全 文 ：收稿日期:2007-09-24
作者简介:刘芳(1979-),女,乐山师范学院化学与生命科学学院讲师,硕士。
乐山师范学院学报
JournalofLeshanTeachersColege
第23卷 第5期
2008年5月
Vol.23,No.5
May.2008
密叶罗勒茎尖组织培养研究
刘 芳 1 邓 林 1 任伟毅 1 李仲芳 1 王春林 2
(1.乐山师范学院 化学与生命科学学院,四川 乐山 614004
2.陇东学院 科学技术处,甘肃 庆阳 745000)
摘 要:以密叶罗勒的茎尖为外植体,以期筛选出诱导愈伤组织分化和丛生芽生根的最佳培养基。同时研究了密叶罗
勒组织培养中材料的消毒时间对消毒效果的影响。试验结果表明,培养基MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.1mg/L是愈伤组织诱导
分化相对较好的培养基;培养基 MS+6-BA0.3mg/L+NAA0.6mg/L是罗勒生根培养较好的培养基。在以 75℅的酒精消毒 30
秒后,用0.1℅的升汞消毒2min,对试验材料的消毒效果相对较好。
关键词:密叶罗勒;消毒时间;诱导率;玻璃化
中图分类号:Q949.777 文献标示码:A 文章编号:1009-8666(2008)05-0035-03
密叶罗勒(Ocimumbasilicum).原产于南亚、
伊朗和中东地区[1],俗称九层塔,是唇形科一年生
草本植物。药用时,可健胃,促进消化,利尿强心,
刺激子宫,保进分娩[2]。同时罗勒也可食用[3]。在花
卉栽培方面,罗勒具有驱蚊功效,美化环境,清洁
空气[4]。罗勒的种植多采用种子栽培,但利用种子
培养需要温暖湿润的气候[7],罗勒所要求的生长条
件在北方大规模生产受到一定的限制,利用组织
培养可缩短其生长周期、避开不利于其生长的温
度,用丛生芽进行快速繁殖,对扩大生产规模有很
大帮助。其次,近年来随着新颖,时尚,易于管理的
试管花卉的发展,开发新的试管花卉的品种迫在
眉睫。密叶罗勒的组培试管苗株型紧凑,叶色浓
绿,有较高的欣赏价值。
本试验探讨了密叶罗勒脱毒组织培养中消毒
处理的最佳时间,以及愈伤组织诱导分化和丛生
芽诱导生根的培养基配方,以缩短培养周期和降
低培养成本,为罗勒无菌试管苗的大规模生产提
供技术支持。
1 材料和方法
1.1 供试材料
材料取自乐山师范学院化学与生命科学系温
室内栽培罗勒侧枝上的幼芽。
1.2 材料的消毒处理
用自来水冲洗罗勒,洗净叶表面的尘土,置于
超净工作台上,以75%的酒精消毒30秒时间,再
用无菌水冲洗 3次,将材料分三部分别用 0.1%
HgCl2消毒1min、2min和5min,再用无菌水冲洗3
次。
1.3 初代培养
将消毒处理过的材料,接种到培养基中。培养
基以MS为基本培养基,添加以6-BA,NAA(双因
子)不同浓度组合的植物激素,26g/L的蔗糖,并加
入 5g/L的琼脂粉作为固定剂,调节 PH到 5.7～
5.8。设计9个浓度梯度①,②,③,④,⑤,⑥,⑦,
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表1(6-BA与NAA双因子不同组合的九个浓度梯度)
NAA
0.05
0.1
0.2
6-BA
3.0(mg/L)
①
④
⑦
4.0(mg/L)
②
⑤
⑧
5.0(mg/L)
③
⑥
⑨
⑧,⑨(见表1),在每一种浓度梯度下接种 10瓶,
每个瓶中接2个芽。培养温度为23℃,光照14小
时。
统计公式:
愈伤组织诱导率=愈伤组织数/接种的外植体
数×100%;
玻璃化率=玻璃化的丛生苗/分化产生的丛生
苗×100%。
1.4 生根培养
以初代培养长出的丛生芽作为转接材料。不
需经过表面消毒,直接将丛生芽从初代培养的愈
伤组织上切下,接入以 MS为基础培养基,6-BA
固 定 浓 度 为 0.3mg/L,NAA配 合 浓 度 分 别 为
0.4,0.5,0.6mg/L(见表 2)。同时加入 26g/L的蔗
糖,并加入5g/L的琼脂粉作为固定剂,调节PH到
5.7～5.8。在每一个浓度梯度下接15瓶,每瓶接 2
丛生芽。培养温度为23℃,光照14小时。
2 结果和分析
2.1 消毒时间对试验结果影响的比较
如表3所示,用相同的消毒方法,不同的消毒
时间处理材料,分别是1min、2min和5min。10天
过后观察消毒效果。消毒 1min的材料存活率为
89.75%,死亡的材料叶片有褐色小斑点,其污染较
为严重,为19.50%;消毒2min的材料存活率为
82.97%,死亡的材料叶片变褐,但污染率为
8.10%;消毒处理5min的材料全部死亡,发现叶片
变褐,芽的顶端只留一点绿色,材料严重受到损
伤,但未见受到污染。由于材料采自温室,比一般
的材料幼嫩,所以对消毒时间以及消毒液的浓度
控制都要求较严。试验结果表明,75%的酒精消毒
30秒时间,再用无菌水冲洗3次,0.1%HgCl2消毒
2min,用无菌水冲洗3次,相对效果较好。
2.2 罗勒愈伤组织的诱导和分化
在9个浓度梯度下接种的罗勒四十天后都有
