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芳香新塔花药材质量标准的研究



全 文 :[收稿日期] 2009-12-27
[基金项目] 新疆维吾尔自治区科技基础条件平台建设项目
(PT0708);新疆维吾尔药实验室课题(xjys0207-
2008-03)
[通讯作者] * 杨伟俊,Tel:0991-2320292,E-mail :wilfred3106@
163. com
芳香新塔花药材质量标准的研究
杨伟俊1,2* ,何江1,满尔哈巴1,阿不都沙拉木1,毛燕1,于睿1
(1. 新疆维吾尔自治区药物研究所,乌鲁木齐 830004;
2. 新疆维吾尔药重点实验室,乌鲁木齐 830004)
[摘要] 目的:制定芳香新塔花药材的质量标准,为该药用植物的资源开发和合理利用提供科学依据。方法:生药学研
究,水分测定,灰分测定,薄层色谱法,高效液相色谱法测定。结果:对芳香新塔花的性状、显微特征、薄层特征进行了描述;对
总灰分、酸不溶性灰分和水分进行了测定;高效液相色谱法测定金合欢素含量的线性范围为 1. 168 ~ 12. 848 mg·L - 1,加样回
收率为 100. 87%,RSD 为 2. 19%;结论:本质量控制方法可以用来评价芳香新塔花药材的质量。
[关键词] 芳香新塔花;质量标准;显微鉴别;薄层色谱;金合欢素;高效液相色谱法
[中图分类号] R284. 1 [文献标识码] B [文章编号] 1005-9903(2010)10-0065-04
Study on Quality Specification of Ziziphora clinopodioides Lam.
YANG Wei-jun1,2* ,HE Jiang1,Manerhaba1,Abudushalamu1,MAO Yan1,YU Rui1
(1. Xinjiang Institute of Materia Medica,Urumqi 830004,China;
2. Key Laboratory of Xinjiang Uygur Medicine,Urumqi 830004,China)
[Abstract] Objective:To provide scientific basis for the utilization and development of Ziziphora
clinopodioides by setting up the quality control specification of Z. clinopodioides. Method:The pharmacognostical
methods were applied,moisture and ash were determined. And the constituents were analyzed by TLC and HPLC.
Result:The morphological,histological and TLC characters of Z. clinopodioides. were observed. Content of total
ash,acid-insoluble ash,and moisture were determined. The content of acacetin was determined by HPLC,with good
linearity between 1. 168-12. 848 mg· L - 1 . The average recovery of chrysophanol was 100. 87%,and RSD was
2. 19%,respectively. Concusion:The method developed can be used for the quality control of Z. clinopodioides.
[Key words] Ziziphora clinopodioides;quality specification;microscopical identifcation;TLC;acacetin;HPLC
芳香新塔花 Ziziphora clinopodioides Lam.为唇形
