全 文 ：348
蒙古扁桃药材正丁醇提取物降血脂作用的
量效关系及其化学成分的研究
赵云山1，吴培赛1，2，张慧文1，程向晖1，石松利1，* ，刘全礼1，周红兵1
(1.包头医学院，内蒙古包头 014040;
2.湖南医药学院，湖南怀化 418000)
收稿日期:2016－08－22
作者简介:赵云山(1965－) ，男，硕士，副教授，主要从事中蒙药化学成分研究，E－mail:wpsdabaicai@ 163.com。
* 通讯作者:石松利(1981－) ，女，博士，教授，主要从事植物化学和中蒙药化学成分及资源开发利用研究，E－mail:shisongli122@ 126.com。
基金项目:国家自然科学基金项目(81102760) ;内蒙古自治区高等学校青年科技英才支持计划项目(NJYT－15－B01) ;包头医学院博士基金项目
(BSJJ201616)资助。
摘 要:目的:探索蒙古扁桃正丁醇提取物降血脂作用的量效关系，研究其化学成分。方法:使用正丁醇提取蒙古扁桃
种仁，得正丁醇提取物。大鼠按体重均衡随机分组，分别为空白组和模型组，空白组给予普通饲料饲养，模型组采用高
脂饲料喂养法建立高脂模型。建模成功后，持续按前述方法饲养，将大鼠分为空白组、模型对照组、阳性药组(辛伐他
汀)、蒙古扁桃药材正丁醇提取物给药组。空白组与模型对照组灌胃给予生理盐水，实验组以不同剂量的蒙古扁桃正
丁醇提取物(0.25、0.5、1.0、2.0、4.0 g /kg)灌胃。给药七周后测定大鼠血清中 Total cholesterol(TC)、Triglyceride(TG)、
High－density lipoprotein cholesterol(HDL－C)、Low－density lipoprotein cholesterol(LDL－C)的含量;使用色谱、波谱手段
分离提纯蒙古扁桃正丁醇提取物。结果:与高脂模型组相比，0.25、0.5、4.0 g /kg 正丁醇提取物无显著降血脂作用，1.0、
2.0 g /kg正丁醇提取物组能显著降低 TC，LDL－C含量(p ＜ 0.05) ，且以 2.0 g /kg的效果最好;从蒙古扁桃正丁醇提取物
中提取出来的化合物为苦杏仁苷单体。结论:蒙古扁桃药材正丁醇提取物起降血脂的剂量在 1.0～2.0 g /kg 之间，且以
2.0 g /kg生药量最好;苦杏仁苷为首次从蒙古扁桃种仁中分离出来。
关键词:蒙古扁桃，正丁醇提取物，降血脂，量效关系，化学成分
Studies on dose－effect relationship of n－butanol extracts of Amygdalus
mongolica on reducing blood lipid and its chemical constituents
ZHAO Yun－shan1，WU Pei－sai1，2，ZHANG Hui－wen1，CHENG Xiang－hui1，
SHI Song－ li1，* ，LIU Quan－ li1，ZHOU Hong－bing1
(1.Baotou Medical College，Baotou，014040，China;
2.Hunan University of Medicine，Huaihua，418000，China)
Abstract:Objective:To explore the dose－effect relationship of n－butanol extracts of Amygdalus mongolica on reducing blood
lipid and study the chemical constituents of the n－ butanol extracts of Amygdalus mongolica.Methods:Kernels of Amygdalus
Mongolica was extracted by n － butanol to get the n － butanol extracts. Wistar rats were randomly assigned into two weight
balanced groups:the blank control group and the model group.The blank control group was fed with general diets，the model
group was fed with high fat diets to build hyperlipemia model.After the models were successfully built，keeping in accordance
with the above feeding methods，Wistar rats were divided into four treatment groups:the blank control group，the model group，
the positive drug group(Simvastatin)and the different doses of n－butanol extracts treatment group.The blank control and the
model group were treated with physiological saline by intragastric administration，the different doses of n－ butanol extracts
treatment group were treated with 0.25，0.5，1.0，2.0，4.0 g /kg n－butanol extracts by intragastric administration respectively.
