全 文 ：应 用 生 态 学 报

年 月 第 ! 卷 第 ! 期
∀# ∃% & ∋ & ()∗ + % , − ). , //− ∃& 0 & ∀) − ) 1 2 , 3 45
 
, ! 6! 7 8
9 :一
9 9
重金属污染黑土中固氮菌及反硝化
菌作用强度的测定
王淑芳 胡连生 纪有海 王玉兰 姚德明
6中国科学院沈阳应用生态研究所 , 沈阳

; ;
7
【摘要】
用强度 <
的途径 。
关键词
木文采用气相色谱法同时测定了重金属∀ = 、 , > 、 /?和 ≅ Α污染黑土中固氮菌及反硝化菌的作
为准确、 快速地提出土壤中≅ = 、 , > 、 / ? 和 ≅ Α 等重金属毒害土壤微生物临界指标开辟了新
土壤微生物 重金属 临界毒害浓度 气相色谱法
, Β ΧΔΕ Φ ΓΦ ΧΒ Φ > ΓΧ5 Ε Η Φ ΓΧΙ Ε ϑ Β Φ 一ΗΓΚ ΓΦ ϑ 4 Φ = =Β Φ ΓΧ ΙΓΗ5ΓΦ ϑ ? 4 Β Χ Β Ι Γ4 ΓΦ ΒΛ Β Ι Φ Ε Μ Β Ν Ο Ε ΔΔΑ ΧΒ = ?5
ΛΒ 4 Π5 Ν Β Χ4 Δ> · Θ 4 Φ ϑ ∋ Λ Α Η4 Φ ϑ , # Α − Γ4 Φ >Λ Β Φ ϑ , ( Γ 2 Ε 让Λ 4 Γ, Θ 4 Φ ϑ 2 Α Δ4 Φ 4 Φ = 2 4 Ε 0 Β Ν ΓΦ ϑ
6∃Φ > Χ ΓΧΑ ΧΒ Ε Η , / ΔΓΒ = & Β Ε ΔΕ ϑ 5 , , Β 4 = 6 Ν Γ4 ∋ ΓΦ ΓΒ 4 , ∋ Λ Β Φ 54 Φ ϑ

; ;
7 < 一 ∀Λ ΓΦ < ( · ,/ ∃< & Β Ε Δ < ,

 
, ! 6! 7 8
9 :一
9 9 <
∃Φ ΧΛ Γ> 那Ο Β Ι , ΧΛ Β 4 ≅ Χ ΓΕ Φ ΓΦ Χ≅ Φ > ΓΧ5 Ε Η Φ ΓΧΙ Ε ϑ Β Φ 一 ΗΓΚ ΓΦ ϑ 4 Φ = =Β Φ ΓΧΙ ΓΗ5 ΓΦ ϑ ?4 Β ΧΒΙ Γ4 ΓΦ ΒΛ Β Ι Φ Ε Ρ
Μ Β Ν Ο Ε ΔΔΑ ΧΒ = ? 5 Λ Β4 Π 5 Ν Β Χ4 Δ> Γ> =‘ΧΒ ΙΝ ΓΦ Β = Σ ΓΧΛ ϑ 4 > Β Λ Ι Ε Ν 4 ΧΕ ϑ Ι4/Λ ΓΒ Ν Β ΧΛ Ε = 4 Χ ΧΛ Β > 4 Ν Β
Χ ΓΝ Β < , Φ Β Κ 4 Β Χ 4 Φ = Η4 > Χ Φ ΒΣ Ν Β ΧΛ Ε = ΗΕ Ι = Β ΗΓΦ ΓΦ ϑ Β ΙΓΧΓ≅4 Δ ΓΦ = ΓΒ 4 ΧΕ Ι Ε Η ;

Ν ΓΒ ΙΕ ΕΙ ϑ 4 Φ Γ> Ν >
/Ε ΔΔΑ ΧΒ = ?5 Λ Β4 Π 5 Ν Β兮4 Δ> > Α ≅Λ 4 > ∀ = , , > , / ? 4 Φ = ∀ Α
/Ι Ε Π Γ= Β = ·
Τ Β5 Σ Ε Ι = > ;

