全 文 ：HPLC 法测定肋柱花中木犀草素的含量
内蒙古民族大学蒙医药学院(通辽 028000)　王秀梅　巴根那　白明纲
摘　要:目的:建立高效液相色谱(HPLC)法测定肋柱花中木犀草素含量的方法。方法:采用高效液相色谱法。 色谱柱:Dia-
monsil C18(250mm×4.6mm , 5μm);流动相:甲醇-0.4%磷酸溶液(55:45);流速:1.0ml·min-1;检测波长:350nm;柱温:
35℃。结果:木犀草素对照品在 0.052μg～ 0.312μg 范围内 , 与峰面积具有良好的线性关系 , r=0.9999;平均回收率为 98.
13%、RSD为 1.04%(n=6)。结论:该方法简便 、快捷 、准确 、重复性好 , 可用于肋柱花中木犀草素的含量测定。
关键词:蒙药;肋柱花;木犀草素;HPLC
中图分类号:R291.2　文献标识码:B　文章编号:1006-6810(2009)01-0038-02
　　肋柱花是蒙医常用药材 , 蒙古名音译为哈比日根-地
格达 、亦称特木尔-地格达 , 来源于龙胆科肋柱花属植物肋
柱花 Lomatogonium rotatum (L.)Fries ex Nym.的干燥全
草。具有平息“ 协日” , 清热 , 健胃 , 愈伤功能;用于“协日”
热 ,瘟疫 , 流感 ,伤寒 , 中暑头痛 ,肝胆热 ,黄疸 ,胃协日 , 伤热
等病症〔1〕。是蒙医治疗肝胆疾病的主要传统药物 , 临床疗
效显著 , 收载于《中华人民共和国卫生部药品标准·蒙药分
册》(1998 年版)。尚无含量测定项目。研究结果表明 , 肋柱
花药材中所含黄酮类化合物主要有木犀草素及其荭草素 、
异荭草素等多种木犀草素的 C-苷 , 异牡荆素 , 芒果苷等口
山酮类成分;它们具有不同程度的利胆 、保肝生物活性〔2 , 3〕。
所以为了进一步完善和提高肋柱花的药品标准 , 有效地定
量控制和保证药品质量 ,我们参照有关文献〔4〕, 研究建立了
采用高效液相色谱法对肋柱花中的特征成分木犀草素进行
含量测定的方法。结果满意。
1　仪器与试药
Shimadzu LC-vp 高效液相色谱仪 ,配置 LC-10ATvp
输液泵 、SPD-M10Avp 检测器 、SC L-10Avp 色谱工作站
(日本岛津);UP-2501PC 分光光度计(日本岛津);BS210S
型电子分析天平(北京塞多利斯天平有限公司);KQ-100
型超声波清洗器(昆山市超声波仪器有限公司)。
木犀草素对照品 ,由中国药品生物制品检定所提供 , 批
号 11150-200201(供含量测定用);甲醇为色谱醇;所用水
为重蒸馏纯净水 ,其余试剂均为分析纯。
肋柱花,由内蒙古锡林郭勒盟蒙医研究所提供。经内蒙古
民族大学蒙医药学院布和巴特尔教授鉴定为龙胆科植物 Lo-
matogonium rotatum(L.)Fries ex Nym.肋柱花的干燥全草。
2　方法与结果
2.1　色谱条件与系统适用性试验:色谱柱:Diamonsil C18
(250mm×4.6mm , 5μm);流动相:甲醇-0.4%磷酸溶液
(55:45);流速:1.0ml·min-1;柱温:35℃;检测波长:350nm。
在此条件下 , 色谱柱理论板数(n)按木犀草素(C15H10O6)
计算应不底于 1500 ,木犀草素色谱峰的拖尾因子(T)为 1.0
(见图 1)。
图 1　木犀草素对照品(A)和肋柱花样品(B)的高效液相色谱图
1.木犀草素(luteolin)
2.2　对照品储备液的制备:精密称取木犀草素 10.4mg , 置
100ml量瓶中 , 加甲醇溶解并稀释至刻度 , 摇匀 , 即得(每
1ml中含木犀草素 0.104mg)。
2.3　供试品溶液的制备:取肋柱花药材粉末(过 3号筛)约
1.00g , 精密称定 , 置 50ml锥形瓶中 , 精密加入 2.5mol·L-1
盐酸甲醇溶液 25ml , 密塞 , 称定重量 , 加热回流 30 分钟 , 放
冷 ,再称定重量 , 用 2.5mol·L-1盐酸甲醇溶液补足减失的
