全 文 ：正交实验法优选鲫鱼胆挥发油提取工艺
周 倩，滕建北＊
（广西中医药大学，广西 南宁５３０００１）
摘 要：目的：研究壮药鲫鱼胆挥发油提取工艺。方法：采用正交实验设计Ｌ９（３４），以提油率为指标，确
定最佳提取工艺条件。结果：药材最佳提取工艺条件为剪碎、浸泡２ｈ，提取５ｈ，加水１２倍。结论：该提
取工艺简便易行。
关键词：鲫鱼胆；挥发油；正交实验
中图分类号：Ｒ２８４．１ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７３－２１９７（２０１５）２１－００２７－０３
ＤＯＩ：１０．１１９５４／ｙｔｃｔｙｙ．２０１５２１０１２
收稿日期：２０１５－０５－２５
基金项目：广西科技厅课题（２０１１ＧＸＮＳＦＦ０１８００６）；广西壮瑶药重点实验室（桂科基字［２０１４］３２号）；壮瑶药协同创新中心
（桂教科研［２０１３］２０号）
作者简介：周倩（１９９０－），女，广西中医药大学硕士研究生，研究方向为中药制剂分析与检验。
通讯简介：滕建北（１９７２－），男，博士，广西中医药大学副教授、硕士生导师，研究方向为中药民族药品种、品质与资源开发。
Ｅ－ｍａｉｌ：ｔｅｎｇｊｉａｎｂｅｉ＠１６３．ｃｏｍ
壮药鲫鱼胆为木犀科植物青藤仔Ｊａｓｍｉｎｕｍ ｎｅｒｖｏｓｕｍ
Ｌｏｕｒ．的茎、叶或花［１］。性凉，味微苦。清湿热，解毒，敛疮，
用于痢疾、疟疾、疮疡肿毒、溃烂不敛［２］。其化学成分主要
有黄铜、挥发油、皂苷等。对鲫鱼胆挥发油的提取条件研究
尚未见报道。本文通过改进《中国药典》挥发油提取方法，
以挥发油提取量为指标，
采用正交实验对鲫鱼胆挥发油提
化合物４：黄色针晶（甲醇）。１ Ｈ－ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭ－
ＳＯ－ｄ６）δ：３．６２（３Ｈ，ｓ，４＇－ＯＣＨ３），６．１７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，
Ｈ－６），６．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，Ｈ－８）；１３Ｃ－ＮＭＲ（１２０ＭＨｚ，
ＤＭＳＯ－ｄ６）：１５２．８（Ｃ－２），１２０．５（Ｃ－３），１７８．９（Ｃ－４），１６１．２
（Ｃ－５），９７．８（Ｃ－６），１６３．４（Ｃ－７），９３．１（Ｃ－８），１５６．２（Ｃ－９），
１０３．２（Ｃ－１０），１２１．７（Ｃ－１＇），１２８．８（Ｃ－２＇），１１２．１（Ｃ－３＇），
１５８．２（Ｃ－４＇），１１３．１（Ｃ－５＇），１２９．６（Ｃ－６＇），５５．５（－ＯＣＨ３）。
与文献［５］报道的数据基本一致，故鉴定为鹰嘴豆芽素Ａ。
化合物 ５：白色粉末 （甲醇）。１ Ｈ－ＮＭＲ （６００ＭＨｚ，
ＣＤＣｌ３）δ：２．９７（２Ｈ，ｍ，Ｈ－３），６．５１（２Ｈ，ｓ，Ｈ－３＇，５＇），１．７９
（３Ｈ，ｓ，４＇－ＣＨ３），１．８３（３Ｈ，ｓ，５＇－ＣＨ３）；１３Ｃ－ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，
１２０ＭＨｚ）：７８．８（Ｃ－２），４３．５（Ｃ－３），１９７．８（Ｃ－４），１６１．２（Ｃ－
５），１０８．４（Ｃ－６），１５８．５（Ｃ－７），１０８．１（Ｃ－８），１６３．２（Ｃ－９），
１０３．４（Ｃ－１０），１１７．３（Ｃ－１＇），１５６．６（Ｃ－２＇），１０４．９（Ｃ－３＇），
１５８．３（Ｃ－４＇），１０９．２（Ｃ－５＇），１２８．６（Ｃ－６＇），２２．８（Ｃ－１＇），１２３．１
（Ｃ－２＇），１３４．９（Ｃ－３＇），１９．４（Ｃ－４＇），２７．３（Ｃ－５＇），２２．６（Ｃ－１＇），