Ν ΓΒ Ι Ε Ε Ι ϑ 4 Φ Γ> Ν , ∃ΔΒ4 、5 Ν Β Χ4 Δ> , ∀ Ι ΓΧ ΓΒ 4 Δ Χ Ε Κ ΓΒ Β Ε Φ Β Β Φ ΧΙ 4 Χ ΓΕ Φ , 1 4 > ΒΛ Ι Ε Ν 4 Ρ
ΧΕ ϑ Ι4 /Λ ΓΒ Ν Β ΧΛ Ε = <

前 言
土壤中固氮菌和反硝化菌的活动在土壤氮
素平衡过程中起着重要作用 < 固氮菌的作用可
增加土壤中氮的含量 , 而反硝化菌的作用能引
起氮素流失和挥发 < 因此 , 在重金属污染土壤
环境的研究中, 准确、 快速地测定 固氮菌及反
硝化菌的作用强度是十分重要的 <
有关土壤固氮菌与反硝化菌作用强度的测
定 , 一般多用比色法和气相 色谱法分别进行 <
近年来国外在论证按常规的土壤固氮作用测量
时 , Υ Β Ι ϑ ΒΙ >Β Φ 〔‘’等提 出过用气相 色谱 法 同
时测定同一土壤系统中所产生的固氮菌和反硝
化菌的作用强度 <
本文利用气相 色谱法同时测定 了 重 金 属
∀ = 、 , > 、 /?及∀ Α 污染黑土中固氮菌和反硝化
菌的作用强度ς 叙述了供试材料和气相色谱条
件ς 讨论了测试方法的可用性和重复性 ς 找出
了两种菌作用强度与重金属含量的相关性 < 并
按目前国内外常用的关于确定土壤中重金属的
临界毒害浓度的有关规定为基准 ‘ 一 9 ’ , 求 得
了所试重金属∀ = 、 , > 、 /? 及∀Α 影响土壤微生
物生化过程的临界毒害浓度 < 为重金属毒害土
壤微生物 , 提供了一种快速而可靠 的 侧定 方
法 , 其测试结果可做为评价土壤环 境 质 量 的
依据 。
本文于
  。年 Ω 月

日收到 <
材料与方法
供试材料
将不同含量的∀ = 、 , > 、 /?及∀ Α等重金属化合物
∀Λ ΓΦ < ( < ,即
。 & Β Ε Δ < , ! 8 ! 6
 
夕
! 期 王淑芳等 8 重金属污染黑土中固氮菌及反硝化菌作用强度的测定
9
表
土坡中添加重金属化合物的种类及其含 Χ
Ξ 4卜<
∀ Ε Ν Ο Ε Φ Β Φ Χ 4 Φ = Β Ε Φ ΧΒ Φ Χ Ε Η Λ Β 4 Π 5 Ν Β Χ4 Δ Β Ε Ν Ο Ε Α Φ = > 4 = = Β = ΧΕ ;

ΧΒ >Χ Β =
化合物种类
Τ ΓΦ = > Ε Η ΒΕ Ν Ο Ε Α Φ = >
∀= ∀
! · ! , # ! ;
% 4 Ψ #, >) 一 9 # Ψ)
/? 6∀ ! # Ζ ; ! 7 ! · Ζ# ! ;
∀ Α ∋) ‘· # ! ;
土壤 中添加 量
0 Ε > 4 ϑ Β 6Ο /Ν 7
; ,
; ,
; Ρ
; Ρ
; 。 ,

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! ; Ρ
; ,
Δ ,

,
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Ζ ,
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Ζ ; ,

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Ω ; ; ,
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Ω ; Ρ
Ζ ; ; ; ,
[ ; ; Ρ

; ; , ! ; ;