科新塔花属植物,系维吾尔医习用药材。生于砾石
坡地及半荒漠草滩上。我国分布于新疆,国外前苏
联、蒙古亦有分布。味辛性寒,具有疏散风热、清利
头目、宁心安神、利水清热、壮骨强身、清胃消食之功
能。主治感冒发热、目赤肿痛、头痛咽痛、心悸失眠
等症[1-2]。Suzan Ozturk 等[3]的研究表明,芳香新塔
花还具有抗菌活性。但是,目前尚无芳香新塔花药
材的质量标准研究,限制了资源利用和开发。课题
组长期致力于芳香新塔花资源及分类研究,取得了
积极成果。为更好的利用芳香新塔花资源,建立了
其质量标准。
1 材料
1. 1 仪器 OLYMPUS CX31 型照相显微镜(日本
奥林巴斯公司),LY-WN-HPCCD 型动态显微成像系
统(成都励扬精密机电有限公司);BS110S 型电子天
平(Sartorius);Millipore simplicity-185 超纯水器(美
国密理博公司);KQ-100DE 型数控超声波发生器
(昆山市超声仪器有限公司);Shimadzu-LC 2010C 全
自动液相色谱仪,Shimadzu CLASS-VP V6. 14 SP1 数
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DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2010.10.028
据工作站。
1. 2 样品和试药 3 批芳香新塔花药材分别于
2008 年 8 月至 9 月采于新疆乌鲁木齐市南山天文
台、乌鲁木齐市南山菊花台和新疆阿勒泰地区,由新
疆药物研究所张彦福研究员鉴定为唇形科植物芳香
新塔花 Z. clinopodioides;金合欢素对照品(实验室自
制,纯度 > 98%);高效液相用试剂均为色谱纯;其余
试剂均为分析纯;水为纯蒸馏水。
2 方法和结果
2. 1 性状鉴别 根粗壮,木质化。茎直立或斜向
上,4 棱,紫红色,从基部分枝,密生向下弯曲的短柔
毛。叶对生,腋间具数量不等的小叶;叶片宽椭圆
形、卵圆形、长圆形、披针形或卵状披针形,长 0. 6 ~
2 cm,宽 3 ~ 10 mm,基部楔形延伸成柄,先端渐尖,
全缘,两面具稀的柔毛,背面叶脉明显,具黄色腺点。
花序轮伞状,着生在茎及枝条的顶端,集成球状,花
梗长 2 ~ 3 mm;苞片小,叶状,边缘具稀疏的睫毛;花
萼筒形,长 5 ~ 7 mm,外被白色的毛,里面喉部具白
毛,萼齿 5 个,近相等,果期不靠合或稍开展;花冠紫
红色,长约 10 mm,冠筒伸出于萼外,内外被短柔毛,
冠沿唇形,上唇直立,顶端微凹,下唇 3 裂,中裂片狭
长,先端微刻,侧裂片圆形;雄蕊 4 个,仅前对发育,
后对退化,伸出冠外;花柱先端 2 浅裂,裂片不相等。
小坚果卵圆形。
2. 2 显微结构
2. 2. 1 茎横切面 呈四棱形,表皮细胞 1 列,外被
毛茸。皮层细胞 1 ~ 3 列,四角棱角角脊处有有厚角
细胞,内皮层凯氏点明显。韧皮部较狭,形成层不明
显,木质部较宽,导管单行径向排列。髓部薄壁细胞
较大,中央常形成空隙。见图 1。
2. 2. 2 粉末显微鉴别 本品粉末黄绿色。多细胞
非腺毛,2 ~ 6 个细胞,长 15 ~ 200 μm。腺毛单头单
柄,呈椭圆形,长 23 ~ 33 μm。腺鳞直径 23 ~ 70
μm。气孔直轴式,长轴约 30 μm,短轴约 20 μm。花
粉粒圆形或椭圆形,直径 25 ~ 33 μm,壁厚。叶肉细
胞含草酸钙方晶。此外,有螺纹导管。见图 2。
2. 3 薄层色谱鉴别 称取芳香新塔花药材粉末 2
g,置圆底烧瓶中,加甲醇 50 mL,回流提取 1 h,放
冷,滤过,滤液浓缩至 5 mL,作为供试品溶液。再精
密称取金合欢素对照品适量,加甲醇溶解,制成 0. 5
g·L - 1的溶液,作为对照品溶液。分别吸取对照品
溶液和供试品溶液各 5 μL,分别点于同一硅胶 G 薄
图 1 芳香新塔花茎横切面显微图
1. 毛绒;2. 表皮;3. 木栓层;4. 内皮;
5. 内皮层;6. 韧皮部;7. 导管;8. 木质部;9. 髓
图 2 芳香新塔花全草粉末显微图
1. 草酸钙方晶;2. 腺鳞;3. 导管;4. 气孔;
5. 非腺毛;6. 花萼细胞;7. 纤维;8. 花粉粒
