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当归藤抗炎、镇痛及抗凝血有效部位的研究



全 文 :收稿日期:2015-06-08
基金项目:广西中药药效研究重点实验室自主研究课题(K32908)
作者简介:魏中璇(1993-) ,女,在读硕士研究生,专业方向:药物质量控制研究;Tel:18378839627,E-mail:609739708@ qq. com。
* 通讯作者:陈勇,Tel:18978947922,E-mail:cy6381@ 163. com。
当归藤抗炎、镇痛及抗凝血有效部位的研究
魏中璇,刘 鼎,陈 勇* ,叶 信,卢森华
(广西中医药大学药学院,广西 南宁 530001)
摘要 目的:筛选当归藤的抗炎、镇痛及抗凝血有效部位,并对其有效部位进行研究。方法:采用二甲苯致小
鼠耳廓肿胀法、热板法、醋酸扭体法、腹腔毛细血管通透性及抗凝血试验等实验分别筛选出当归藤的抗炎、镇痛及
抗凝血的有效部位,并对其有效部位的作用进行研究。结果:当归藤醇提物正丁醇部位各剂量均有明显的抗炎作
用,其中,高剂量抗炎药效较好;当归藤醇提物石油醚部位中剂量有良好的镇痛作用,且其抗凝血效果最好。结论:
当归藤具有有效的抗炎、镇痛及抗凝血作用,其抗炎有效部位为正丁醇部位,镇痛及抗痛凝血有效部位为石油醚部
位。
关键词 当归藤;抗炎;镇痛
中图分类号:R285. 5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2015)11-2376-05
DOI:10. 13863 / j. issn1001-4454. 2015. 11. 034
当归藤来源于紫金牛科酸藤子属植物当归藤
Embelia parviflora Wall. ex A. DC. 的根与老茎,别名
小花酸藤子、筛箕蔃、土当归等。其味苦、涩,性温,
具有补血、活血、益精壮阳、强腰膝等功效。常用于
治疗血虚诸症、月经不调、闭经、产后虚弱、腰腿痠
痛、跌打骨折等症〔1,2〕,在广西少数民族地区常将其
作为当归使用〔3〕。当归藤还具有温肾补血作用,是
广西特产中成药“桂龙药膏”的原料药材之一。目
前当归藤作为保健食品、天然化妆品的添加剂及抗
氧化保鲜剂,已在食品、医药、化工等领域得到广泛
的应用〔4〕。本文对当归藤的抗炎、镇痛及抗凝血作
用进行相关研究,现将研究结果报道如下。
1 材料与仪器
1. 1 实验动物 SPF 级雄性昆明小鼠,体质量(20
± 2)g,购于广西医科大学实验动物中心,实验动物
生产许可证号:SCXK桂 2009-0001。
1. 2 药物与试剂 当归藤全株 2012 年 6 月购于广
西靖西县,经广西中医药大学郭敏副教授鉴定为紫
金牛科酸藤子属植物当归藤 Embelia parviflora
Wall. ex A. DC. 。选取当归藤的根与老茎,乙醇加热
回流提取 3 次,2 h /次,减压回收溶剂,得乙醇提取
物浸膏,将浸膏加入温水制成混悬液后依次用石油
醚(60 ~ 90 ℃)、乙酸乙酯、正丁醇和水萃取,分别得
到石油醚部位浸膏、乙酸乙酯部位浸膏、正丁醇部位
浸膏、水部位浸膏。二甲苯(国药集团(上海)化学
试剂有限公司);依文思蓝(嘉兴市精博化学试剂有
限公司);生理盐水(广西裕源药业有限公司,批号:
H13050411) ;醋酸(国药集团试剂有限公司,批号:
20120304) ;地塞米松针剂(河南瑞弘制药股份有限
公司,批号:ZH12011) ;罗通定(广东省博罗先锋药
业集团有限公司,批号:20120410) ;云南白药粉(云
南白药集团股份有限公司,批号:1112201) ;PT试剂
盒(上海太阳生物科技技术有限公司,批号:
201211301450) ;APTT 试剂盒(上海太阳生物科技
技术有限公司,批号:2012102510-10) ;TT 试剂盒
(上 海 太 阳 生 物 科 技 技 术 有 限 公 司,批 号:
201301152103)。
1. 3 主要仪器 6 mm 打孔器(得力手握式打孔
器) ;SPQ电子天平(德国赛多利斯科学仪器(北京)
有限公司) ;P1000 型移液器(吉尔森公司) ;8453 紫
外可见分光光度计(美国 Agilent 科技公司) ;TGL-
16g型离心机(上海安亭科学仪器厂) ;YLS-6A 智能
热板仪(山东省医学科学院设备站) ;XZC-2B 自控
度热仪(山东省医学科学院设备站) ;SPQ 电子天平
(德国赛多利斯科学仪器(北京)有限公司);P1000
型移液器(吉尔森公司) ;KB-8001v 半自动凝血仪
(上海康美医疗器械有限公司);HH-S2 数显恒温水
浴锅(金坛市医疗仪器厂)。
2 方法
2. 1 当归藤醇提物抗炎镇痛及抗凝血活性部位筛

2. 1. 1 对小鼠耳肿胀的影响:选取雄性昆明小鼠
60 只,随机分为空白对照组、地塞米松阳性对照组
及当归藤醇提物正丁醇、石油醚、乙酸乙酯、水部位
组总共 6 个组,每组 10 只,灌胃给药,1 次 /d,连续 7
d,给药剂量见表 1。末次给药 45 min 后,将二甲苯
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均匀涂于小鼠右耳两面致肿,左耳作为对照。15
min后脱颈椎处死小鼠,沿耳廓基线剪下两耳,两耳
面对面叠起来,边缘对齐,用直径 6 mm 打孔器分别
在两耳同一部位打下圆耳片,立即电子天平称量质
量,以同一小鼠两耳片质量之差表示肿胀度,并计算
肿胀抑制率。
肿胀抑制率 =模型组肿胀度 -实验组肿胀度
模型组肿胀度
× 100%
2. 1. 2 对小鼠腹腔毛细管通透性的影响:选取雄
性昆明小鼠 60 只,分组与给药方法同“2. 1. 1”项
下。末次给药 40 min 后给各小鼠尾部静脉注射
0. 25% 伊文思兰溶液 10 mL /kg,随即腹腔注射
0. 6%冰醋酸溶液 0. 2 mL /只。20 min 后脱颈椎处
死,暴露腹腔,用 6 mL生理盐水洗涤腹腔,吸取洗涤
液约 6 mL,3 000 r /min离心 15 min,取上清液于 590
nm处用比色法测定光密度 D(λ)。
2. 1. 3 热板法:选取雌性昆明小鼠进行实验,将小
鼠放置于(55 ± 0. 5)℃的热板仪上,以各组小鼠足
底接触热板至出现舔后足(潜伏期 s)作为痛阈指标
并将其记录,弃用 30 s 内不出现舔足的小鼠,挑选
痛阈在 5 ~ 30 s 内的小鼠 60 只用于实验。按上述
方法检测 2 次,2 次间隔时间为 30 min,取 2 次数据
的平均值为给药前痛阈值。将筛选合格的 60 只小
鼠随机分为空白对照组、罗痛定阳性对照组及当归
藤醇提物正丁醇、石油醚、乙酸乙酯、水部位组 6 组,
每组 10 只,灌胃给药,1 次 /d,连续 7 d,末次给药后
30、60、90、120 min 重复检测舔足潜伏期(s),记录
痛阈值。比较给药前后痛阈的变化,并计算痛阈提
高百分率。
痛阈提高百分率 =用药后平均痛阈值 -用药前平均痛阈值
用药前平均痛阈值
× 100%
2. 1. 4 小鼠醋酸扭体实验:动物分组及给药方法
同“2. 1. 3”项下,末次给药 60 min后腹腔注射 0. 6%
冰醋酸溶液(10 mL /kg) ,记录 15 min内小鼠扭体次
数,并按下列公式计算当归藤醇提物的镇痛能力
(抑制率)。
抑制率 =对照组扭体次数 -给药组扭体次数
对照组扭体次数
× 100%
2. 1. 5 抗凝血实验:选取雄性昆明小鼠,随机分为
空白对照组、云南白药阳性对照组和当归藤醇提物
正丁醇、石油醚、乙酸乙酯、水部位组,每组 10 只,灌
胃给药,1 次 /d,连续 7 d,末次给药 1 h后,摘眼球取
血,分离血浆,按试剂盒说明书操作用半自动凝血仪
测定其 PT、APTT、TT。
2. 2 当归藤醇提物抗炎镇痛及抗凝血活性部位作
用研究
2. 2. 1 对小鼠耳肿胀的影响:雄性昆明小鼠 50