; ;
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 ; ; ,
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∀=,>/?Α
置于黑土中做盆栽试验 < 其添加的重金属化合物的种
类及浓度如表
所示 < 盆栽种植大豆及小麦 , 在作物
成熟收获时取土壤样品供试验 <
! < ! 试验方法与步骤
固氮菌的固氮酶具有还原乙炔成为乙 烯 的 作 用
固氮酶6如 ∀ Ψ # Ψ— 7 ∀ Ψ# ‘7 并成当量关系 6‘ , , , ‘7 <因此 , 乙炔还原成乙烯的量 , 可用来间接地表示固氮菌固氮作用的强度 <
土壤中反硝化菌的反硝化作用过程能产生% Ψ ) ,
乙炔能抑制% ! ; 进一步还原成% 8 ‘如 % ) 万令% ! ; Ρ
∀ Ψ# Ψ阻断还原6% Ε 7 7 % Ψ Ε— 、% Ψ 7 , 故测定 % ! ; 累积量 , 可表示反硝 化 菌 反 硝化作用的强 度 6Μ , ‘7 <而且上述的这两个过程可以在同一土壤系统中同时产生 , 因此可采用气相色谱法同时测出在有乙炔状态下的同一土壤系统中所产生的∀ Ψ# ς 和 % Ψ) 的量 <
其测定方法是先将供试土壤样品进行待测的预处
理及培养 < 在测定土样中加入定量的葡萄搪做为固氮
菌和反硝化菌的活动碳源 , 之后将盛有待测样品瓶密
封并注入定量的乙炔 , 放置 Ζ 。℃下培养
Ω 一!: 小时 <
从测样瓶中取培养好的气体样品
; 川 , 注人气相色
谱仪中 , 由柱 ∃ 分离、 . ∀ 0 检测% Ψ ) 和由柱 ∃ 分离、
.∃ 0 检测∀ 8 # ‘ , 经记录仪指示其反应生成的 ∀ Ψ # ‘和
% Ψ Ε 的峰高6Ν Ν 7 , 土 ∴ !: 小时 , 分别表示所得土壤
中的固氮菌、 反硝化菌的作用强度 Δ!, ‘] <
! < Ζ 气相色谱条件
! < Ζ <
仪器 为美国产 % Α Β ΔΒ 4 Ι 一Β Λ Γ≅ 4 ϑ Ε > Ε ΕΕ型气
相色谱仪 < 检测器为& ∀ 0 与.∃0 < 为实现一次进样同
时测定微量的 ∀ Ψ# :与 % Ψ) , 需将仪器的进样口 、 气
路系统 , 色谱柱 、 检测器与记录系统联接成图
所示
的状态 。
! < Ζ < ! 色谱条件 色谱柱 8 柱 ∃ 为小Ζ Ν Ν Κ
>Ε ΕΝ Ν
的玻璃柱 , 内装 ;一 ; 日 / Ε Ι4 Ο 4 ⊥ _ ς 柱 ∃ 为 小ΖΝ Ν
图
装置图
.
 <
& Κ Ο Β Ι ΓΝ Β Φ Χ4 Δ >Β Χ一 Α Ο 。
又 ! 4Ε ΕΝ Ν 的玻璃柱 , 内装Ω ;一 ; 目1 0 Κ 一 ; ! ς 柱温
为Ω; ℃ , 进样口温度为
Ζ ; ℃ ς 检测器温度 8 & ∀0 为
!  ; ℃ , . ∃0 为
; ℃ <
Ζ 结果与讨论
Ζ <
所试方法白勺可行性
通过气相色谱法同时测定了供试土壤中固
氮菌及反硝化菌的作用强度 < 为了验证该法测
得结果的可用性 , 在利用气相色谱法同时测定
固氮菌和反硝化菌的作用强度之后 , 又用气相
色谱法分别对两种菌的作用强度进行了单独测
定 。 其所得结果如图 ! 、 Ζ 所示 < 从图中所示的
两种测试方法测得的土壤中两种菌的作用强度
与土壤中重金属含量的关系曲线中 , 可以看出
二者的图形变化规律基本相符 , 但所得的结果
其绝对值尚有差异 , 这可能是由于试验过程中
的系统误差以及土壤生化作用受条件制约而复
杂化所致 < 就单独测定而言, 用乙炔还原测定
土壤固氮菌旦化作用强度时 , 在两次试验结果
中难于数据绝对一致 , 也出现有波动值 < 该法的
重复性经计算其离均差为 ; < 一 ⎯ , 测得结
; Γ Φ < ( < , //∃ < & Β Ε α < , ! 8 ! 6
 
