全 文 ：第 卷 第 期
年 月
化 学 研 究 中国科技核心期 刊
到
蛇苟果实总花色普含量测定方法的比较
李 洋,张 媛,李 琳,李海亮,钦传光`
四北 业大学 生命学院 陕西 西安
摘 要 为了寻求快速 、经济地测定蛇葛果实总花色昔含量的方法 ,采用单一工。 法和 示差法进行测定 ,比较
分析 两种方法测定结果的差异性 结果表明 ,两种 法测定的吸光度与浓度均具有 良好的线性关系 ,测定结
果没有显著性差异 两种 法均能用于蛇苟果实总花色昔含量的测定 ,且需要在相同溶剂中进行 ,其中单一
法操作更简便
关键词 蛇苟果实 总花色曹 单一 法 不差法
中图分类号 〕 文献标志码 文章编号 一 巧一 一
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花色昔是一类易溶于极性溶剂的天然色素 ,属黄酮类化合物 花色营广泛存在于植物的根 、茎 、叶 、花和
果实中 ,使其呈现由红到紫等不同颜色 ,是植物主要的呈色物质 自然界中常见的花色营有 种 ,分别是矢
车菊色素 、天竺葵色素 、飞燕草色素 、芍药色素 、牵牛花色素和锦葵色素 ,由于花色昔分子上连接的基团类型
和数量的差异 ,自然界中存在的花色昔种类呈现多样性
蛇葛是蔷薇科龙吐珠属多年生草本植物 ,在我 国民间常用作中药材使用 ,具有清热解毒 、散疲消肿 、治疗
咽喉肿痛等功效 经过我们前期研究证实 ,蛇墓成熟果实中含有大量花色昔 ,其组分为矢车菊素一一芸香糖
昔 ,芍药素一一芸香糖昔和牵牛花素一一芸香糖营 口 花色营 已被证明具有抗氧化 、抗肿瘤 、抗炎等多种生理活
性 二,并作为天然色素在食品 、化妆品行业广泛应用 ,需求量逐年递增 ,因此 寻求一种快速 、经济地测定蛇葛
果实总花色昔含量的分析方法具有实际意义 目前测定总花色昔含量的方法主要有分光光度法和 刃 定
量法川 由于 仪器使用费用较高 ,操作繁琐且需要标准品定量 ,所以分光光度法成为了一种更为常用
的方法 本文作者拟用分光光度法中的单一 法和 示差法测定蛇毒果实总花色昔含量 ,比较这两种方
收稿 日期 一 。 一
基金项 目 旧家 自然科学基金资助项 目 了 吕
作者简介 李 洋 一 男 博 十`几主要从 事天然产物化学与牛物活性研究 通讯联系人 , 、 娜 」 。
DOI :10.14002/j.hxya.2011.05.001
96 化 学 研 究 年
法测量结果的差异 ,并为其他样品测定总花色昔含量提供方法借鉴
实验部分
材料与仪器
蛇毒果实 ,西安采摘 无水乙醇 、 盐酸 、氯化钾 、醋酸钠 、醋酸 、甲醇均为分析纯 固
相萃取柱 ,博纳艾杰尔公司 一 。紫外可见分光光度计 ,日本 日立公司 一 计 ,德国 公
司 一 旋转蒸发仪 ,日本东京理化器械株式会社
实验方法
蛇毒果实总花色普的提取
选取新鲜 、成熟的蛇毒果实 ,按 , 的料液比加人含 的乙醇 , 下避光浸提 ,浸
提液用滤纸过滤除去残渣 ,再用旋转蒸发仪在 水浴下减压浓缩 ,得浓缩液 ,低温避光保存
蛇毒果实总花色普的纯化
甲醇活化固相萃取柱 ,再用含 的去离子水冲洗固相萃取柱 ,加人总花色昔浓缩液 ,之
后用含 的去离子水冲洗 次 ,每次 ,然后用含 。 的乙醇溶液将总花
色昔洗脱 ,洗脱液低温避光保存备用
蛇毒果实总花色普最大吸收波长的确定
将纯化后的总花色昔溶液适当稀释 ,使其吸收波长处于紫外可见分光光度讨一的线性范围 ,在 一
范围全波长扫描 ,测定最大吸收波长 ,在此最大吸收波长下测定各样品的吸光度
