全 文 ：2980提示为-CH3 的伸缩振动 ,1620 , 1580 , 1500 提示
为苯环的骨架振动 。1H-NMR(DMSO , δppm):7.04
(1H ,d), 6.70(1H ,m), 6.60(1H ,d)为三个芳氢 ,提示
为三取代;4.02(1H , s)提示为-OH 峰;2.80(1H)被裂
分为七重峰 ,说明有两个-CH3 与之相连;2.24(3H ,
s)提示为一个与本环相连的-CH3 峰 ,1.22(6H ,d)为
两个等价的-CH3 被相邻 C上的一个 H 裂分为两重
峰 ,提示有一个异丙基存在 。MS(m/e):150[M+]
(41.29)。其UV 、IR 、1H-NMR 、MS与香荆芥酚标准品
图谱一致 ,故鉴定为香荆芥酚 。
化合物 Ⅲ:黄色油状物 , 分子式:C11 H16 O。
UVλMeOHMax (nm):202 、273 ,提示为苯环的 E2 和 B 吸收
带。IRνKBrmax(cm-1):2850 ～ 2970提示为-CH3 的伸缩振
动 ,1610 ,1580 ,1500提示为苯环的骨架振动;1250提
示为醚键吸收峰 。1H-NMR(DMSO , δppm):7.04(1H ,
d), 6.75(1H ,m),6.65(1H , d)为三个芳氢 ,提示为三
取代;3.81(3H , s)提示有甲氧基存在;3.22(1H)被裂
分为七重峰 ,说明有两个-CH3 与之相连;2.25(3H ,
s)提示为一个与苯环相连的-CH3 峰 , 1.22(6H , d)两
个等价的-CH3 被相邻C 上的一个 H裂分为两重峰 ,
提示有一个异丙基存在 。MS(m/e):164 [ M+]
(16.21)。综合分析 ,鉴定为香荆芥酚甲醚 。
参 考 文 献
1 　中国科学院北京植物所.中国高等植物图鉴(第三册).
北京:科学出版社 , 1974∶680
2 　国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部).北京:
人民卫生出版社 , 1977∶103
(2003-03-28收稿)
狗肝菜多糖含量的测定
冯小映　周　诚　黄　恩　林　颖　陈自泓
(广州中医药大学 ,广州 510405)
　　狗肝菜为爵床科植物狗肝菜 Dicliptera chinensis
(L.)Nees的全草 ,其味苦 、性寒 ,具有清热 、凉血 、利
尿 、解毒等功效 ,临床常用于治疗热病斑疹 、便血 、溺
血 、小便小利 、肿毒疔疮等证。据文献报道 ,狗肝菜
主要含有多糖 、有机酸 、氨基酸等物质〔1〕 。笔者对狗
肝菜中多糖含量进行了测定 ,为利用狗肝菜植物资
源提供了依据。
1 　仪器 、试剂与样品
仪器:752紫外光栅分光光度计(上海第三分析
制造厂);CQ-200超声振荡器(上海音波声电科技公
司);试剂:无水葡萄糖(批号:20010408 ,广东汕头新
宁化工厂 , AR级);其余试剂均为国产 AR级 。样
品:狗肝菜采自广州华南植物所 ,经周诚鉴定为爵床
科植物狗肝菜 Dicliptera chinensis(L.)Nees的全草。
2 　方法与结果
2.1 　狗肝菜多糖的提取与精制　称取狗肝菜粗粉
50 g ,置圆底烧瓶中 ,加石油醚(60 ～ 90℃)400 ml ,浸
泡2 h ,回流提取1 h ,滤过 ,滤渣挥干溶媒 ,以80%乙
醇400 ml回流提取 2次 ,每次 1 h ,滤过 ,滤渣置圆底
烧瓶中 ,加蒸馏水 600 ml浸泡 1 h 后回流提取 1 h ,