After seven weeks of administration，the contents of total cholesterol(TC) ，triglyceride(TG) ，high － density lipoprotein
cholesterol(HDL－C)and low－ density lipoprotein cholesterol(LDL－ C)were determined. N－ butanol extracts of Amygdalus
mongolica were separated and purified by chromatographic and spectroscopic methods. Ｒesults:Comparing to hyperlipemia
model，0.25，0.5 g /kg and 4.0 g /kg n－butanol extracts didn’t show significant effect of reducing blood lipid，while 1.0 g /kg
and 2.0 g /kg n－ butanol extracts could significantly reduce the contents of TC and LDL－ C(p ＜ 0.05) ，and the effect of
2.0 g /kg n－butanol extracts was the best;amygdalin was isolated from n－butanol extracts of Amygdalus mongolica.Conclusion:
The dose of n－BuOH extracts being effective ranged from 1.0 g /kg to 2.0 g /kg，and the dose of 2.0 g /kg n－BuOH extracts
349
showed best effect.Amygdalin was isolated from kernels of Amygdalus mongolica for the first time.
Key words:Amygdalus Mongolica;n－BuOH extracts;declining blood lipids level;dose－effect relationship;chemical compouds
中图分类号:TS201.4 文献标识码:A 文 章 编 号:1002－0306(2017)03－0348－05
doi:10． 13386 / j． issn1002 － 0306． 2017． 03． 059
随着人们生活水平的提高和生活方式的改变，
高脂血症的发病率也在逐年提高。高脂血症包括 TC
或 TG 水平过高和(或)HDL－C 水平过低［1］，表现为
高胆固醇血症、高甘油三酯血症或两者兼有(混合型
高脂血症)。高脂血症已被证明是心脑血管疾病诸
如高血压、冠心病、动脉粥样硬化、脑中风等的独立
危险因素［2－4］，它是一种慢性疾病，需要长期服药［5］。
市场上销售的降血脂西药作用虽然比较显著，但对
机体产生的副作用同样较大［6］。与西药相比，中草药
在治疗疾病时具有的一个巨大优势就是将人和自然
看作一个整体，把人体和疾病看作一个整体，而不是
机械的把机体和疾病割裂开来。因此，开发中草药
降血脂新药具有巨大的使用价值［7］。
蒙古扁桃，蒙名为乌兰－布衣勒斯［8］，其种仁作
为传统的中药材，主治咽喉干燥、干咳及支气管炎、
阴虚便秘等证，也可用作镇静剂和止痛剂。目前国
内外对蒙古扁桃的研究大多集中在植物形态学、生