蛇毒果实总花色普含量线性范围的测定
由比尔定律 一 动 ,总花色昔溶液的含量与其吸光度成正比 ,因此 ,根据经验公式计算总花色昔含
量 ,
总花色昔含量 义 又￡又
式中 是最大吸光度 是矢车菊素一一芸香糖昔的分子量 是稀释倍数 是矢车菊素一一芸香糖
营的摩尔消光系数 · · 是比色皿光程
将总花色昔洗脱液稀释成不同浓度的溶液 ,分别测定吸光度 ,确定总花色昔溶液含量与吸光度的线性
范围
单一 法测定总花色普含量
在总花色昔含量线性范围内 ,用 的氯化钾一盐酸缓冲溶液稀释总花色昔洗脱液成不同浓度的样
品 ,平衡 后 ,分别测定吸光度八 ,由经验公式计算总花色昔含量
〕 示差法测定总花 色普含量
在总花色昔含量线性范围内 ,分别用 的氯化钾一盐酸缓冲溶液和 的醋酸钠一醋酸缓冲溶
液稀释总花色昔洗脱液成不同浓度的样品 ,平衡 后 ,测定两种稀释样品在最大吸收波长处的吸光度
和 波长处的吸光度 ,由经验公式计算总花色昔含量川
两种 法测定结果的差异性比较
用体积分数为 。 、 、 、 、 、 的乙醇溶液分别配制相同浓度的蛇葛果实总花色昔溶
液 ,用单一 法和 示差法分别测定总花色营含量 ,分析两种方法测定结果的差异性
结果与讨论
蛇毒果实总花色昔的最大吸收波长
蛇葛果实总花色昔在含 的乙醇溶液中的紫外可见光吸收光谱图如图 所示 ,在可见
光区最大吸收波长 久 、。、是
蛇萄果实总花色昔的浓度线性范围
经验公式中的 和 。对应于总花色营中的主要花色昔组分 ,蛇葛果实总花色昔中矢车菊素一一芸香糖
营含量最大 ,因此用其分子量 和摩尔消光系数 · 司 · 一进行计算 一
第 期 李洋等 蛇毒果实总花色昔含量测定方法的比较
本实验用经验公式计算蛇蓦果实总花色昔洗脱液的总花色昔含量是 ·一 ,将洗脱液分别稀
释 、 、 。、 。、 。、 。倍后 ,测定各溶液的吸光度 以吸光度为纵坐标 ,浓度为横坐标作标准曲线 ,得图
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图 蛇毒果实总花色昔紫外可见光吸收光谱图
一
图 蛇葛果实总花色普浓度一吸光度标准曲线
、
一
由图 可知 ,曲线的复相关系数为 。 ,表明蛇蓦果实总花色昔浓度在 · 一时 ,溶液
的吸光度与溶液的浓度线性相关
单一 法和 示差法的比较
通过经验公式计算总花色昔浓度 ,关键是确定吸光度 本实验中蛇蓦果实总花色昔提取后进行了纯
化 ,在可见光区最大吸收波长范围没有出现叶绿素等其他干扰物质 ,因此单一 法直接采用最大吸收波长
处的吸光度 ,见式 溶液 会使花色昔结构发生改变 , 。时 ,花色昔呈有色的氧踢型结构 ,
时呈无色的半缩酮结构 ,根据这种反应用式 确定 示差法的吸光度 ,并用 处的吸光度来修正
样品中可能由胶体引起的光散射情况
、
一 。 、一 、 、 。一 。 、一 二。 川
在蛇毒果实总花色营浓度的线性范围内 ,将洗脱液稀释 、 。、 、 、 、 、 。倍 ,分别以两种方法测定
吸光度 ,计算总花色昔浓度 ,如图 和图 所示
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图 单一 法测定蛇毒果实总花色普浓度
一 一 、
图 工〕 示差法测定蛇萄果实总花色昔浓度
一 一
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由图 可知 ,单一 法测定蛇每果实总花色营的浓度一吸光度曲线呈现 出良好的线性相关 ,复相关系
