全 文 ：·生物技术· 北方园艺２０１２（１０）：１２６～１２９
第一作者简介：张玲玲（１９８８－），女，硕士，研究方向为园林植物遗
传育种。Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈａｎｇ．５５２７＠１６３．ｃｏｍ。
责任作者：郭军站（１９６３－），男，硕士，副教授，硕士生导师，研究方
向为林木遗传育种。Ｅ－ｍａｉｌ：ｇｕｏｊｕｎｚｈａｎ＠１６３．ｃｏｍ。
收稿日期：２０１２－０３－０５
垂丝海棠无菌体系建立研究
张 玲 玲，郭 军 站，张 敏，杨 梅，姜 晓 丹
（西北农林科技大学 林学院，陕西 杨凌７１２１００）
摘 要：以垂丝海棠为试材，研究了外植体消毒的影响因素、芽诱导启动最适的培养基和植
物生长激素浓度组合。结果表明：每年４～８月取材的幼嫩外植体灭菌效果最好，单芽茎段用
７５％酒精３０ｓ＋０．１％ＨｇＣｌ２消毒６ｍｉｎ、叶片采用７５％酒精３０ｓ＋０．１％ＨｇＣｌ２消毒８ｍｉｎ效果最
佳，花瓣作为外植体，染菌率高，不利于无菌体系的建立；正交实验表明，芽诱导启动的最适培养
基及激素浓度组合为：ＷＰＭ＋６－ＢＡ １．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．５ｍｇ／Ｌ，启动率为８７％。
关键词：垂丝海棠；外植体消毒；芽诱导启动
中图分类号：Ｓ ６８５．９９ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１－０００９（２０１２）１０－０１２６－０４
垂丝海棠（Ｍａｌｕｓ ｈａｌｉａｎａ）为蔷薇科苹果属落叶小
乔木，又称海棠、海棠花、垂枝海棠，原产我国西南、中南、
华东等地，花期３～４月，开花时节花蕾绽放、花色艳丽，
花梗柔软下垂，其干在老化和风蚀后，苍虬蜿移，曲如龙
游，相对于花的美艳又别有一番趣味［１］。其生性强健，
喜阳光，爱温暖湿润环境，不耐阴寒，对土壤酸碱性要求
不严，栽培容易，在园林绿化中应用广泛，还可作盆花栽
培。除具有园林观赏价值外，垂丝海棠还具有一定的食
用和药用功能，它的果实酸甜可食，可制蜜饯，花气味微
苦，可作为中药材起到调经和血的作用，因而引起相关
行业的极大重视，其苗木需求量逐年增加，如何快速繁
殖大量垂丝海棠优质苗木成为关键［２］。
目前，国内对垂丝海棠的研究多集中在栽培方
面［３－４］，其繁殖多采用嫁接方式［５］，成活率低，繁殖系数
小，采用组织培养，可以加快其生长和繁殖速度。垂丝
海棠属于木本花卉，对其进行组织培养难度较大，目前
对垂丝海棠组织培养的研究较少［６］，该试验研究垂丝海
棠外植体消毒影响因素和最佳的芽诱导启动培养基和
激素浓度组合，旨在为垂丝海棠组织培养快速建立无菌
体系提供系统依据。
１ 材料与方法
１．１ 试验材料
材料取自西北农林科技大学海棠园内，分别于４、６、
８、９、１０月连续晴天后的某天中午１２：００～１４：００，取生长
健壮、无病虫害、经太阳照射后干燥的垂丝海棠植株的
幼嫩枝条和生长成熟的枝条。
１．２ 试验方法
１．２．１ 外植体消毒 晴天中午采集外植体后→放入清
水中用细软毛刷轻刷表面→去污粉水浸泡５～１０ｍｉｎ→
流水下冲洗２～３ｈ→转入超净工作台上，用７５％酒精溶
液消毒处理３０ｓ，期间轻微摇动→倒掉酒精→无菌水摇
洗１～２次→不同消毒处理（表１），期间轻微摇动→弃去
消毒液→无菌水摇洗４～５次，每次摇洗时间不少于
１ｍｉｎ→倒去无菌水→将消毒后的外植体置于灭菌培养
皿中用无菌滤纸吸干→叶片切成０．５ｃｍ×０．５ｃｍ左右
的整齐方块，茎段切成０．５～１．０ｃｍ长的单芽小段，花瓣