态学、地理分布等方面［9］。在药理学方面，本课题组
发现蒙古扁桃药材新的药理作用，即种仁水粗提液
能降低高脂血症大鼠的血脂水平［10］;其种仁的正丁
醇提取物具有降低高脂血症大鼠血脂水平的作
用［11］。但蒙古扁桃药材正丁醇提取物的降血脂作用
的量效关系、其化学成分的研究尚未见报道。本文
在以往研究的基础上采用高脂血症大鼠模型，测定
各实验组大鼠血清 TC、TG、HDL－C 和 LDL－C，探索
蒙古扁桃药材正丁醇提取物降血脂作用的量效关
系，研究蒙古扁桃药材正丁醇提取物的化学成分，为
深度利用蒙古扁桃资源、进一步开发蒙古扁桃新的
药理作用及降血脂药物的研发提供科学依据和理论
基础。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
Wistar雄性大鼠，SPF级，初体质量(90 ± 20)g，
由内蒙古大学实验动物中心提供，生产许可证:
SCXK(蒙)2002－0001。饲养条件:室温(25 ± 2)℃，
相对湿度 55% ±2%。
蒙古扁桃药材 采自内蒙古阿拉善雅布赖戈
壁，经内蒙古科技大学包头医学院石松利教授鉴定
为蔷薇科植物蒙古扁桃(Amygdalus mongolica)的干
燥成熟种子;大小鼠维持饲料 北京科澳协力饲料
有限公司;蛋黄粉、胆固醇 郑州龙晨食品添加剂有
限公司，批号 20150624;猪胆盐 北京奥博星生物技术
有限责任公司，批号:20150702;丙硫氧嘧啶片 上海
朝晖药业有限公司，批号:1402F09;辛伐他汀 山东
鲁抗医药集团赛特有限责任公司，批号:130508;TC试
剂盒(批号:OSＲ6216)、TG试剂盒(批号:OSＲ61118E)、
LDL－C 试剂盒(批号:OSＲ6283)、HDL－C 试剂盒(批
号:OSＲ6287) 均购自美国贝克曼公司;重水
(D2O)。
全自动脱帽离心机 长沙鑫奥仪器;Olympus
AU640 全自动生化分析仪 日本奥林巴斯公司;
DZW－8－8 型水浴锅 北京市永光明医疗仪器厂;
ＲE －52A型旋转蒸发仪 上海亚荣生化仪器厂;
GZX－DHG电热恒温鼓风干燥箱 山东潍坊医疗器
械厂;超高效电喷雾质谱联用仪(UPLC－DAD－ESI－
MS) 安捷伦科技有限公司;核磁共振微成像谱
仪 瑞士布鲁克公司。
1.2 实验方法
1.2.1 高脂饲料配方 将 77.4%基础饲料、10%蛋黄
粉、2%胆固醇、0.5%猪胆盐和 0.1%丙硫氧嘧啶［11］称
量后按比例充分混匀，再缓慢加入融化的猪油(每 kg
高脂饲料含 100 g 猪油) ，边加边搅拌，使其充分混
合，制备高脂饲料。
1.2.2 蒙古扁桃药材正丁醇提取物的制备 取蒙古
扁桃生药研碎，置于索氏提取器中，用 10 倍体积的
95%乙醇(v /v)水浴提取 3 次，每次 2 h;再用 10 体
积的 50% 乙醇(v /v)提取 3 次，每次 2 h，得粗提
液［11］。分别使用旋转蒸发仪和水浴锅浓缩粗提液至
膏状。将粗膏与等质量的硅藻土搅拌均匀，按照极
性大小的顺序，先依次用石油醚、乙酸乙酯溶液将粗
膏中极性较小的物质提取出来，然后再使用正丁醇
溶液提取出实验所需要的部分，最后再用蒸馏水提
取，浓缩干燥后得正丁醇提取物，并计算正丁醇提取
物所占比重。
1.2.3 给药剂量 在上述实验的基础上，设置蒙古
扁桃正丁醇提取物生药量梯度为 0.25、0.5、1.0、2.0、
4.0 g /kg，分别命名为 A 组，B 组，C 组，D 组，E 组。
根据正丁醇提取物所占比重及给药剂量配制溶液。
阳性药辛伐他汀根据说明书，换算为大鼠的给药剂
量，为 1.02 mg /kg bw。4 ℃冰箱保存。正丁醇提取
物溶液及阳性药均按 0.6 mL·100 g －1 bw灌胃。