１２３．４（Ｃ－２＇），１３６．３（Ｃ－３＇），１９．２（Ｃ－４＇），２６．５（Ｃ－５＇）。数
据与文献［６］报道基本一致，故鉴定为蔓性千斤拔素Ｄ。
化合物 ６：白色粉末 （甲醇）。１ Ｈ－ＮＭＲ （６００ＭＨｚ，
ＣＤ３ＯＤ）δ：５．４８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．３，Ｈ－６），４．５１（Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．
２Ｈｚ，Ｈ－１＇），３．３２（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝５．８，Ｈ－２＇，３＇），３．４５（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝
４．２Ｈｚ，Ｈ－４＇），３．２４（１Ｈ，ｍ，Ｈ－５＇）；１３ Ｃ－ＮＭＲ （１２０ＭＨｚ，
ＣＤ３ＯＤ）：３６．７（Ｃ－２），３１．５（Ｃ－３），４１．５（Ｃ－４），１３９．１（Ｃ－５），
１２１．３（Ｃ－６），３１．２（Ｃ－７），３１．２（Ｃ－８），４９．９（Ｃ－９），３５．７（Ｃ－
１０），２０．１（Ｃ－１１），３７．９（Ｃ－１２），４２．０（Ｃ－１３），５６．８（Ｃ－１４），２２．
６（Ｃ－１５），２７．７（Ｃ－１６），５５．１（Ｃ－１７），１０．２（Ｃ－１８），１７．９（Ｃ－
１９），３５．４（Ｃ－２０），１８．３（Ｃ－２１），３３．２（Ｃ－２２），２５．４（Ｃ－２３），４４．
９（Ｃ－２４），２８．６（Ｃ－２５），１８．８（Ｃ－２６），１８．５（Ｃ－２７），２１．９（Ｃ－
２８），１１．７（Ｃ－２９），１００．４（Ｃ－１＇），７３．２（Ｃ－２＇），７５．５（Ｃ－３＇），６８．９
（Ｃ－４＇），７６．３（Ｃ－５＇），６１．６（Ｃ－６＇）。与文献［７］数据基本一致，故
鉴定为胡萝卜苷。
参考文献：
［１］ 张丽霞，彭建明，马洁．千斤拔研究进展［Ｊ］．中药材，２００７，３０
（７）：８８７－８９０．
［２］ 冯洁，向诚，梁鸿．丰城鸡血藤异黄酮类成分的研究［Ｊ］．中国
中药杂志，２００７，３２（４）：３２１．
［３］ 张雪，宋启示．锈毛千斤拔根的化学成分研究［Ｊ］．中草药，
２００９，４０（６）：８６５－８６８．
［４］ ＥＵＮ－ＭＩＡＨＮＡ，ＮＯＲＩＯ ＮＡＫＡＭＵＲＡＡ，ＴＥＲＵＡＫＩＡＫＡＯＢ．
Ｐｒｅｎｙｌａｔｅｄ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｆｒｏｍ ｍｏｇｈａｎｉａｐｈｉｌｉｐｐｉｎｅｎｓｉｓ［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏ－
ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００３（６４）：１３８９－１３９４．
［５］ 谌欣．红车轴草异黄酮的分离及生物活性的研究［Ｄ］．武汉：
武汉工业学院，２００８．
［６］ 李华，李凤岚，马小军．千斤拔异戊烯基黄酮研究［Ｃ］．中国药
学会学术年会暨第八届中国药师周论文集，２００８．
［７］ 李文武，丁立生，李伯刚．苎麻根化学成分的初步研究［Ｊ］．中
国中药杂志，１９９６，２１（７）：３２１．
（责任编辑：宋勇刚）
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取条件进行优化，为进一步研究其质量标准提供基础。
１ 材料与仪器
１．１ 材料
鲫鱼胆药材采自广西，经广西中医药大学药用植物园
高级园艺师朱意麟老师鉴定为木犀科植物青藤仔Ｊａｓｍｉ－