7

9 Ω 应 用 生 态 学 报 ! 卷
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田 & 黑土中重金属含量与固氮菌作用强度的关系
2 ? 0俄 ? > ? 3 > 0? > 0Α 3 ) Β ? Χ Δ Ε> Φ0 ∗ 3 Γ ? > ) ΦΗ Φ > Γ 2 Χ ? ΙΦ/9ϑ3ΦΑΚ
图 5 土壤固氮菌作用强度二维与单独测定结果对比
Λ小麦土;
Μ ΦΓ . 5 Ν 3 4 Ο Χ∗ Φ Α3 > 3 ) 0Β? Φ> 0 ? > Α Φ0Ε 3 ) ≅% // > Φ0∗3 Γ ? > Ι
)议Φ> Γ 2Χ ? 0? ∗ Φ Χ 0五? 4 ? Χ Α1 ∗? Π 2了 Α Φ> Γ !3 Χ > Π 0 Θ 3 Π Φ Ι
4 ?朋/% 位Χ ! 4 ? 0Β3 Π Α .
Μ Φ Γ . & Ρ ? !Χ 0 Φ3 >血ΦΟ
4 ? 0 Χ !Α Χ > Π Φ红 0? >Α Φ 0Ε
0 ? ∗ ΦΧ Φ> ? Β? ∗ > 3  ? 4 Ι
3 )
. Σ . 一 . Τ Β? Χ 0
· Ι一 二维色谱测定 Υ Θ 3 Π Φ4 ? > ΑΦ 3 > Χ ! ? Β ∗ 3 ∗> Χ 0 3 Ι 公 一 笼 一 盆
小麦土
大豆 土 ϑ叮2 ? Χ > ≅ % // .
Γ ∗ Χ ςΒ Φ? Π ? 0 ? ∗ 4 Φ> Χ 0 Φ 3 > .
· Ι一 单 独测定 ϑ Φ> Γ !? Π ? 0 ? ∗4 Φ> Χ 0 Φ3 > .
Ω 门
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侧袭主
一琦平辽召涪二岁匕二 .∗匕之Ν, Κ 二二气〕川 > 一工Ζ;沂土城中Ν拉 含量Λ二了 。 3 > 0。 > , Φ > , 。 ! 土哭中比 一 含呈ς ∃ 之。。 >七 > 0 [ 。 · 土墩中 =犷 含赶 .砂
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Ν 1 7 3 > 0 护> 0 一> Α 【奋/ /
圈 ⊥ 土壤反硝化菌作用强度二维 与单独测定结果对 比
Λ大豆土;
ΜΦ Γ . ⊥ Ν3 4 Ο Χ ∗ ΦΑ 3 > 3 ) 0Β? Φ> 0 ? > Α Φ 0Ε 3 ) ≅ % // Π ? > ΦΙ
0 ∗ Φ)ΕΦ > Γ 2 Χ ? 0 ? ∗ ΦΧ 口? Χ Α1 ∗ ? Π 2Ε Α Φ> Γ !? Χ > Π 0Θ 3
Π Φ4 ?此是3 > Χ ! 毗0!Φ 3 Π Α .
图 ≅ 黑土中重金属含量与反硝化菌作用强度的关系
ΜΦ Γ . ≅ Ρ ? !Χ 0 Φ3 > Α五ΦΟ 2? 0Θ ? ? > ? 3 > 0? ” 0Α 3 ) 五? Χ_ 了
4 ? 0Χ !Α Χ > Π Φ> 0? > Α Φ 0了 3 ) ≅ % // Π ? > Φ 0 ∗ Φ)ΕΦ> Γ 2 Χ? 0 ? ∗ ΦΧ
Φ > ? Β? ∗ > 3  ? 4 .
Ι Ι 一 二维 色谱测定 Υ Θ 3 Π Φ4 ? > Α Φ3 > Χ ! ? Β∗ 3 4 Χ 03 Ι
小麦土 Τ Β? Χ 0 ≅ % // .
大豆土 ϑ 3 Ε2 ? Χ > ≅ % //
Γ ∗ Χ Ο五Φ? Π ? 0?恤 Φ> Χ 0 Φ3 > .
‘一 ’一 ‘ 单独测定 ϑ Φ> Γ !? Π ? 0 ? ∗ 4 Φ> Χ 0 Φ3 > .