只,随机分为空白对照组、地塞米松阳性对照组及当
归藤醇提物正丁醇部位高(63. 67 g /kg)、中(31. 54
g /kg)、低(14. 89 g /kg)剂量组共 5 组,每组 10 只,
实验方法同“2. 1. 1”项下。
2. 2. 2 对小鼠腹腔毛细管通透性的影响:动物分
组及给药方法同“2. 2. 1”项下,检测方法同“2. 1. 2”
项下。
2. 2. 3 热板法:将 50 只雌性昆明小鼠随机分为空
白对照组、罗痛定阳性对照组及当归藤醇提物石油
醚部位高(12. 00 g /kg)、中(5. 99 g /kg)、低(3. 00 g /
kg)剂量组,每组 10 只,实验方法同“2. 1. 3”项下。
2. 2. 4 小鼠醋酸扭体实验:动物分组及给药方法
同“2. 2. 3”项下,检测方法同“2. 1. 4”项下。
2. 2. 5 抗凝血实验:取雄性昆明小鼠 50 只,分为
空白对照组、云南白药阳性对照组及当归藤醇提物
石油醚部位高(12. 00 g /kg)、中(5. 99 g /kg)、低
(3. 00 g /kg)剂量组,每组 10 只,实验方法同
“2. 1. 5”项下。
2. 3 统计学处理 采用 SPSS 19. 0 软件进行统计
学处理,计量资料以 珋x ± s 表示,多组间比较采用方
差分析(F检验),以 P < 0. 05 认为有显著性差异。
3 结果
3. 1 当归藤醇提物抗炎镇痛及抗凝血活性部位筛

3. 1. 1 当归藤醇提物不同极性部位对二甲苯致小
鼠耳肿胀的影响:结果如表 1 所示,与空白对照组比
较,当归藤醇提物正丁醇部位组耳廓肿胀度显著降
低(P < 0. 05)。
3. 1. 2 当归藤醇提物不同极性部位对小鼠腹腔毛
细管通透性的影响:结果如表 2 所示,与空白对照组
比较,当归藤醇提物正丁醇部位组大鼠腹腔毛细管
通透性显著降低(P < 0. 01)。
3. 1. 3 当归藤醇提物不同极性部位对小鼠热板实
验的影响:结果如表 3 所示,与空白对照组比较,当
归藤醇提物石油醚部位组给药后 30、60、90 min 时
痛阈显著升高(P < 0. 01)。
3. 1. 4 当归藤醇提物不同极性部位对小鼠醋酸扭
体实验的影响:结果如表 4 所示,与空白对照组比
较,当归藤醇提物石油醚部位组小鼠扭体次数显著
减少(P < 0. 01)。
3. 1. 5 当归藤醇提物不同极性部位对小鼠 PT、
APTT、TT的影响:结果如表 5 所示,与空白对照组
比较,当归藤醇提物石油醚部位组小鼠 PT、TT 显著
升高(P < 0. 05)。
·7732·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 38 卷第 11 期 2015 年 11 月
表 1 当归藤醇提物不同极性部位对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响(珔x ± s,n =10)
组别 剂量 /(g /kg) 耳廓肿胀度 /mg 抑制率 /%
空白对照组 - 3. 52 ± 1. 23 -
地塞米松组 0. 01 1. 77 ± 0. 81** 49. 72
当归藤醇提物石油醚部位组 5. 99 3. 70 ± 1. 31 - 4. 26
当归藤醇提物乙酸乙酯部位组 15. 21 3. 44 ± 1. 38 8. 53
当归藤醇提物正丁醇部位组 31. 54 2. 67 ± 0. 86** 24. 15
当归藤醇提物水部位组 7. 15 3. 50 ± 1. 35 2. 27
注:与空白对照组比较,**P < 0. 01
表 2 当归藤醇提物不同极性部位对小鼠腹腔毛细管通透性的影响(珔x ± s,n =10)
组别 剂量 /(g /kg) 腹腔液 D(λ)值 抑制率 /%
空白对照组 - 0. 248 ± 0. 065 -
地塞米松组 0. 01 0. 138 ± 0. 051** 44. 35