滤过 ,再加蒸馏水400ml回流提取1 h ,滤过 ,滤液合
并 ,浓缩至 200 ml ,Sevage 法除蛋白后加 95%乙醇使
含醇 80%,静置过夜 ,抽滤 ,滤渣以无水乙醇 、丙酮
依次洗涤多次 ,得精制多糖 ,60℃烘干备用。
2.2 　苯酚试液的配制　取苯酚 100 g ,加铝片 0.1 g
和碳酸氢钠 0.05 g ,蒸馏 ,收集 182℃馏分。称取 5
g ,加水溶解 ,定容于 100 ml 棕色容量瓶(临用前新
配)。
2.3 　测定波长的选择 　精密吸取 0.02 mol/ml葡
萄糖溶液2.0 ml ,置 10 ml具塞试管中 ,加苯酚试液
1.0 ml混匀 ,加浓硫酸 5.0 ml ,混匀 ,放置 15 min ,置
40℃水浴中加热 10 min ,取出放置 15 min ,以蒸馏水
同法操作为空白 ,在460 ～ 510 nm测定吸收度 ,确定
最大吸收波长为 488 nm。
2.4 　标准曲线的制备　精密称取约 105℃干燥至
恒重的无水葡萄糖505.6 mg ,置50 ml容量瓶中加水
溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,得对照品溶液备用。取该
溶液分别稀释成 0.005056 、0.010112 、0.030336 、
0.05056 、0.070784 mg/ml的 5个不同浓度的对照品
溶液。精密吸取上述溶液各 2.0 ml置 10 ml的具塞
试管中 ,加入苯酚 1.0 ml混匀 ,再迅速加入浓硫酸
5.0 ml混匀 ,放置 50 min后置 40℃水浴中加热 10
min ,取出放置 15 min ,以蒸馏水同法操作为空白 ,照
分光光度法在 488 nm 处测定吸收度。以吸收度为
纵坐标 ,标准液浓度(mg/ml)为横坐标 , 回归得方
程:A=0.03882+11.8067C , r=0.9998。
2.5 　换算因素的测定　取 60℃干燥至恒重的精制
狗肝菜多糖约10 mg ,精密称定 ,置 50 ml容量瓶中 ,
·643·中药材第26卷第 9 期 2003 年 9月
DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2003.09.017
加水溶解并稀释至刻度 ,摇匀 。精密吸取该溶液
2.0 ml ,照标准曲线制备项下方法 ,自“加苯酚 1.0
ml”起 ,依法测定吸收度 ,并按下式计算换算因素:f
=Cs/C(Cs 为多糖液浓度 ,C 为多糖液中葡萄糖浓
度),经计算 , f=5.88。
2.6 　稳定性试验　取样品溶液 、标准品溶液及精
制多糖溶液各 2.0 ml ,照标准曲线制备项下方法 ,自
“加苯酚 1.0 ml”起 ,依法测定吸收度 ,并分别于 0 、5 、
10 、15 、20 、25 、30 、35 、40 、50 、60 min测定 ,样品溶液在
1 h内稳定性良好 。
2.7 　重现性试验　取药材粉末 6份 ,按样品测定
项下操作 ,测定吸收度 ,其 RSD=4.65%(n=6)。
2.8 　回收率试验　取药材粉末 6份 ,每份约0.1 g ,
精密称定 ,精密加入精制多糖约 15 mg ,按样品测定
项下操作 ,测定吸收度 ,计算回收率 。平均回收率为
99.57%,RSD为 1.89%(n=6)。
2.9 　样品测定　取样品粉末(20目)约 0.2 g 共 3
份 ,精密称定 ,加 80%乙醇 100 ml ,超声振荡提取 20