剪去边缘褐化部分→接种在已灭菌的培养基上。
表１ 不同消毒剂和不同消毒时间组合
Ｔａｂｌｅ １ Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｄｉｓｉｎｆｅｃｔａｎｔｓ ａｎｄ ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ
消毒处理Ｄｉｓｉｎｆｅｃｔ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ １ ２ ３ ４ ５ ６
Ａ ３０％ Ｈ２Ｏ２／ｍｉｎ ２ ４ ５ ６ ８ １０
Ｂ ２％ ＮａＣｌＯ／ｍｉｎ ２ ４ ５ ６ ８ １０
Ｃ ０．１％ ＨｇＣｌ２／ｍｉｎ ２ ４ ５ ６ ８ １０
１．２．２ 不定芽诱导 采用三因素三水平正交实验设计
（表２）筛选垂丝海棠单芽茎段不定芽诱导启动的最佳培
养基和激素浓度配比，每个处理１５瓶，每瓶２个外植体，
３次重复，培养条件：光照时间为１２～１６ｈ／ｄ，光照强度
为１ ５００ｌｘ，温度为（２５±２）℃，培养２０ｄ后，记录试验结
果，统计不定芽启动率。
表２ 正交实验设计方案Ｌ９（３４）
Ｔａｂｌｅ ２ Ｐｌａｎ ｏｆ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｄｅｓｉｇｎ Ｌ９（３４）
水平
Ｌｅｖｅｌ
因素Ｆａｃｔｏｒ
（Ａ）培养基
Ｍｅｄｉｕｍ
（Ｂ）６－ＢＡ
／ｍｇ·Ｌ－１
（Ｃ）ＮＡＡ
／ｍｇ·Ｌ－１
误差空列
Ｎｕｌ ｃｏｌｕｍｎｓ ｏｆ ｅｒｒｏｒ
１ ＭＳ ２．０ ０．５
２ １／２ＭＳ １．０ ０．２
３ ＷＰＭ ０．５ ０．１
１．３ 数据分析
染菌率（％）＝（接种染菌数／接种总数）×１００％；褐
化率（％）＝（接种褐化数／接种总数）×１００％；无菌存活率
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北方园艺２０１２（１０）：１２６～１２９ ·生物技术·
（％）＝（接种存活数／接种总数）×１００％；启动率（％）＝
（芽萌发的外植体数／无菌外植体总数）×１００％。用
Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌ进行简单数据处理作图，用ＳＰＳＳ软件对
正交实验结果进行方差分析。
２ 结果与分析
２．１ 外植体消毒影响因素
一般菌类污染在接种后３～１０ｄ即可出现，试验设
计以接种后３０ｄ统计外植体的染菌率、褐化率和无菌成
活率。
２．１．１ 外植体的幼嫩程度对消毒的影响 试验以垂丝
海棠茎段为外植体，分别选取幼嫩的茎段和生长成熟的
茎段进行试验，每个处理１５瓶，每瓶２个外植体，３次重
复，接种３０ｄ后统计外植体的染菌率、褐化率和无菌成
活率，比较外植体的幼嫩程度对消毒的影响。图１显示
幼嫩程度不同的外植体在消毒灭菌方面表现出较大的
差异，同样的消毒处理，成熟外植体污染率、褐化率较
高，无菌存活率仅有３７％，若延长成熟外植体的消毒时
间，又容易引起植物褐化死亡，成活率仍然较低；相比之
下，幼嫩外植体污染率和褐化率总体控制在３０％左右，
无菌存活率明显较高，在外植体消毒获得无菌苗方面幼
嫩外植体明显优于生长成熟的外植体，原因可能是幼嫩
的植物材料由于受周围环境的污染程度小，带菌少，更
加易于清洗和消毒，所以组织培养宜选取幼嫩外植体作
为材料，以降低试验污染率，减少不必要的损耗。
图１ 外植体的幼嫩程度对消毒的影响
