表 4。
表 2 迷迭香酸的回收率试验结果
Tab． 2 Recovery of rosmarinic acid
编号
称样量
/ g
原有量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均值
/%
RSD
/%
1 0． 173 8 1． 616 3 1． 339 2 2． 924 5 97． 68
2 0． 167 6 1． 558 7 1． 339 2 2． 842 5 95． 86
3 0． 170 2 1． 582 9 1． 339 2 2． 907 0 98． 88
4 0． 164 1 1． 526 1 1． 674 0 3． 133 5 96． 02
5 0． 189 6 1． 763 3 1． 674 0 3． 408 5 98． 28 97． 49 1． 15
6 0． 189 3 1． 760 5 1． 674 0 3． 407 0 98． 36
7 0． 187 9 1． 747 5 2． 008 8 3． 680 5 96． 23
8 0． 175 8 1． 634 9 2． 008 8 3． 590 0 97． 32
9 0． 179 8 1． 672 1 2． 008 8 3． 655 5 98． 73
表 3 肾茶中迷迭香酸的测定结果
Tab． 3 Content of rosmarinic acid
样品
编号
质量分数%
/(g /g)
RSD
/%
1 1． 40 0． 44
2 1． 34 0． 29
3 1． 54 0． 60
4 0． 85 0． 76
5 1． 28 0． 87
6 0． 33 1． 65
7 0． 36 0． 98
8 0． 46 1． 78
9 0． 91 0． 15
10 0． 88 0． 53
样品
编号
质量分数%
/(g /g)
RSD
/%
11 0． 95 0． 70
12 1． 16 0． 45
13 0． 38 0． 43
14 0． 83 0． 79
15 0． 52 0． 54
16 1． 40 0． 42
17 1． 33 0． 33
18 0． 79 0． 17
19 0． 67 0． 45
20 0． 93 0． 16
4 讨论
4． 1 样品处理方法的选择 考察了甲醇、水、25%
甲醇、50%甲醇、75%甲醇等不同提取溶剂，结果表
明50%甲醇提取样品HPLC图谱杂峰数目少、迷迭
表 4 不同产地肾茶中迷迭香酸比较
Tab． 4 Content of rosmarinic acid in Orthosiphonari
Status from different habitats
国家或地区 广西 广东 老挝 福建 海南 浙江 云南
质量分数平
均值 /%
0． 35 0． 41 0． 52 0． 83 0． 85 0． 88 1． 37
香酸峰面积大，提取效果最好，所以选择 50%甲醇
作为提取溶剂。比较了超声波振荡提取(15、30、45
min)和水浴加热回流提取(2 h)两种提取方法，结
果显示超声 15 min所得图谱峰数目比较少，其他方
法所得 HPLC图谱中峰数目以及各峰峰面积没有明
显差别，考虑到超声波振荡提取法简便易行，所以选
择超声波振荡提取(30 min)制备供试品溶液。
4． 2 色谱条件的选择 本实验所用色谱条件是在
大量摸索试验以及参考文献［9-12］的基础上不断优化
筛选而确定的。曾以甲醇-水、甲醇-0． 1%磷酸、乙
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腈-水、乙腈-0． 1%磷酸、乙腈-0． 1%甲酸作为流动相
进行洗脱，以乙腈-0． 1%磷酸为流动相得到图谱分
离效果最好，故选定乙腈-0． 1%磷酸作为流动相。
4． 3 测定结果 不同产地肾茶中的迷迭香酸量相
差较大，云南肾茶最高，浙江、福建和海南三省肾茶
居次，老挝、广东和广西较低。从迷迭香酸具有抗
炎、抗氧化、免疫抑制等药理活性角度看，在发挥肾
茶这些方面作用时宜选则云南肾茶较佳。
致谢:肾茶样品采集与鉴定得到了中国医学科学院
药用植物研究所、西双版纳傣族自治州傣医医院
(民族医药研究所)及相关单位和友人的大力支持
与帮助。
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556-559．
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