当归藤醇提物石油醚部位组 5. 99 0. 243 ± 0. 057 6. 11
当归藤醇提物乙酸乙酯部位组 15. 21 0. 247 ± 0. 042 4. 32
当归藤醇提物正丁醇部位组 31. 54 0. 165 ± 0. 049** 33. 47
当归藤醇提物水部位组 7. 15 0. 232 ± 0. 051 8. 21
注:与空白对照组比较,**P < 0. 01
表 3 当归藤醇提物不同极性部位对小鼠热板实验的影响(珔x ± s,n =10)
组别
剂量 /
(g /kg)
给药前
痛阈 / s
给药后痛阈 / s
30 min 60 min 90 min 120 min
抑制率 /%
空白对照组 - 9. 5 ± 3. 5 9. 7 ± 3. 5 9. 9 ± 3. 3 10. 4 ± 4. 4 9. 9 ± 3. 8 -
罗痛定组 0. 06 9. 2 ± 3. 3 10. 7 ± 3. 6* 14. 7 ± 3. 1** 11. 1 ± 4. 2** 9. 1 ± 4. 5 57. 90
当归藤醇提物石油醚部位组 5. 99 9. 7 ± 3. 8 10. 8 ± 3. 1* 13. 0 ± 4. 2* 11. 5 ± 3. 2* 9. 4 ± 3. 5 31. 31
当归藤醇提物乙酸乙酯部位组 15. 21 10. 3 ± 3. 7 9. 9 ± 3. 3 10. 7 ± 3. 6 10. 6 ± 4. 2 10. 3 ± 4. 8 4. 21
当归藤醇提物正丁醇部位组 31. 54 10. 1 ± 4. 1 10. 3 ± 3. 5 9. 8 ± 2. 8 10. 5 ± 4. 1 10. 2 ± 3. 6 2. 47
当归藤醇提物水部位组 7. 15 8. 9 ± 3. 4 9. 3 ± 3. 5 9. 8 ± 2. 8 10. 2 ± 4. 1 9. 2 ± 3. 6 8. 74
注:与空白对照组比较,* P < 0. 05,**P < 0. 01
表 4 当归藤醇提物不同极性部位对小鼠醋酸扭体实验的影响(珔x ± s,n =10)
组别 剂量 /(g /kg) 扭体次数 /次 抑制率 /%
空白对照组 - 18. 8 ± 4. 2 -
罗痛定组 0. 06 7. 3 ± 3. 2** 61. 17
当归藤醇提物石油醚部位组 5. 99 12. 1 ± 4. 4** 35. 63
当归藤醇提物乙酸乙酯部位组 15. 21 17. 4 ± 5. 1 8. 42
当归藤醇提物正丁醇部位组 31. 54 19. 4 ± 3. 3 - 4. 84
当归藤醇提物水部位组 7. 15 18. 5 ± 3. 7 3. 78
注:与空白对照组比较,**P < 0. 01
表 5 当归藤醇提物不同极性部位对小鼠 PT、APTT、TT的影响(珔x ± s,n =10)
组别 剂量 /(g /kg) PT /s APTT /s TT /s
空白对照组 - 14. 3 ± 1. 6 28. 5 ± 7. 1 18. 9 ± 1. 7
云南白药组 2. 4 × 10 -3 21. 6 ± 1. 4** 41. 6 ± 4. 4* 22. 8 ± 1. 8*
当归藤醇提物石油醚部位组 5. 99 18. 2 ± 1. 5* 27. 7 ± 5. 7 21. 4 ± 1. 4*
当归藤醇提物乙酸乙酯部位组 15. 21 12. 7 ± 1. 2 32. 9 ± 4. 6 18. 7 ± 1. 6
当归藤醇提物正丁醇部位组 31. 54 13. 5 ± 1. 8 29. 5 ± 5. 5 17. 9 ± 1. 7
当归藤醇提物水部位组 7. 15 13. 60 ± 2. 1 28. 5 ± 6. 3 18. 8 ± 2. 0
注:与空白对照组比较,* P < 0. 05,**P < 0. 01
·8732· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 38 卷第 11 期 2015 年 11 月