1.2.4 动物分组及处理 取符合健康标准的 Wistar
雄性大白鼠 80 只，适应性喂养一周后，按照体重随
机分成 8 组，每组 10 只，即空白对照组，高脂模型组，
阳性药对照组，蒙古扁桃药材正丁醇提取物处理组
(A组，B组，C组，D组和 E组)。实验期间除空白对
照组自由采食基础饲料外，其余各组按照平均 23～
27 g /只的量喂食高脂饲料。各组大鼠自由饮水。造
模 5 周后，禁食不禁水 12 h后眼眶静脉丛采血，测定
TC、TG、HDL－ C 以及 LDL－ C。高脂模型建立成功
后，空白对照组及高脂血模型组灌胃生理盐水，阳性
药组灌胃辛伐他汀溶液，其余各组灌以相应的蒙古
扁桃药材正丁醇提取物。给药七周后，禁食不禁水
12 h 后眼眶静脉丛采血，分离血清，测定 TC、TG、
350
表 1 高脂血症大鼠模型造模结果(珋x ± s，n = 10)
Table 1 Blood lipid levels of rats after five weeks feeding of high－fat－diet(珋x ± s，n = 10)
组别 TC(mmol·L －1) TG(mmol·L －1) HDL－C(mmol·L －1) LDL－C(mmol·L －1)
空白对照组 2.14 ± 0.33 0.83 ± 0.24 1.19 ± 0.23 0.57 ± 0.08
高脂模型组 3.80 ± 0.11ΔΔ 0.44 ± 0.02ΔΔ 1.95 ± 0.06ΔΔ 1.34 ± 0.07ΔΔ
阳性药处理组 3.84 ± 0.30ΔΔ 0.72 ± 0.13 1.89 ± 0.19ΔΔ 1.33 ± 0.02ΔΔ
A 4.09 ± 0.24ΔΔ 0.53 ± 0.03ΔΔ 2.02 ± 0.14ΔΔ 1.67 ± 0.27ΔΔ
B 4.08 ± 0.67ΔΔ 0.42 ± 0.04ΔΔ 1.87 ± 0.20ΔΔ 1.59 ± 0.28ΔΔ
C 3.90 ± 0.25ΔΔ 0.47 ± 0.07ΔΔ 1.80 ± 0.07ΔΔ 1.47 ± 0.18ΔΔ
D 3.92 ± 0.38ΔΔ 0.56 ± 0.02ΔΔ 1.65 ± 0.15Δ 1.07 ± 0.13ΔΔ
E 3.84 ± 0.30ΔΔ 0.72 ± 0.03 1.89 ± 0.19Δ 1.32 ± 0.02ΔΔ
注:Δ:与空白对照组相比，p ＜ 0.05;ΔΔ:与空白对照组相比，p ＜ 0.01。
表 2 蒙古扁桃药材正丁醇提取物对高脂血症大鼠血脂的影响(珋x ± s，n = 10)
Table 2 Effects of n－BuOH extracts of Amygdalus Mongolica on blood lipid in rats(珋x ± s，n = 10)
组别 TC(mmol·L －1) TG(mmol·L －1) HDL－C(mmol·L －1) LDL－C(mmol·L －1)
空白对照组 2.07 ± 0.37 0.70 ± 0.24 1.36 ± 0.19 0.56 ± 0.14
高脂模型组 5.05 ± 0.69Δ 0.45 ± 0.10ΔΔ 2.43 ± 0.25ΔΔ 2.22 ± 0.26ΔΔ
阳性药处理组 5.32 ± 0.54 0.48 ± 0.07 2.64 ± 0.30 2.02 ± 0.16
A 4.56 ± 0.38 0.42 ± 0.03 2.34 ± 0.19 1.73 ± 0.16#
B 4.66 ± 0.49 0.42 ± 0.06 2.28 ± 0.23 1.87 ± 0.22#
C 4.42 ± 0.36# 0.40 ± 0.06 2.19 ± 0.07 1.73 ± 0.25#