愈伤组织产生,并且都不同程度的分化出丛生芽。
如表 4,5所示,浓度①、④、⑥这三组愈伤组织诱
导率较高,分别为 80%、75%、70%,而且①、⑥两
组愈伤组织体积较大,生长旺盛;浓度④这一组产
生的愈伤组织体积小,结构致密。浓度②、⑦、⑧这
三组诱导率较低,都为 15%,愈伤组织体积小,叶
片颜色较浅。
同时也观察到出现玻璃化的现象。其中在浓
度①、④、⑥三组中分化的丛生芽玻璃化率分别为
31.25%、26.67%、60%,即⑥这一组的玻璃化程度
最高。植物生长激素配比不协调,细胞分裂素浓度
过高则容易产生玻璃化现象[6]。在⑥这一组中玻璃
化率达60%,6-BA浓度相对较高,可能是使其玻
璃化程度高的原因。所以综合比较,本试验中以浓
度①,即MS+0.05mg/LNAA+3.0mg/L6-BA为罗勒
愈伤组织诱导分化的最佳培养基。
表2生根培养的浓度梯度
0.6(mg/L)
③
0.5(mg/L)
②
0.4(mg/L)
①6-BA
NAA
(6-BA固定浓度为0.3mg/L。)
表3 消毒时间及效果
消毒时间
1min
2min
5min
接种数
94
94
94
成活数
84
78
0
成活率
89.75%
82.97%
0
污染率
19.50%
8.10%
0
表4 6-BA与NAA配合对罗勒愈伤组织诱导分化的影响
浓度梯度
①
②
③
④
⑤
⑥
⑦
⑧
⑨
接种数
20
20
20
20
20
20
20
20
20
诱导数
16
3
12
15
13
14
3
3
9
诱导率%
80
15
60
75
65
70
15
15
45
玻璃化率%
31.25
33.33
8.33
26.67
30.77
60
34.75
33.33
100
表5形成的愈伤组织和玻璃化情况
浓度梯度
①
②
③
④
⑤
⑥
⑦
⑧
⑨
愈伤组织特点
体积较大 疏松成绿色 生长旺盛
体积较大 致密成绿色
体积较大 疏松成浅绿色 生长较旺盛
较小 成绿色 结构致密
较小 致密成绿色
体积大 疏松成黄绿色 生长旺盛
体积小 疏松 叶片变褐
较小 疏松成浅绿色
体积小 致密成绿色
丛生芽玻璃化情况
玻璃化较严重
玻璃化较严重
程度轻
程度较轻
玻璃化较严重
玻璃化程度较重
玻璃化程度较重
玻璃化程度较重
玻璃化严重
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表6 6-BA与NAA配合对生根培养的影响
浓度梯度
①
②
③
接种数
15
15
15
生根数
6
6
12
生根率
40%
40%
80%
生根量
54
51
60
生根情况
基部愈伤化较轻,根粗壮,
有白色根毛,有气生根
基部愈伤化严重,根细长,
成浅绿色,没有气生根
基部愈伤化较轻,根壮较
短,有白色根毛,没有气生
根
2.3 罗勒转接生根培养
选取初代培养中长势较好的丛生苗接种到生
根培养基上进行生根培养。一般是2～3cm。30天
后,观察根的长势,记录如表6所示。结果表明,在
这3个浓度梯度下,以培养基MS+0.3mg/L6-BA+
0.6mg/LNAA为较好的生根培养基,生根率达
80%,且根的愈伤化程度较轻,根粗,根量适中。
3 讨论
3.1 不同消毒时间对愈伤组织诱导分化的影响
由于材料采自温室大棚,比一般的材料幼嫩,
所以对消毒时间以及消毒液的浓度控制都要求较
严。本试验中分别采取用0.1%的HgCl2消毒处理
1min、2min和5min,再用无菌水冲洗3次作为对
比。消毒时间如果为 1min,由于消毒不充分而导
致材料的污染加剧;消毒 5min,发现材料叶片有
变黑的斑块,刀片切口处严重受伤成黑色。对材料
造成不可逆的伤害。试验结果表明,以75%的酒精
消毒30秒,再用无菌水冲洗3次,0.1%HgCl2消毒
2min,用无菌水冲洗 3次,未使使材料受到伤害,
且保证污染率较低,消毒效果较好。
3.2 试验中玻璃化现象
在植物生长激素不协调,细胞分裂素浓度过
高的情况下会有玻璃化现象的产生[6]。本试验采用
了 NAA和 6-BA两种外源激素的不同浓度配比
诱导罗勒愈伤组织产生和分化,所选的材料为密
叶罗勒春季幼嫩的茎尖。在 9个不同的 NAA和
6-BA植物激素浓度配比下对愈伤组织进行诱导
分化,都有不同程度的玻璃化现象产生。而在丛生
苗诱导生根时,玻璃化现象明显减少。造成玻璃化
现象的可能原因有2个:①罗勒内源激素的干扰;
②人为原因造成培养基中的外源激素配比不协
调。本试验表明在不排除试验材料的内源生长素
影响条件下,NAA和6-BA的浓度比为1:60是诱
导愈伤组织产生和分化相对较好的浓度配比;在
诱导生根培养时 NAA和 6-BA的浓度比为 2:1,
为较好的浓度配比。
3.3 NAA与6-BA配合对生根培养的影响
试验结果表明,NAA与6-BA的浓度比为 2:
1是罗勒较好的生根培养基。根据高的生长激素
和细胞分裂素浓度比能够促进生根,若 NAA:6-
BA的比例大于2,则可提高罗勒的生根率。
参考文献:
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