重量 ,摇匀 , 滤过 ,精密量取续滤液 2ml , 置 10ml量瓶中 , 加
甲醇至刻度 , 摇匀 ,即得。
2.4　线性关系及其工作范围的考察:精密吸取木犀草素对
照品储备溶液 0.25、0.50、0.75 、1.0、1.25 与 1.50 ml , 分别
置 5ml量瓶中 , 加甲醇至刻度 , 摇匀。各精密吸取 10μl , 注
入液相色谱仪 ,记录色谱图 ,测定其峰面积(A)。并以峰面
积(Y)对木犀草素的进样量(X)进行线性回归 , 得回归方
程:
Y=3713415X-1695 , r=0.9999
结果表明 , 木犀草素对照品进样量在 0.052μg ～ 0.
312μg范围内 ,与峰面积具有良好的线性关系 , 相关性显著。
见表 1。
表 1　不同浓度木犀草素对照品的测定结果
C(μg/10μl) 0.052 0.104 0.156 0.208 0.260 0.312
A(峰面积) 193204 384634 575258 767768 967125 1155014
38　　　　　　　　　　　　　　　　　中国民族医药杂志　　　　　　　　　　　　　2009 年 1 月第 1 期
DOI :10.16041/j.cnki.cn15-1175.2009.01.045
2.5　精密度试验:精密吸取同一份供试品溶液 10μl , 在上
述色谱条件下依法重复进样 5 次 ,记录色谱图 , 测定其峰面
积.。结果 RSD为 0.76%, 表明精密度良好。
2.6　稳定性试验:同一份供试品溶液 ,分别于 0 、4 、8 、12、16
小时 ,精密吸取 10μl ,注入液相色谱仪 , 记录色谱图 , 测定其
峰面积。结果 RSD为 0.86%, 表明供试品溶液在 16 小时
内测定稳定性良好。
2.7　重复性试验:称取同一批样品约 1.00g , 共 5 份 , 精密
称定 ,照上述 2.3 项下方法制得供试品溶液 5 份 , 按含量测
定方法 ,分别精密吸取 10μl , 注入液相色谱仪 , 记录色谱图 ,
测定其峰面积 , 并计算含量。 结果平均含量为 0.298%,
RSD 为 1.15%。表明该含量测定方法具有良好的重复性。
2.8　回收率试验:取已知含量的肋柱花药材粉末(过 3 号
筛), 约 0.50g ,精密称定 , 分别加入一定量的木犀草素对照
品 ,照上述 2.3 项下方法制得供试品溶液 , 在规定色谱条件
下按含量测定方法进行测定 ,并按下列公式计算回收率。结
果见表2 ,木犀草素平均回收率为 98.13%、RSD为 1.04%。
表 2　回收率试验结果
编
号
取样量
(g)
样品中
含量(mg)
对照品加
入量(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回
收率(%)
RSD
(%)
1 0.5026 1.498 0.936 2.412 97.68
2 0.5026 1.498 0.936 2.422 98.71
3 0.5017 1.495 1.560 3.046 99.41
4 0.5017 1.495 1.560 3.031 98.44
5 0.4986 1.486 2.080 3.527 98.11
6 0.4986 1.486 2.080 3.491 96.41 98.13 1.04
表 3　肋柱花中木犀草素的含量
编号 木犀草素含量(%) Ave(%) S(%) RSD(%)
1 0.302
2 0.291
3 0.295 0.297 0.005 1.344
4 0.299
5 0.302
2.9　样品测定:照高效液相色谱法(《中国药典》2005 年版
一部附录 VID)测定。精密吸取对照品溶液(每 1ml中含木
犀草素 20.8μg)与供试品溶液各 10μl ,注入液相色谱仪 ,记
录色谱图 ,测定其峰面积值 , 并计算木犀草素(C15H10O6)
含量。结果见表 3。
3　讨　论
3.1　检测波长的选择:采用 SPD-M10Avp 检测器 , 取木犀
草素对照品溶液在 190 ～ 400nm 的波长范围内进行光谱扫
描。根据木犀草素的紫外吸收 ,选择了 350nm作为检测波长。