层板上,以三氯甲烷-甲醇(10∶ 1)为展开剂,展开,展
距为 10 cm,喷以 1% 三氯化铝乙醇溶液,置紫外光
灯(365 nm)下检视,供试品色谱中与对照品在 Rf 值
0. 65 处均有荧光斑点。
2. 4 水分 按中国药典甲苯法[4]测定水分。3 批
样品水分测定结果见表 1。根据 3 批样品测定结果
分析,测定结果最高值为 6. 7%,平均值为 6. 3%,故
暂定水分检查限度不得超过 9. 0%。
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2. 5 总灰分 按《中国药典》[4]方法,对 3 批样品
进行总灰分的测定,见表 1。3 批样品总灰分测定结
果最高值为 11. 7%,平均值为 10. 5%,故暂定总灰
分检查限度不得超过 14. 0%。
图 3 芳香新塔花中金合欢素的 HPLC 图
A. 对照品;B. 样品;C. 阴性;1. 金合欢素
2. 6 酸不溶性灰分 按《中国药典》[4]方法,对 3
批样品进行酸不溶性灰分的测定,见表 1。3 批样品
酸不溶性灰分测定结果最高值为 3. 5%,平均值为
3. 3%,暂定酸不溶性灰分检查限度不得超过 6%。
表 1 芳香新塔花 3 批样品水分、总灰分、酸
不溶性灰分测定结果 %
No. 水分 总灰分 酸不溶性灰分
1 6. 4 11. 7 3. 5
2 6. 7 9. 4 3. 4
3 6. 0 10. 4 3. 1
平均值 6. 3 10. 5 3. 3
2. 7 含量测定[5-6]
2. 7. 1 色谱条件 YMC-Pack ODS-A AA12S05-
2546WT(4. 6 mm × 250 mm,S-5 μm,12 nm);流动相
乙腈-1% 的冰醋酸水溶液(37:63);检测波长 326
nm;流速 1. 0 mL·min - 1;柱温 35 ℃;进样量 10 μL。
色谱分离结果见图 3。
2. 7. 2 线性关系考察 精密吸取金合欢素对照品
(58. 4 mg· L - 1)溶液 0. 2,0. 6,0. 8,1. 2,1. 4,2. 2
mL 置 10 mL 量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀。分别精
密吸取上述溶液各 10 μL 注入液相色谱仪。以对照
品浓度为横坐标(X),峰面积为纵坐标(Y),绘制标
准曲线。其回归方程为 Y = 4. 32 × 104X + 1. 10 ×
104,r = 0. 999 9。线性范围为 1. 168 ~ 12. 848
mg·L - 1。
2. 7. 3 供试品溶液制备 取本品粉末(过二号筛)1
g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇 30
mL,浸泡 20 min,加热回流 1 h,放冷,用甲醇补足减
失的质量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
2. 7. 4 精密度试验 精密称取芳香新塔花药材 1
g,依供试品溶液制备方法制备,同一供试品溶液,重
复进样 6 次,每次进样 10 μL,注入液相色谱仪,测定
色谱峰面积。测得金合欢素峰面积的 RSD 为
0. 99%。
2. 7. 5 重复性试验 取同一批的芳香新塔花药材
6 份,每份 1 g,精密称定,依供试品溶液制备方法制
备 6 份供试品溶液,进样 10 μL,注入液相色谱仪,测
得的 RSD 为 1. 64%。
2. 7. 6 稳定性试验 同一批供试品,制成供试品溶
液(按 2. 7. 3 项下制备),室温放置,于配置后 0,2,
4,8,24,36 h 测定峰面积,计算日内 RSD 为 1. 13%,
日间 RSD 为 0. 11%。
2. 7. 7 回收率试验 精密称定已知含量的芳香新
塔花药材约 0. 5 g,共 10 份,1 份为空白样品,其余 3
份为 1 组,分别加入高、中、低 3 种浓度的对照品溶
液(每 1 mL 含金合欢素 58. 4 μg,加入量分别为
0. 2,0. 4,0. 6 mL),按供试品溶液制备,测定。所得
平均回收率为 100. 87%,RSD 为 2. 19%。见表 2。
表 2 金合欢素加样回收率试验
No.