果的规律与单独测定基本一致 , 可以认为用气
相色谱法同时测定是 可行的 .
在利用气相色谱法同时测定与单独测定土
壤中两种菌的作用强度时 , 由于 试验中预处理
Ν Β Φ > . Ψ . =ςς, . ⎯ ? 3 ! . , 5 + 5 Λ / α α / ;
! 期 王淑芳等 8 重金属污染黑土中固氮菌及反硝化菌作用强度的测定
盛样瓶的容积差 、 样瓶密封程度和取样量等因
素影响 , 本试验应进行 Ζ 次以上重复 , 才能得
到可靠的试验结果 < 这一点已被试验验证 <
Ζ < ! 试验结果的相关规律
利用气相色谱法同时测定了供试土壤中两
种菌的作用强度与其土壤环境中重金属的量变
关系 , 如图 : 、 所示 < 从图中可以看出 , 固氮
菌的作用强度随土壤中几种重金属含量增加而
趋于降低 , 当土壤中重金属含量增加到一定值
后 , 反硝化菌的作用强度有随重金属含量增加
而增强的现象。 这一情况与文献〔Ζ 〕报道的 ,
在一定浓度 6/? 十“为9 ; ;//Ν , , > 月”为Ζ Ε//Ν
以上7范围内 , 土壤中/? φ !和, > φ 石对土壤细菌
数量有增多 , 有刺激作用的规律相吻合 < 反硝
化菌也属于细菌群体中一类菌 , 因此可能该菌
的作用强度随菌数量受到刺激增多而增强的缘
故。 就其两种菌对重金属反应的灵敏规则性而
言 , 固氮菌优于反硝化菌 <
采用气相色谱法同时测定所得到的供试土
壤中两种菌的作用强度与环境土壤中重金属含
量的关系 , 其所得数据用回归统计法证实 , 固
氮菌的作用强度与环境土壤中重金属含量呈负
相关 , 显著水平为 ; < ;
ς 反硝化菌的作用强度
与土壤中重金属含量间呈正负相关 , 规律变化
不一 , 显著水平为; < ; 一。< ;
<
Ζ < Ζ 临界毒害浓度的确定
根据重金属对土壤微生物体系的、临界毒害
浓度的有关标准为基础 〔“ 一 9 ’ 6土壤生物酶活性
及生化作用强度因重金属毒害其活性和强度降
低
; 一! ⎯ 7 , 本文以 图 : 、 求得所试重金属
∀ = 十“ 、 , > 十 、 / ? φ ! 和∀ Α φ “的土壤生化效应临
界毒害浓度见表 ! <
由表 ! 看出所试方法求得的土壤生化作用
强度与酶的活性对土壤重金属污染物毒害反应
较植物效应反应敏感 < 就其几种重金属的毒性
以 ∀ = φ “γ , > φ γ ∀ Α φ “γ /? φ “ 的次序排歹δ」<
综上结果表明 , 气相色谱法同时测定重金
属污染黑土中固氮菌、 反硝化菌的作用强度 ,
表 ! 黑土中孟金属临界毒害浓度
Ξ 4 ? < ! ∀ ΙΓ ΧΓΒ 4 Δ ΗΕ Κ ΔΒ Β Ε Φ Β Β Φ 扮4 亡ΓΕ Φ Ε Η Λ Β 4 Π 5
Ν Β Χ4 Δ> ΓΦ ≅ Λ ΒΙ Φ Ε Μ Β Ν
临界毒害浓度
∀ Ι ΓΧ三Β 4 Δ ΧΕ Κ ΓΒ Β Ε Φ ≅Β Φ Χ Ι4 Χ ΓΕ Φ 6//Ν 7
重 金 属
种 类 植株生长势
6显见株矮 7
Τ ΓΦ = > Ε Η
五Β4Π 5
正Β Χ 4 ∃∋
1 ΙΕ Σ ΧΛ Ο Ε ΧΒ Φ ΧΓ4 Δ
Ε Η Ο Δ4 Φ Χ 6ΟΔ4 Φ Χ
五Β Γϑ Λ Χ >五Ε Ι ΧΒ 且Β = 7
固氮菌酶活性
降低
; 一! ⎯
& Φ Μ 5Ν Β
4 ΒΧΓ9 Γ上5 Ε Η
Φ ΓΧΙ Ε ϑΒ Φ
ΗΓΚ ΓΦϑ
?4 Β ΧΒ Ι Γ4
6= Β ΒΙΒ >Β =
?5
;一 ! ⎯ 7
反硝化菌作用
强度降低

