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宋 微，潘静霞，吴 静． 2 种蝴蝶兰组织培养快繁技术［J］． 江苏农业科学，2014，42(6):55 － 56．
2 种蝴蝶兰组织培养快繁技术
宋 微，潘静霞，吴 静
(江苏农林职业技术学院，江苏句容 212400)
摘要:以红龙、皇帝 2 个品种的蝴蝶兰花梗为材料，1 /3MS培养基为基本培养基，筛选花梗使用 HgCl2 消毒的最佳
时间，增殖培养基的最佳激素、蔗糖浓度，以确立最佳培养配方。结果表明，红龙、皇帝品种最佳的诱导材料为开过花
的花梗;红龙品种的最佳消毒时间为 20 min，皇帝品种的最佳消毒时间为 18 min;适合红龙品种生长的最佳激素组合
为 5 mg /L 6 － BA +0． 5 mg /L NAA，蔗糖浓度为 25 g /L;适合皇帝品种生长的最佳激素组合为 5 mg /L 6 － BA + 0． 5 mg /L
NAA，蔗糖浓度为 20 g /L。
关键词:蝴蝶兰;组织培养;消毒时间;激素
中图分类号:Q943． 1 文献标志码:A 文章编号:1002 － 1302(2014)06 － 0055 － 02
收稿日期:2013 － 09 － 02
基金项目:江苏省自然科学基金(编号:BK2011498、BK2010345);江
苏农林职业技术学院课题。
作者简介:宋 微(1978—)，女，黑龙江大庆人，博士，副教授，从事植
物组织培养、微生物和植物病理学研究。E － mail:13360790 @
qq． com。
蝴蝶兰(Phalaenopsis amabilis)系兰科蝴蝶兰属植物，花
大而美丽，花期长，品种多，栽培广泛，深受人们喜爱，在花卉
市场上常常供不应求。在自然条件下，蝴蝶兰主要靠分株、种
子繁殖，繁殖率低，而且由于长期进行有性繁殖，带病毒株增
多，逐渐使种性降低，影响生长。如今组织培养已经成为蝴蝶
兰无性繁殖最常用的方法，既可以保持母本的优良性状，快速
繁殖子代，又可以反季节栽培适应市场需求［1 － 4］。以花梗芽
作为外植体进行培养是代替蝴蝶兰茎尖培养的一种方法［1］，
在不影响蝴蝶兰母株的优良性状和经济条件下选取外植体，
提高花梗芽的诱导率，避免病毒扩散和危害，保持母株优良的
生物学特性［2］。本研究以花梗芽为外植体，筛选最佳快繁培
养基，研究红龙(Phalaenopsis amabilis“Ｒed Dragon”)、皇帝
(Phalaenopsis amabilis“Emperor”)2 个品种的最佳培养方案，
为这 2 个品种的快速繁育提供必要的技术支持。
1 材料与方法
1． 1 材料
分别取蝴蝶兰红龙、皇帝 2 个品种开过花的花梗，除基部
外至顶端第 6 节至第 7 节剥开可见到芽的部位为组织培养的
外植体材料，每个样本 100 个，重复 3 次。
1． 2 方法
1． 2． 1 清洗与消毒 从温室里取出材料后用流水冲洗 1 h，
加入 3%的洗衣粉，取生长时间超过 40 d的花梗，提前把苞叶
剥去后用于接种［5 － 7］。以 75%乙醇棉球擦拭花梗表面，放在
无菌操作台上备用，以节为单位切成段，每节段上端留 2 cm，
下端留 3 cm。以解剖刀除去花梗节芽上的苞叶，去除节段表
—55—江苏农业科学 2014 年第 42 卷第 6 期
面病斑、焦枯部分［2］。以 75%乙醇棉球重复擦拭去苞叶的花
梗芽，力度适中，防止伤芽。以 75%乙醇振荡浸泡 30 s，而后
以 0． 1% HgCl2 消毒，消毒时间分别采用 8、10、12、14、16、18、
20 min，再以无菌水振荡冲洗 3 次，用解剖刀切去消毒后花梗
两端各 0． 5 cm，以芽自然生长方向正向插入培养基内［8］。
1． 2． 2 培养基 基本培养基为 1 /3MS + 5 mg /L 6 － BA +
0． 5 mg /L NAA + 7 g /L 琼脂 + 20g /L 蔗糖;增殖培养基为
1 /3MS + 7 g /L 琼脂 + 1、2、3、4、5 mg /L 6 － BA + 0． 1、0． 2、
0. 3、0． 4、0． 5 mg /L NAA + 5、10、15、20、25、30 g /L 蔗糖，pH
值为 6． 8。组培瓶内培养基为 100 mL/瓶，分装后于 121 ℃下
灭菌 21 min，备用。恒温 26 ℃培养，光照时间为 10 ～ 12 h /d，
光照强度为 1 600 ～2 000 lx。
1． 3 数据处理
试验所得的数据采用 SPSS 11． 0 软件统计分析。
2 结果与分析
2． 1 不同消毒时间对 2 个品种萌发的影响
由表 1 可见，2 个品种蝴蝶兰以 0． 1% HgCl2 消毒 8 min
的外植体污染率均最高，分别为 76． 7%、93． 3%。随着消毒