3. 2 当归藤醇提物抗炎镇痛及抗凝血活性部位作
用研究
3. 2. 1 当归藤醇提物正丁醇部位对二甲苯致小鼠
耳肿胀的影响:结果如表 6 所示,与空白对照组比
较,当归藤醇提物正丁醇部位高、中剂量组小鼠耳廓
肿胀度显著降低(P < 0. 05 或 P < 0. 01)。
3. 2. 2 当归藤醇提物正丁醇部位对小鼠腹腔毛细
管通透性的影响:结果如表 7 所示,与空白对照组比
较,当归藤醇提物正丁醇部位各剂量组小鼠腹腔毛
细管通透性均显著降低(P < 0. 05)。
表 6 当归藤醇提物正丁醇部位对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响(珔x ± s,n =10)
组别 剂量 /(g /kg) 耳廓肿胀度 /mg 抑制率 /%
空白对照组 - 4. 20 ± 1. 25 -
地塞米松组 0. 01 2. 01 ± 0. 93** 52. 14
当归藤醇提物正丁醇部位高剂量组 63. 67 2. 51 ± 1. 36** 40. 24
当归藤醇提物正丁醇部位中剂量组 31. 54 3. 26 ± 1. 41* 22. 38
当归藤醇提物正丁醇部位低剂量组 14. 89 4. 11 ± 1. 53 7. 14
注:与空白对照组比较,* P < 0. 05,**P < 0. 01
表 7 当归藤醇提物正丁醇部位对小鼠腹腔毛细管通透性的影响(珔x ± s,n =10)
组别 剂量 /(g /kg) 腹腔液 D(λ)值 抑制率 /%
空白对照组 - 0. 252 ± 0. 042 -
地塞米松组 0. 01 0. 132 ± 0. 051** 47. 61
当归藤醇提物正丁醇部位高剂量组 63. 67 0. 149 ± 0. 035* 40. 87
当归藤醇提物正丁醇部位中剂量组 31. 54 0. 163 ± 0. 042* 35. 32
当归藤醇提物正丁醇部位低剂量组 14. 89 0. 191 ± 0. 049* 24. 21
注:与空白对照组比较,* P < 0. 05,**P < 0. 01
3. 2. 3 当归藤醇提物石油醚部位对小鼠热板实验
的影响:结果如表 8 所示,与空白对照组比较,当归
藤醇提物石油醚部位中剂量组小鼠在给药后 30、60
min痛阈显著升高(P < 0. 05),石油醚部位低剂量组
小鼠在给药后 30、60、90 min 痛阈显著升高(P <
0. 05 或 P < 0. 01)。
表 8 当归藤醇提物石油醚部位对小鼠热板实验的影响(珔x ± s,n =10)
组别
剂量 /
(g /kg)
给药前
痛阈 / s
给药后痛阈 / s
30 min 60 min 90 min 120 min
抑制率 /%
空白对照组 - 8. 9 ± 2. 5 8. 7 ± 3. 2 8. 9 ± 3. 7 9. 4 ± 3. 4 10. 5 ± 2. 8 -
罗痛定组 2. 4 × 10 -3 8. 3 ± 2. 3 9. 7 ± 3. 6* 14. 1 ± 3. 1** 11. 1 ± 4. 2** 9. 1 ± 2. 5 61. 01
当归藤醇提物石油醚部位高剂量组 12. 00 8. 5 ± 3. 1 9. 0 ± 3. 1 9. 2 ± 3. 2 8. 5 ± 3. 2 8. 9 ± 3. 5 15. 84
当归藤醇提物石油醚部位中剂量组 5. 99 9. 1 ± 2. 7 9. 9 ± 3. 3* 11. 2 ± 3. 6* 9. 5 ± 4. 2 8. 3 ± 4. 8 29. 03
当归藤醇提物石油醚部位低剂量组 3. 00 8. 8 ± 3. 5 10. 3 ± 3. 5* 12. 3 ± 3. 8** 10. 5 ± 4. 1* 8. 2 ± 3. 6 40. 42
注:与空白对照组比较,* P < 0. 05,**P < 0. 01
3. 2. 4 当归藤醇提物石油醚部位对小鼠醋酸扭体