3.2　提取溶剂和方法的确定 实验中比较了肋柱花的甲
醇 、2.5mo l·L-1盐酸甲醇溶液的超声提取或加热回流提取
的效果。结果提取溶剂 2.5mol·L-1盐酸甲醇溶液的效果
高于甲醇约 10 倍 , 且以前者加热回流提取率为最高;进而
考察不同提取时间对它的影响 ,结果加热回流提取 30、40、
50min 的供试品溶液含量基本不变。肋柱花药材中所含木
犀草素以游离形式存在外 , 尚以苷的结合形式存在 , 如所含
荭草素 、异荭草素等多种木犀草素的 C-苷 , 应充分水解提
取。故确定采用了以 2.5mol·L-1盐酸甲醇溶液加热回流
水解 30min 的提取方法。
3.3　小结:该方法简便 、快捷 、准确 、重复性好 ,可用于肋柱
花中木犀草素的含量测定 , 为《中华人民共和国卫生部药品
标准》肋柱花的质量标准的进一步完善提高奠定了基础。
参考文献
〔1〕中华人民共和国卫生部.中华人民共和国卫生部药品标
准(蒙药分册)〔S〕.1998.15.
〔2〕吴柒柱 , 包巴特尔 ,白海花.蒙药肋柱花的研究进展〔J〕.
时珍国医国药 , 2004 , 15(6):366-367.
〔3〕国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草〔M〕.
上海:上海科学技术出版社 , 1998.6 , 252.
〔4〕国家药典委员会.中华人民共和国药典·一部〔S〕.北京:
化学工业出版社 , 2005.185 , 451.
2008 年 6 月 6 日收稿
Determination of luteolin in Herba Lomatogonii by HPLC
WANG Xiu-Mei Bagenna BAI Ming-gang
(College of Mongolian Medicine and pharmacology ,
Inner M ongolia University for the Nationalities , Tong liao 028000)
Abstract:objective:To establish a method for the determinat ion of luteolin in Mongolian medicine Lomatoni-
um rotatum (L.)Fries by HPLC.Method:Determining the luteolin in Mongolian medicine Lomatonium ro ta-
tum (L.)Fries by HPLC on Diamonsil C18(250mm ×4.6mm , 5μm)w ith Methyl-0.4% Phosphoric acid
(55:45 v/v)as a mobile phase and the flow rate is 1.0 ml·min-1 , the detective w aveleng th is 350 nm , the
column temperature is 35℃.Results:The good linear relationship of Luteolin is abtained between 0.052μg-
0.312μg , r=10000.The average recovery is 98.13%, RSD=1.04%(n=6).Conclusion:The method is sim-
ple , rapid , accurate , good re-appearance , and can be used for determining the content of Luteolin in Mongo-
lian medicine Herba Lomatogonii.
Key words:Mongolian medicine;Herba Lomatogonii;Luteolin;HPLC
392009 年 1 月第 1 期　　　　　　　　　　　　　中国民族医药杂志