;一! ⎯
∃Φ ΧΒΦ> ΓΧ5 Ε Η
= Β Φ ΓΧΙ ΓΗ5 ΓΦ ϑ
?4 Β帕Ι Γ4
6= ΒΒ Ι Β 4 >Β =
? 5
;一 ! ⎯ 7
粥蓖妥零
口璐。η片∋圈只妇‘_,月莽粼产勺
口δ叫吕
, , ( 刁
, 、 卜

)切
妇<;月毕报尸勺
口月。η卜; 回杖
∀= φ !
, ∋ 十
∀Α φ !

; ;
: ;
: ; ;
, 88
88 , 88 ! ς8
ΦΔβ8Κ亡曰&八8
&
ς 2于 5
χ ⊥ % % %
不 明 显
Ω 3 Α ΦΓ > Φ Ι
)Φ? Χ > ? ?
.
能够准确 、 快速 、 可靠地制定 出重 金 属毒 害
微生物生化的临界浓度指标 , 是一 种 有 效 的
方法 。
参 考 文 献
/ 郑洪元 、 张德生主编 . /α ∋ 5 . 土壤动态生物化学研究法 .
科 学出版社 , 北京 , /” , /∃ ⊥ .
5 严胆升主 编。 / α∋ ∋ . 土壤肥力研究方法 . 农业 出版社 , 北
京 , 5 5 ≅一 5 5 ≅ .
⊥ 夏增禄主编 。 /α ∋ ∃ . 土壤环境容 量研究 。 气象 出版社 , 北
京 , / ⊥≅ , /& / 。
& δ ? ∗ Γ ? ∗ Α? > , Μ . Ψ. /α ∋ % . 旅0Β3 Π Α )3 ∗ ? Δ Χ !1 Χ 0 Φ> Γ2Φ3 /ΚΓ Φ7 Χ ! 且Φ 0 ∗姐? > )Φ Η Χ 0 Φ3 > . Ψ3 五> Τ Φ !?Ε ε ϑ3 >Α
ΝΒ Φ?五? Α0 ? ∗ , ≅ ∃ , 一 ≅ φ 5 。
≅ γ Χ众4 , ? 致Χ , Ν . 只. /α φ & . Ρ Ο皿 + ? Ο皿皿 ∗ Χ ∗皿 ? 万皿互? ? Ι
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∃ γ 皿、皿 > , δ . δ . 5% ∋ 5 . % 几Ο ? 及? 几、Χ 3 双3> 了? + 皿班。盆
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φ > ? Ο 双3 ? 皿Χ Χ , = . % . 皿 ,! Χ > Χ 皿盆3 3 Χ , ⎯ . Ψ’, . / α ∋ 5 . Ν 工 ? 班 Χ
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Λ ⊥ ; 盆/ 5一 / ⊥ ,
ΝΒ Φ > . Ψ 。 = Ο ς, . ⎯ 73 !. , 5 + 5 Λ / α α / ;