Ｆｉｇ．１ Ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｅｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ａｇｅ ｅｘｐｌａｎｔｓ
２．１．２ 取材时期对外植体消毒的影响 试验在５个取
材时期内均以垂丝海棠茎段为外植体材料，每个处理１５
瓶，每瓶２个外植体，３次重复，分别统计各个取材时期
内接种３０ｄ后外植体的染菌率、褐化率和无菌成活率，
比较取材时期对外植体消毒的影响。由图２可知，取材
时期对垂丝海棠消毒效果有很大影响，取材于４、６、８月
的外植体无菌存活率明显高于９、１０月的外植体，原因是
４～８月是垂丝海棠生长的旺盛季节，植物抗性强，且这
段时期阳光较多，杀菌效果好，垂丝海棠外植体染菌率、
褐化率较低，无菌存活率较高；９、１０月是陕西杨凌的雨
季，连日多雨的天气造成细菌、真菌、大量滋生，消毒较
困难，染菌率高，且这段时期垂丝海棠生长滞后，植物抗
性下降，导致褐化率高，无菌存活率下降。
图２ 取材时期对外植体消毒的影响
Ｆｉｇ．２ Ｅｘｐｌａｎｔ ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｅｆｅｃｔ ｏｆ ｓａｍｐｌｉｎｇ ｐｅｒｉｏｄ
２．１．３ 消毒剂种类和消毒时间对不同外植体消毒的影
响 不同的外植体在自然条件下所带的菌不一样，因此
所适合的消毒方式也有所不同，试验分别以垂丝海棠茎
段、叶片、花瓣为外植体材料，设计不同消毒处理（表１），
３０ｄ后统计染菌率、褐化率和无菌存活率（表３）。表３
显示同样的消毒处理总体染菌率：花瓣≈叶片＞茎段，
总体褐化率：花瓣＞叶片≈茎段，总体无菌存活率：
茎段≈叶片＞花瓣，可见茎段和叶片是垂丝海棠组织培
养建立无菌体系相对较好的外植体材料，无菌成活率较
高；花瓣较薄，消毒处理时组织容易遭破坏，褐化死亡较
多，成活率低，很难建立无菌体系。茎段作为外植体，
０．１％ ＨｇＣｌ２作为消毒剂，随着消毒时间的延长，无菌存
活率先呈上升然后逐渐下降趋势，消毒６ｍｉｎ时无菌存
活率最高，为８６％；２％ＮａＣｌＯ作为消毒剂，无菌存活率
表３ 不同消毒组合的染菌率、褐化率和无菌存活率
Ｔａｂｌｅ ３ Ｐｏｌｕｔｉｏｎ ｒａｔｅ，ｂｒｏｗｎｉｎｇ ｒａｔｅ ａｎｄ
ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ％
染菌率
Ｐｏｌｕｔｉｏｎ ｒａｔｅ
褐化率
Ｂｒｏｗｎｉｎｇ ｒａｔｅ
无菌存活率
Ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ
处理
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
茎段
Ｓｔｅｍ
ｓｅｇｍｅｎｔｓ
叶片
Ｌｅａｆ
花瓣
Ｐｅｔａｌ
茎段
Ｓｔｅｍ
ｓｅｇｍｅｎｔｓ
叶片
Ｌｅａｆ
花瓣
Ｐｅｔａｌ
茎段
Ｓｔｅｍ
ｓｅｇｍｅｎｔｓ
叶片
Ｌｅａｆ
花瓣
Ｐｅｔａｌ
Ａ１ １００ １００ １００ ０ ０ ０ ０ ０ ０
Ａ２ ８３ ９３ ９３ ０ ３ ３ １７ ４ ４
Ａ３ ８０ ７７ ８０ ０ １０ １０ ２０ １３ １０
Ａ４ ７３ ７０ ７３ ３ ７ １７ ２４ ２３ １０
Ａ５ ７０ ７０ ６０ １７ １０ ２３ １３ ２０ １７
Ａ６ ５７ ６７ ４７ ３０ １７ ４３ １３ １６ １０
Ｂ１ １００ １００ １００ ０ ０ ０ ０ ０ ０
Ｂ２ ８７ ７０ ６３ ３ １０ １７ １０ ２０ ２０
Ｂ３ ７３ ６７ ６７ ７ １３ ２０ ２０ ２０ １３
Ｂ４ ６３ ６０ ５０ ３ １０ ３０ ３４ ３０ ２０