ｎｕｍ ｎｅｒｖｏｓｕｍＬｏｕｒ．的茎、叶或花。无水硫酸钠为分析纯。
１．２ 仪器
挥发油提取器（相对密度小于１）；万能粉碎机；ＢＰ２１１Ｄ
电子分析天平（德国赛多利斯公司）；标准筛；ＨＤＭ２０００型
调温恒温电热套，国华牌；ＣＧ－１６Ｗ高速微量离心机（北京医
用离心机厂）。
２ 方法与结果
２．１ 单因素实验
通过前期的实验研究得知，鲫鱼胆挥发油量与鲫鱼胆
药粉的粉碎度、提取时间、浸泡时间等有关，因此首先通过
单因素实验考察鲫鱼胆挥发油的工艺条件。
２．１．１ 提取时间与挥发油量的关系 准确称取已剪碎
的鲫鱼胆１００ｇ，按固液比（１∶１０）加入一定比例的水，室温
下浸泡４ｈ，最后按照不同的提取时间进行水蒸气蒸馏提取。
得到提取时间与挥发油量的关系见图１。
２．１．２ 浸泡时间与挥发油量的关系 原料预先浸泡，主
要是利用水的作用将植物细胞溶胀，降低精油扩散到水中
的阻力，以利于精油的浸出。准确称取已剪碎的鲫鱼胆药
材１００ｇ，按固液比（１∶１０）加入一定比例的水，室温下浸泡
一段时间，再进行水蒸气蒸馏提取４ｈ。得到浸泡时间与挥
发油量的关系如图２。
图１ 提取时间与挥发油量的关系
图２ 浸泡时间与挥发油量的关系
一般情况下，中草药浸泡时间越长，出油率越高，理论
认为浸泡可使植物细胞间隙变大，组织细胞充分膨胀，加速
细胞内、外液动态交换而有利于挥发油的提取［３］。但从图２
可以看出，浸泡１ｈ反而比浸泡３ｈ高，这可能是因为鲫鱼胆
药材提取时广西气温偏高，浸泡时间过长，引起原料发生部
分水解所致。
２．１．３ 加水量与挥发油量的关系 准确称取已剪碎的
鲫鱼胆１００ｇ，按固液比加入一定比例的水，室温下浸泡１ｈ
后再进行水蒸气蒸馏提取４ｈ。得到加水量与挥发油量的关
系如图３所示。
图３ 加水量与挥发油量的关系
由图３可知，加水量在８倍时鲫鱼胆挥发油的提取率最
高，并随加水量的增加，挥发油量逐渐减少，可以认为加水
量过多导致溶液易爆沸，影响提取效果，导致挥发油溢出。
而８倍的加水量又恰好浸没药材，故出油率最佳。
２．１．４ 粉碎度与挥发油量的关系 准确称取已粉碎至
一定粒度的鲫鱼胆１００ｇ，按固液比（１∶８）加入一定比例的
水，室温下浸１ｈ后再进行水蒸气蒸馏提取４ｈ。得到粉碎度
与挥发油量的关系见图４。
图４ 粉碎度与挥发油量的关系
一般情况下，中草药粉末的表面积越大即粉末越细，提
取率越高，但由于鲫鱼胆药材放置时间过久造成挥发油损
失，且药材越细，挥发油吸附作用增强使鲫鱼胆药材粉聚成
团不易过筛，造成挥发油量下降。
２．２ 最佳工艺条件
２．２．１ 正交设计 通过以上的单因素实验结果，以挥发
油提取率为评定指标，选择鲫鱼胆粉碎度（Ａ）、浸泡时间
（Ｂ）、加水量（Ｃ）和提取时间（Ｄ）为考察因素，每个因素３个
水平，选用Ｌ９（３４）正交表，实验安排见表２。
表１ 鲫鱼胆挥发油提取工艺因素水平
水平
Ａ Ｂ Ｃ Ｄ
粉碎度（目） 浸泡时间（ｈ） 加水量（倍） 提取时间（ｈ）
１ ４０ １ ８ ４
２ ５０ ２ １０ ５
３ 剪碎 ３ １２ ６
２．２．２ 正交实验结果 准确称取 鲫鱼胆药材１００ｇ，按照
表１正交设计进行实验，并准确读取挥发油体积。结果见
表２。
通过极差分析可以看出，４个因素中Ａ因素和Ｄ因素
即粉碎度和提取时间对实验结果影响最大，为主要因素，其
影响次序依次为：Ａ＝Ｄ＞Ｂ＞Ｃ，鲫鱼胆挥发油提取的最佳
—８２—
工艺条件为Ａ２Ｂ３Ｃ１Ｄ２，即提取时间５ｈ，浸泡时间３ｈ，加水量
８００ｍＬ，粉碎度为５０目。
表２ 正交实验结果
试验号 Ａ Ｂ Ｃ Ｄ 挥发油得量／ｍＬ
１ １ １ １ １ ０．１８
２ １ ２ ２ ２ ０．１８
３ １ ３ ３ ３ ０．２０
４ ２ １ ２ ３ ０．２０
５ ２ ２ ３ １ ０．１９