样品中
含量 /mg
加入量
/mg
测得
量 /mg
回收
率 /%
平均回
收率 /%
空白样品 0. 023 86 0 0. 023 86
1-1 0. 022 57 0. 011 68 0. 034 71 103. 92
1-2 0. 022 35 0. 011 68 0. 034 25 101. 88 102. 97
1-3 0. 022 26 0. 011 68 0. 034 30 103. 10
2-1 0. 022 13 0. 023 36 0. 045 66 100. 72
2-2 0. 021 95 0. 023 36 0. 044 88 98. 14 98. 73
2-3 0. 021 86 0. 023 36 0. 044 60 97. 33
3-1 0. 022 52 0. 035 04 0. 057 35 99. 40
3-2 0. 022 53 0. 035 04 0. 058 27 102. 01 100. 92
3-3 0. 022 22 0. 035 04 0. 057 73 101. 35
2. 7. 8 含量测定 分别取芳香新塔花药材,同前制
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备供试品溶液,分别精密吸取 10 μL,注入高效液相
色谱仪测定,根据测定结果,暂定芳香新塔花药材中
金合欢素含量不低于 0. 03 mg·g - 1。结果见表 3。
表 3 不同批次药材中金合欢素含量测定 mg·g - 1
样品来源 产地 金合欢素
芳香新塔花(新疆)乌鲁木齐南山天文台 0. 0 456
芳香新塔花(新疆)乌鲁木齐南山菊花台 0. 0 455
芳香新塔花(新疆)新疆阿勒泰地区 0. 0 474
3 讨论
叶肉细胞中含有草酸钙方晶及内皮层凯氏点明
显,可作为芳香新塔花显微鉴别的重要依据。
新塔花属植物含挥发性成分的报道较多[7],芳
香新塔花全草含挥发油 0. 8% ~ 2%,主要为薄荷
酮、胡薄荷酮和 2,2-二甲基乙酸环己醇酯[8],故水分
测定采用甲苯法。该药材含较多水分,采收时如不
能充分晒干,导致含水分量偏高,在贮存期时易发生
霉变,影响质量,因此建立水分检查项。
文献记载,芳香新塔花生长于阿尔泰山、天山、
准格尔西部山地、帕米尔高原及昆仑山一带[9],课题
组野外调查发现,其生长在1 100米以上,阳光充足
的砾石坡地、半荒漠草地及沙滩上,故建立其总灰分
及酸不溶性灰分检测指标,可以有效控制药材中泥
沙和灰尘等杂质。
课题组前期研究了芳香新塔花的化学成分,从
中分离得到金合欢素(5,7-二羟基-4′-甲氧基黄酮),
药理实验表明对心血管有较好的生物活性,因此以
金合欢素为对照品进行薄层检测以及含量测定,此
方法简便易行,重复性好,为芳香新塔花药材质量标
准的提高提供了定量依据。
[参考文献]
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[责任编辑 顾雪竹
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《中国实验方剂学杂志》入编中文核心期刊信息
依据文献计量学的原理和方法,经研究人员对相关文献的检索、计算和分析,以及学科专家评审,《中国
实验方剂学杂志》入编《中文核心期刊要目总览》2008 年版(即第五版)之中国医学类的核心期刊。该核心期
刊按《中国图书馆分类法》的学科体系,列出了 73 个学科的核心期刊表,并逐一对核心期刊进行了著录。著
录项目包括:题名、并列题名、主办单位、创刊时间、出版周期、学科分类号、ISSN 号、CN 号、邮发代号、编辑部
地址、邮政编码、电话、网址、电子邮箱、内容简介等。该研究成果只是一种参考工具书,主要是为图书情报部
门对中文期刊的评估与订购、为读者导读提供参考。
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