Ｂ５ ３３ ５７ ２３ １７ １７ ５０ ５０ ２６ ２７
Ｂ６ ７ ５３ ３０ １３ ２３ ６７ ８０ ２４ ３
Ｃ１ ９３ １００ １００ ３ ０ ０ ４ ０ ０
Ｃ２ ６７ ７３ ５７ ７ １０ ２７ ２６ １７ １６
Ｃ３ ２３ ５０ ４７ １０ １３ ２０ ６７ ３７ ３３
Ｃ４ ７ ２３ ２３ ７ １７ ２７ ８６ ６０ ５０
Ｃ５ ７ ３ １０ ４３ ２０ ５３ ５０ ７７ ３７
Ｃ６ ３ ３ ３ ６７ ２７ ８３ ３０ ７０ １４
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·生物技术· 北方园艺２０１２（１０）：１２６～１２９
随着消毒时间的延长呈上升趋势，在１０ｍｉｎ处达到最
高，为８０％；３０％ Ｈ２Ｏ２消毒整体效果差，无菌存活率在
２４％（图３－Ａ）以下。因此茎端消毒建议用０．１％ ＨｇＣｌ２
消毒处理６ｍｉｎ。叶片作为外植体，０．１％ ＨｇＣｌ２作为消
毒剂，随着消毒时间的延长，无菌存活率先呈上升然后
逐渐下降趋势，消毒８ｍｉｎ时无菌存活率最高，为７７％；
垂丝海棠叶片消毒用２％ＮａＣｌＯ、３０％Ｈ２Ｏ２效果均明显
低于０．１％ ＨｇＣｌ２，而且用０．１％ ＨｇＣｌ２消毒，时间也较
茎段长（图３－Ｂ）。这和垂丝海棠的叶片背布柔毛有很大
关系，柔毛不易彻底杀菌，需要长时间消毒。花瓣作为
外植体，消毒处理无菌存活率整体在５０％以下，效果相
对较好的是０．１％ ＨｇＣｌ２消毒６ｍｉｎ，无菌存活率５０％
（图３－Ｃ）。结合表３可见，花瓣作为外植体建立垂丝海
棠组织培养无菌体系较难，适合花瓣的更好的消毒灭菌
方法还需要进一步研究确定。
图３ 消毒剂和消毒时间对不同外植体消毒的影响
Ｆｉｇ．３ Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｄｉｓｉｎｆｅｃｔａｎｔｓ ａｎｄ ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ
ｔｉｍｅ ｏｎ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｅｘｐｌａｎｔｓ ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ
２．２ 不同培养基及激素浓度配比对不定芽诱导启动的
影响
以垂丝海棠经消毒获得的无菌单芽茎段（图４）为材
料，采用正交实验设计，试验因素为培养基（Ａ）、６－ＢＡ
（Ｂ）、ＮＡＡ（Ｃ），每个因素取３个水平，接种２０ｄ后统计
试验结果（图５），进行数据分析，极差分析见表４，方差分
析见表５。
由表４极差分析可知，根据ｒ值确定培养基（Ａ）、
６－ＢＡ（Ｂ）、ＮＡＡ（Ｃ）对垂丝海棠不定芽诱导的影响大小
为：培养基＞ＮＡＡ＞６－ＢＡ，根据各因素水平均值（ｋ）的
大小，确定最优水平组合为：Ａ３Ｂ２Ｃ１；由表５方差分析可
知，培养基（Ａ）和ＮＡＡ（Ｃ）对试验结果的影响达显著水
平（０．０１＜Ｐ＜０．０５），６－ＢＡ（Ｂ）对试验结果没有显著差异
（Ｐ＞０．０５），根据Ｆ值可以看出，３个因素对试验结果的
影响大小为Ａ＞Ｃ＞Ｂ，这与极差分析结果一致。
表４ 试验结果直观分析
Ｔａｂｌｅ ４ Ｔｅｓｔ ｒｅｓｕｌｔ ｖｉｓｕａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ
编号
Ｎｕｍｂｅｒ
（Ａ）培养基
Ｍｅｄｉｕｍ
（Ｂ）６－ＢＡ
／ｍｇ·Ｌ－１
（Ｃ）ＮＡＡ
／ｍｇ·Ｌ－１
启动率
Ｓｔａｒｔｉｎｇ ｒａｔｅ／％