min ,过滤 ,滤渣用热 80%乙醇洗涤 ,挥干乙醇后加
蒸馏水 100ml超声振荡提取20 min ,过滤 ,滤渣再加
80 ml蒸馏水超声振荡提取 20 min ,过滤 ,合并滤液 ,
残渣用热水洗涤 ,洗液并入提取液中 ,待冷后转移于
250 ml容量瓶 ,加蒸馏水稀释至刻度作供试品溶液。
精密吸取2.0 ml供试品溶液 ,置 10 ml具塞试管中 ,
按“标准曲线”项下方法自“加苯酚 1.0 ml”起 ,依法
操作 ,样品中多糖含量为 5.23% 。
参 考 文 献
1　江苏新医学院.中药大辞典.上海:上海人民出版社 ,
1977∶1424
(2003-05-21收稿)
·药理·
益骨胶囊对成骨细胞增殖影响的时效及量效关系研究
舒晓春1　张荣华2　彭柯萍2　朱晓峰2　蔡　宇2
(1.中山大学附属第五医院 ,珠海 519000 , 2.暨南大学 ,广州 510632)
　　摘要　目的:运用中药血清药理学方法 , 观察益骨胶囊含药血清对新生大鼠颅骨成骨细胞(OB)体外增殖的影
响 ,并探讨用于 OB药效观察的益骨胶囊含药血清制备条件。方法:雌性 12 月龄 SD大鼠 80只 , 随机分为生理盐水
组 、益骨胶囊低剂量(11.6 g/kg)、中剂量(34.8 g/kg)、高剂量(104.4 g/kg)组 ,每日灌胃一次 ,连续 12 天 , 分别在灌胃
后的 0.5 h、1 h、1.5 h、2 h 采血 , 分离血清 ,用含不同浓度益骨胶囊的血清培养 SD新生大鼠颅骨 OB ,MTT 法检测细
胞增殖情况。结果:末次灌胃后 1.5 h采血组的吸收度(A)值明显高于各组其它时间(P<0.05);不同剂量各浓度的
益骨胶囊含药血清对体外培养的OB 增殖均有显著的促进作用 , 其中以高剂量组的稀释比为 25%的血清浓度最佳。
结论:益骨胶囊含药血清对 OB增殖具有明显的促进作用;益骨胶囊用于 OB药效观察的大鼠含药血清制备条件以
人等效剂量 9倍连续 12 天灌胃 、末次灌胃后1.5 h 采血 ,血清添加浓度以 25%为宜。
关键词　益骨胶囊　血清药理学　成骨细胞增殖　时效　量效
　　既往动物试验和临床观察发现益骨胶囊能够有
效预防和治疗骨质疏松症〔1 、2〕 。本研究将不同浓度
益骨胶囊提取液灌胃 SD大鼠 ,不同时间采集大鼠
血清 ,按不同浓度添加至 SD 新生大鼠颅骨成骨细
胞体外培养体系 ,以探讨益骨胶囊含药血清对成骨
细胞增殖影响的时效和量效关系。
1 　材料
1.1 　实验动物　12月龄雌性 SD大鼠 80只 ,体重
315±37 g;24 h内SD新生鼠 ,均由中山医科大学动
物试验中心提供(合格证号:2001A039)。
1.2 　实验药物　淫羊藿 、当归 、龟板等由深圳三九
医药股份有限公司提供 。
1.3 　主要试剂　DMEM 、0.25%胰蛋白酶为 Gibco
公司产品 , Ⅱ型胶原酶和 DMSO 为 Sigma公司产品 ,
L-谷氨酰胺为华美生物工程公司产品 ,胎牛血清为
杭州四季青生物制品公司产品 ,青霉素 、链霉素为上
海试剂一厂产品 ,MTT 为 Fluka公司产品 。
1.4 　主要仪器　倒置显微镜(日本 Olympus),酶标
仪(美国 BIO-RAD), 二氧化碳孵育箱(德国 Her-
aeus),冷冻高速离心机(Hittech),超净工作台(上海
净化设备厂),细胞培养板(Costar),细胞培养瓶(美
国Gibco)等 。
·644· 中药材第 26 卷第 9期 2003年 9 月