时间的延长，外植体污染率降低，当消毒时间延长至 20 min
时，红龙污染率为 16． 6%，皇帝污染率为 16． 7%，但芽同时出
现毒死现象，芽死亡率为 6． 7%，致使萌芽率降低，所以不同
品种的消毒时间存在着差异。由此可见，红龙的最佳消毒时
间为 20 min，皇帝的最佳消毒时间为 18 min，此消毒时间根据
花梗芽的饱满成熟度有所不同。
表 1 不同消毒时间对红龙和皇帝 2 个品种萌发的影响
灭菌时间
(min)
污染率(%) 死亡率(%) 萌发率(%)
红龙 皇帝 红龙 皇帝 红龙 皇帝
8 76． 6 93． 3 0 0 10． 0 3． 3
10 73． 3 83． 3 0 0 20． 0 10． 0
12 63． 3 80． 0 0 0 43． 3 16． 6
14 50． 0 56． 6 0 0 40． 0 40． 0
16 43． 3 46． 6 0 0 50． 0 56． 6
18 26． 6 20． 0 0 0 70． 0 83． 3
20 16． 6 16． 7 0 6． 7 86． 6 66． 6
注:培养基为 1 /3MS + 5 mg /L 6 － BA + 0． 5 mg /L NAA +7 g /L琼
脂 + 20 g /L 蔗糖。
2． 2 不同浓度的外源激素对花梗诱导和丛生芽产生的影响
经过 40 d 培养后，由表 2 可知，当激素组合为 1 mg /L
6 － BA + 0． 1 mg /L NAA 时，红龙、皇帝平均芽长为 1． 56、
1． 92 cm，且其平均芽长随着 6 － BA、NAA 浓度的增加而变
长。当激素组合为 5 mg /L 6 － BA + 0． 5 mg /L NAA 时，红花、
皇帝丛生芽的平均长度达到最长，为 3． 04、2． 67 cm。说明红龙
和皇帝组培的最佳激素组合均为 5 mg /L 6 － BA + 0． 5 mg /L
NAA。
表 2 不同激素组合对 2 个品种丛生芽诱导的影响
激素浓度(mg /L) 诱导率(%) 平均芽长(cm)
6 － BA NAA 红龙 皇帝 红龙 皇帝
1 0． 1 20． 0a 95． 6a 1． 56a 1． 92a
2 0． 2 40． 0b 96． 6a 1． 65a 1． 98a
3 0． 3 60． 0b 97． 2a 2． 41b 2． 49b
4 0． 4 70． 0c 97． 2a 2． 42b 2． 58b
5 0． 5 76． 6d 100． 0b 3． 04c 2． 67c
注:同列数据后不同字母表示差异显著(P ＜ 0． 05)。
2． 3 不同蔗糖浓度对芽长和丛生芽的影响
在植物组织培养中，尤其是在蝴蝶兰快繁中，主要把蔗糖
作为碳源，不同的蔗糖浓度对丛生芽的产生和芽长有很大的
差异［9］。本试验对红龙和皇帝 2 个品种分别用 5、10、15、20、
25、30 g /L 蔗糖进行处理，结果见表 3。从表 3 可看出，当蔗
糖浓度为 25 g /L时，红龙品种的平均芽长最长，为 3． 0 cm，丛
生芽平均个数为 1． 3 个。当蔗糖浓度为 20 g /L 时，皇帝的平
均芽长最长，为 2． 9 cm，丛生芽平均个数为 2． 3 个。说明适
合蝴蝶兰红龙、皇帝品种的最佳蔗糖浓度分别为 25、20 g /L。
表 3 不同蔗糖浓度对丛生芽生长的影响
蔗糖浓度
(g /L)
红龙 皇帝
诱导率
(%)
平均芽长
(cm)
丛生芽
平均个数
诱导率
(%)
平均芽长
(cm)
丛生芽
平均个数
5 90 1． 2 0． 9 92 2． 2 1． 6
10 80 1． 2 0． 8 90 1． 5 1． 5
15 50 1． 8 0． 5 80 2． 3 1． 4
20 90 2． 7 0． 9 100 2． 9 2． 3
25 100 3． 0 1． 3 90 2． 5 1． 9
30 30 2． 7 0． 3 80 2． 8 1． 5
3 结论
许多研究结果表明，花梗是蝴蝶兰组织培养的最佳外植
体，植物生长激素浓度、蔗糖浓度等都是影响休眠芽萌发的关
键因素［4，8，10］。笔者发现，蔗糖浓度会直接影响蝴蝶兰不同品
种的增殖率，不同品种的外植体也要进行不同时间的消毒，否
则会提高污染率或毒杀芽体。
综上所述，红龙的最佳消毒时间为 20 min，皇帝最佳的消
毒时间是 18 min，适合蝴蝶兰红龙组培快繁的最佳培养基为
1 /3 MS +5 mg /L 6 － BA +0． 5 mg /L NAA +7 g /L琼脂 +25 g /L
蔗糖，适合蝴蝶兰皇帝组培快繁的最佳培养基为 1 /3MS +
5 mg /L 6 － BA +0． 5 mg /L NAA + 7 g /L 琼脂 + 20 g /L蔗糖。
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