D 4.28 ± 0.15# 0.47 ± 0.03 2.54 ± 0.21 1.82 ± 0.06#
E 4.89 ± 0.40 0.45 ± 0.03 2.46 ± 0.27 1.92 ± 0.13
注:Δ:与空白对照组相比，p ＜ 0.05;ΔΔ:与空白对照组相比，p ＜ 0.01;#:与高脂模型组相比，p ＜ 0.05。
HDL－C和 LDL－C。
1.2.5 蒙古扁桃药材正丁醇提取物的分离 将蒙
古扁桃正丁醇提取物采用湿法上样到 D101 大孔树
脂柱中，分别以 10%、30%、50%、70%、90% 的乙
醇洗脱，采用薄层硅胶色谱检测流份，展开剂为四
氯化碳∶甲醇 = 4∶ 1，在 254 nm 紫外灯下检识，将具
有相同色谱特征的流份合并浓缩。将 10%、30%梯
度酒精流份采用湿法上样到 ODS柱，用甲醇溶液梯
度洗脱，展开剂为乙酸乙酯 ∶ 甲酸 ∶ 水 = 20 ∶ 3 ∶ 1，在
254 nm紫外灯下检识。根据薄层检识结果，将有相
同色谱特征的流份合并，回收溶剂，得无色粉末状
化合物 1。
1.2.6 结构鉴定
1.2.6.1 UPLC－DAD－ESI－MS 采用 ESI 负离子模
式，碎片电压 50 V，毛细管电压 3500 V，雾化压力
45 psi，干燥气体温度 350 ℃，质谱离子范围 100 ～
1500 m /z。色谱条件为:色谱柱为 Agilent ZOＲBAX
Eclipse Plus C18 (2.1 mm × 50 mm;particle size，
1.8 μm) ;流动相 A为 0.1%甲酸水溶液，流动相 B 为
甲醇，流速为 0.4 mL /min。洗脱梯度如下:0～3 min
10% ～ 30% B，4 ～ 5 min 30% ～ 100% B，5 ～ 6 min
100% B。
1.2.6.2 核磁共振分析 以 D2O为溶剂，在 500 MHZ
的频率下对分离出来的化合物进行核磁共振波谱
检测。
1.2.7 统计学处理 使用软件 SPSS 17.0 对实验数
据进行分析，实验结果均以 珋x ± s 表示。采用单因素
方差分析对各组均数进行比较，p ＜ 0.05 表示差异有
统计学意义。
2 结果与分析
2.1 高脂血症大鼠模型造模结果
各组大鼠进行高脂饲料喂养五周后，采血，测定
其血脂指标，实验结果见表 1。
由表 1 可知，与空白对照组相比，高脂模型组、
辛伐他汀处理组及蒙古扁桃药材正丁醇提取物
(A－E组)大鼠血清中的 TC、LDL－C 和 HDL－C 的含
量均显著升高(p ＜ 0.05) ，TG 含量显著降低(p ＜
0.05) ，表明模型组大鼠存在血脂代谢紊乱，高脂血症
模型造模成功。
2.2 蒙古扁桃药材正丁醇提取物对高脂血症大鼠血
脂的影响
由表 2 可知，与空白对照组相比，高脂模型组大
鼠血清中 TC和 LDL－C 水平显著升高(p ＜ 0.05) ，说
明高脂模型稳定，造模成功。与高脂模型组相比，A
组和 B组 LDL－C 含量显著降低(p ＜ 0.05)。C 组和
D组的 TC、LDL－C 含量均显著降低(p ＜ 0.05)。实
验结果表明，1.0、2.0 g /kg 正丁醇提取物具有降血脂
作用，且以 2.0 g /kg的效果最好。说明蒙古扁桃正丁
醇提取物有降血脂作用的剂量范围在 1.0～2.0 g /kg
之间。当剂量达到 4.0 g /kg时，已经超过了其起效的
范围，因此无显著降血脂作用。
2.3 液－质联用结果
化合物 1 的 HPLC图谱显示在保留时间 2.2 min
处出峰。其质谱显示分子离子峰［M－H］－ 为 m/z
456、［M + COOH］－为 m/z 502、［M－C2H2］
－为 m/z
351
图 1 化合物 1 的 UPLC－DAD－ESI－MS图谱