６ ２ ３ １ ２ ０．２３
７ ３ １ ３ ２ ０．２１
８ ３ ２ １ ３ ０．２０
９ ３ ３ ２ １ ０．１９
Ｋ１ ０．５６ ０．５９ ０．６１ ０．５６
Ｋ２ ０．６２ ０．５７ ０．５７ ０．６２
Ｋ３ ０．６０ ０．６２ ０．６０ ０．６０
Ｒ ０．０６ ０．０５ ０．０４ ０．０６
通过ＳＰＳＳ软件对实验结果进行方差分析，结果见表
４、表５。
表４ 方差分析
方差来源 离差平方和 自由度ｆ 均方（ＭＳ） Ｆ值 Ｐ
Ａ ０．０００ ２ ０．０００ ０．９７０ ＞０．０５
Ｂ ０．００１ ２ ０．００１ ３．３１０ ＞０．０５
Ｃ ０．０００ ２ ０．０００ ０．８８３ ＞０．０５
Ｄ ０．００１ ２ ０．０００ １．５９８ ＞０．０５
从表４的方差分析结果可知，４个因素均对实验结果无
显著性影响。但从表５的单因素统计量表结果可知，最佳
水平组合是Ａ３Ｂ２Ｃ３Ｄ２，即提取时间５ｈ，浸泡时间为２ｈ，加水
量为１ ２００ｍＬ，粉碎度为剪碎。
２．３ 验证性实验
为了更准确地选择最优条件，结合正交试验结果表２
中测定结果最高的组合Ａ２Ｂ３Ｃ１Ｄ２和通过直观分析及ＳＰＳＳ
软件分析的最佳组合Ａ３Ｂ２Ｃ３Ｄ２，对这两个工艺进行验证性
实验，见表６。
验证性实验表明，Ａ３Ｂ２Ｃ３Ｄ２ 提取效率比 Ａ２Ｂ３Ｃ１Ｄ２ 较
高，所以选择的最优组合为Ａ３Ｂ２Ｃ３Ｄ２，即提取时间５ｈ，浸泡
时间为２ｈ，加水量为１ ２００ｍＬ，粉碎度为剪碎。
３ 讨论
通过正交实验和验证实验表明鲫鱼胆挥发油的提取工
艺是科学可行的。鲫鱼胆最佳的提取工艺是：将鲫鱼胆药
材剪碎，加入蒸馏水１２００ｍＬ，室温下浸泡时间２ｈ，水蒸气
蒸馏５ｈ，在此工艺条件下可得到鲫鱼胆挥发油０．２１ｍＬ。根
据扩散定律：药材粉碎得愈细，浸出效果愈高［４］。但通过本
实验发现，药材粉碎过筛越细，挥发油得率并没有提高，可
能是由于药材放置时间过久，以及在粉碎过筛过程中挥发
油损失所致。
表５ 单因素统计
因素 均值（Ｍ）
标准误差
（ＳＥ）
９５％置信区间
下限 上限
粉碎度Ａ
１ ０．１９３ ０．００４ ０．１８５ ０．２０２
２ ０．１９８ ０．００４ ０．１９０ ０．２０７
３ ０．２０１ ０．００４ ０．１９３ ０．２１０
浸泡时间Ｂ
１ ０．１８９ ０．００４ ０．１８１ ０．１９７
２ ０．２０２ ０．００４ ０．１９４ ０．２１１
３ ０．２０１ ０．００４ ０．１９３ ０．２１０
加水量Ｃ
１ ０．１９７ ０．００４ ０．１８９ ０．２０６
２ ０．１９４ ０．００４ ０．１８５ ０．２０３
３ ０．２０２ ０．００４ ０．１９３ ０．２１０
提取时间Ｄ
１ ０．１９３ ０．００４ ０．１８４ ０．２０２
２ ０．２０３ ０．００４ ０．１９５ ０．２１２
３ ０．１９７ ０．００４ ０．１８８ ０．２０５
表６ 验证性实验 （ｎ＝３）
编号 提取工艺组合 挥发油量（ｍＬ） 平均量（ｍＬ）
０．２０
１ Ａ２Ｂ３Ｃ１Ｄ２ ０．２０ ０．２０
０．１９
０．２１
２ Ａ３Ｂ２Ｃ３Ｄ２ ０．２１ ０．２１
０．２２
参考文献：
［１］ 国家中医药管理局《中华本草》编委会．中华本草［Ｍ］．上海：
上海科学技术出版社，１９９９：１７４－１７５．
［２］ 广西壮族自治区革命委员会卫生局．广西本草选编（上册）
［Ｍ］．南宁：广西人民出版社，１９７４：８２８－８２９．
［３］ 郑勇，张志兰．正交实验法优选豆蔻挥发油提取工艺［Ｊ］．时
珍国医国药，２００６，１７（４）：５９６．
［４］ 张兆旺．中药药剂学［Ｍ］．北京：中国中医药出版社，２００３：９７．
（责任编辑：余 婷）
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