实验的影响:结果如表 9 所示,与空白对照组比较,
当归藤醇提物石油醚部位各剂量组小鼠扭体次数均
显著减少(P < 0. 01)。
3. 2. 5 当归藤醇提物石油醚部位对小鼠 PT、
APTT、TT的影响:结果如表 10 所示,与空白对照组
比较,当归藤醇提物石油醚部位高、中剂量组小鼠
PT、APTT、TT均显著升高(P < 0. 05)。
4 讨论
本文中抗炎实验采用了二甲苯致小鼠耳廓肿胀
表 9 当归藤醇提物石油醚部位对小鼠醋酸扭体实验的影响(珔x ± s,n =10)
组别 剂量 /(g /kg) 扭体次数 /次 抑制率 /%
空白对照组 - 17. 3 ± 3. 3 -
罗痛定组 2. 4 × 10 -3 7. 7 ± 1. 4** 55. 55
当归藤醇提物石油醚部位高剂量组 12. 00 12. 1 ± 2. 7** 30. 06
当归藤醇提物石油醚部位中剂量组 5. 99 10. 8 ± 1. 9** 37. 28
当归藤醇提物石油醚部位低剂量组 3. 00 12. 4 ± 2. 0** 28. 24
注:与空白对照组比较,**P < 0. 01
·9732·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 38 卷第 11 期 2015 年 11 月
表 10 当归藤醇提物石油醚部位对小鼠 PT、APTT、TT的影响(珔x ± s,n =10)
组别 剂量 /(g /kg) PT /s APTT /s TT /s
空白对照组 - 14. 3 ± 1. 6 26. 5 ± 3. 6 19. 0 ± 1. 7
云南白药组 2. 4 × 10 -3 21. 6 ± 1. 4** 42. 3 ± 3. 1** 23. 2 ± 1. 8**
当归藤醇提物石油醚部位高剂量组 12. 00 16. 1 ± 1. 5* 28. 7 ± 3. 2* 20. 3 ± 1. 4*
当归藤醇提物石油醚部位中剂量组 5. 99 18. 9 ± 1. 2* 39. 6 ± 2. 6* 22. 7 ± 1. 6*
当归藤醇提物石油醚部位低剂量组 3. 00 15. 5 ± 1. 8 27. 0 ± 2. 8 19. 9 ± 1. 7
注:与空白对照组比较,* P < 0. 05,**P < 0. 01
和醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性改变两种模型。
结果表明,当归藤醇提物正丁醇部位有较好抗炎作
用;其高、中剂量对二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀有明
显的抑制作用;冰醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透
性的实验中,正丁醇各剂量均有明显的抗炎作用,其
中,高剂量作用最强。以上结果表明,当归藤正丁醇
部位具有较好的抗炎作用,为进一步研究其抗炎机
制提供了实验基础。
本研究中使用的小鼠醋酸扭体法和热板法是两
种经典的镇痛实验模型〔5〕,小鼠热板法实验中,石
油醚部位中、低剂量均有一定镇痛作用,低剂量药效
最好;小鼠扭体实验中,以石油醚中剂量效果最好。
以上结果表明,当归藤石油醚部位具有较好镇痛作
用。
本文抗凝血实验中选用凝血四项中的 PT、
APTT、TT作为检测指标,结果显示当归藤石油醚部
位具有抗凝血作用;在低浓度时对凝血酶原时间
(PT)和活化部分凝血酶时间(APTT)都有一定延长
作用,但高剂量不仅无延长作用甚至还有一定程度
缩短,以中剂量的药物作用最强,其抗凝血作用的机
制仍需要进一步研究。
参 考 文 献
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·0832· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 38 卷第 11 期 2015 年 11 月