数是 ,浓度的线性范围在 一 · 一 图 显示 示差法测定的浓度一吸光度曲线的复
相关系数是 ,曲线同样具有良好的线性关系 ,浓度线性范围在 一 ·厂 因此 ,两种
法均能准确地测定蛇葛果实总花色昔浓度 ,而且单一 法操作更简便
两种 法测定结果的差异性比较
采用 数据处理软件中的 测验 “一`,对两种方法测量结果进行 比较 ,分析两种测量方法的
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差异性 ,结果见表 由表 可知 ,两种测量方法的 置信限为一 一 。 。,包括 。,表明两种方法
测量结果不存在显著性差异 因此 ,相同条件下 ,两种方法测量结果趋势一致 ,均可用于测量蛇毒果实总花
色普溶液浓度
表 两种 法测定结果的差异性比较
` 一 一
平均值 标准差 均方误差 值 均值差 置信限
单一 法 ,
示差法 选 魂
差异性比较 一 一 魂
由图 可知 ,相同浓度的蛇葛果实总花色昔溶液 ,随
着溶剂乙醇体积分数的增大 ,两种 法测量的吸光度
也随之增大 表明乙醇体积分数的改变对两种方法的测
量结果都有影响 当乙醇体积分数在 以下时 ,两种
方法测量的吸光度 变化较大 ,对经验公式计算结果影
响较大 而乙醇体积分数在 以上时 ,两种方法测量的
吸光度 趋于平缓 ,基本不影响浓度的计算 因此 ,用两
种 法测定蛇蓦果实总花色昔浓度时 ,需在相同溶剂中
进行才能对比 ,总花色昔在体积分数 以上的乙醇溶
液中 ,含量测量的结果更加稳定
单一 法
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两种 法在不同体积分数乙醇溶液中的比较
万 一川 山 〕
结论 。山。、, , 。。 , 、 。 。, 、。 ,。
含 。 比。 的乙醇溶液提取的蛇葛果实总
花色营 ,在可见光区的最大吸收波长是 ,无叶绿素等其他物质干扰 用两种 法测定 ,总花色昔溶
液的吸光度与浓度具有良好的线性相关 ,能准确地测定蛇蓦果实总花色昔含量 由于测定结果没有显著性
差异 ,因此两种测定方法均可用于测定蛇毒果实总花色昔含量 ,且单一 法操作更简便 需要注意的是 ,
溶剂会对总花色营溶液的吸光度产生影响 ,因此 ,用两种 法测定时需在相同溶剂中才能对比
参考文献
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、 , 、 , 。, 。、巨」 , 飞 一
〕 、 , , 、、 , 卜 、 , ,「、 , 〔 , `, 〔, 、 〕卜
、、, 。。 , 习 , 一
巨口刘 洋 植物花色普及其生物活性的研究进展 」青海农林科技 一
」 〔 之 `、 仁 。 〔 , , 。 。。 一, 、 〕 、 〕。 〔
, 。。、 」 , 一 一
习 一 , 、,、 。、 、。。、 , 、 、,、 。。 ` 。川 丁 一 、
日 , 、、 、】、 〕 〔〕〕 。、 , 一
匕习霍琳琳 苏 平 吕英华 分光光度法测定桑套总花色营含量的研究 口酉良酒 肥 一 ,
习 之 , 。 一 、 〔 , 。 ` , , 。川 、 。 。、,
。 。、 、 , 、 洲 、 飞。 , , 飞。、 〔〕。 。 ·` 〔 巨口 。 ,
一 吕
匕」 一`` , 。 、 , 。〔 。,。 。,、 仁 三, 飞 艺·
,
「川 唐启义 ,冯明光 实用统计分析及其 数据处理系统压 」北京 科一学出版社 , 呢