Fig.1 UPLC－DAD－ESI－MS spectras of compound 1
注:图 1a为化合物 1 的液相色谱图;图 1b为化合物 1 的
质谱图，峰 2 为化合物 1，其余峰为杂质。
431，表明其相对分子质量为 457。其他主要峰有 913
为［M* 2－H］－，提示该化合物为生物碱。
2.4 核磁共振结果
化合物 1 为白色无定型粉末;1 H NMＲ(D2O，
500 MHz)显示有单取代苯环信号:S 7.43(2H，m，
H－2，6) ，7.36(3H，m，H－3，4，5) ，一个连氧次甲基信
号:δ5.89(1H，s，H－7)和两分子葡萄糖信号:δ 4.65
(lH，d，J = 8.1 Hz，H－ 15) ，4.62(lH，d，J = 7.5Hz，
H－9)。13 C NMＲ谱数据见表 3。13 C NMＲ谱数据与文
献报道的苦杏仁苷(Amygdalin)一致［12］，故化合物鉴
定为苦杏仁苷(Amygdalin)。
图 2 苦杏仁苷
Fig.2 Amygdalin
2.5 苦杏仁苷含量
合并含有相同成分的流份，回收溶剂，得固体结
晶，称重，算得苦杏仁苷在蒙古扁桃药材正丁醇提取
物中所占质量比重为 47.72%。
3 结论与讨论
本实验采用高脂饲料喂养法成功建立起稳定的
高胆固醇型高脂血症大鼠模型，这与姬凤彩［13］等人
研究高脂饲料喂养法建立高脂血症大鼠模型适合应
用于单纯性高胆固醇型高脂血症的研究，不适合用
表 3 化合物 1 的13 C NMＲ谱数据
Table 3 13 C NMＲ data of compound 1
C环编号 编号 化学位移
1 132.38
2 129.32
A 3 127.70
4 130.44
5 127.83
6 129.28
7 68.44
8 118.50
B 9 101.45
10 72.58
11 75.83
12 69.59
13 75.42
14 69.08
C 15 102.96
16 73.12
17 75.81
18 69.52
19 75.60
20 60.67
于混合型高脂血症、高甘油三酯和低高密度脂蛋白
血症的结果相一致。
量效关系是指在一定的剂量范围内，药物效应
随着药物剂量的变化而呈正相关或负相关的变
化［14］。合适的用药剂量是保证药物安全有效的关键
问题，选择药物的最佳剂量，这是临床用药的关键问
题［15］。此部分采用高脂饲料喂养法建立高脂血症大
鼠模型，设置蒙古扁桃正丁醇提取物生药量梯度为
0.25，0.5，1.0，2.0，4.0 g /kg，探索蒙古扁桃正丁醇提取
物降血脂作用的有效作用范围和最佳剂量。实验结
果表明，随着蒙古扁桃正丁醇提取物剂量的增加，其
对高脂血症大鼠血脂水平的作用大体呈先升高后降
低的趋势，在 2.0 g /kg 生药量下其降血脂作用最强。
当生药量达到 4.0 g /kg 时，其降脂作用又有所降低。
因此确定蒙古扁桃正丁醇提取物降血脂的有效剂量
为 1.0～2.0 g /kg，且 2.0 g /kg 为其降低高脂血症大鼠
血脂水平的最佳剂量。
本论文采用色谱、波谱手段对蒙古扁桃药材正
丁醇提取物进行化学成分的研究，首次从中得到苦
杏仁苷单体化合物。苦杏仁苷具有多种药理作用，
例如抗肾间质纤维化、抗肺纤维化、抗高氧诱导肺损
伤、免疫抑制、免疫调节、抗肿瘤、抗炎以及抗溃
疡［16］，并且能够降低动脉粥样硬化小鼠的 TC、TG 和
LDL－C［17］。课题组后续将对种仁里其它化合物进一
步分离鉴定，并对得到的苦杏仁苷及其它化合物进
行药效学筛选、整体动物实验验证、机制作用研究，
以期将其开发成为安全、低毒、有效的治疗药物。
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