１ １（ＭＳ） １（２．０） １（０．５） ５７．７７
２ １ ２（１．０） ２（０．２） ５０．００
３ １ ３（０．５） ３（０．１） ５１．１１
４ ２（１／２ＭＳ） １ ２ ５３．３３
５ ２ ２ ３ ５４．４３
６ ２ ３ １ ６３．３３
７ ３（ＷＰＭ） １ ３ ７０．００
８ ３ ２ １ ８６．６７
９ ３ ３ ２ ７３．３３
Ｋ１ １５８．８８ １８１．１０ ２０７．７７
Ｋ２ １７１．０９ １９１．１０ １７６．６６
Ｋ３ ２３０．００ １８７．７７ １７５．５４
ｋ１ ５２．９６ ６０．３７ ６９．２６
ｋ２ ５７．０３ ６３．７０ ５８．８９
ｋ３ ７６．６７ ６２．５９ ５８．５１
ｒ ２３．７１ ３．３３ １０．７５
注：Ｋ１、Ｋ２、Ｋ３分别代表不同水平３次启动率之和；ｋ１、ｋ２、ｋ３分别代表不同水
平均值启动率；ｒ代表平均极差（ｒ＝最大均值－最小均值）。
Ｎｏｔｅｓ：Ｋ１，Ｋ２，Ｋ３ｄｅｎｏｔｅ ｔｈｅ ｓｕｍ ｏｆ ｓｔａｒｔｉｎｇ ｆｏｒ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｌｅｖｅｌｓ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ；ｋ１，
ｋ２，ｋ３ｄｅｎｏｔｅ ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｏｆ ｓｔａｒｔｉｎｇ ｆｏｒ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｌｅｖｅｌｓ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ；ｒｄｅｎｏｔｅｓ ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ
ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｍａｘｉｍｕｍ ａｎｄ ｍｉｎｉｍｕｍ．
表５ 方差分析结果
Ｔａｂｌｅ ５ Ｔｅｓｔ ｒｅｓｕｌｔ ｖａｒｉａｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ
差异源
Ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ ｓｏｕｒｃｅ
ＳＳ ｄｆ ＭＳ Ｆ Ｐ－ｖａｌｕｅ Ｆｃｒｉｔ
Ａ ９６４．１７０ ２ ４８２．０８５ ８９．９１８＊ ０．０１１ Ｆ０．０１（２，２）＝９９
Ｂ １７．２８６ ２ ８．６４３ １．６１２ ０．３８３ Ｆ０．０５（２，２）＝１９
Ｃ ２２３．０９５ ２ １１１．５４８ ２０．８０６＊ ０．０４６
误差Ｅｒｒｏｒ １０．７２３ ２ ５．３６１
总计Ｔｏｔａｌ １ ２１５．２７４ ８
注：＊表示０．０５显著水平。
Ｎｏｔｅ：Ｔｈｅ ｍａｒｋ‘＊’ｄｅｎｏｔｅｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ａｔ Ｐ＝０．０５．
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北方园艺２０１２（１０）：１２６～１２９ ·生物技术·
综合极差直观分析与方差分析结果，得出垂丝海棠
芽诱导启动的最优水平组合为Ａ３Ｂ２Ｃ１，即：ＷＰＭ＋６－ＢＡ
１．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．５ｍｇ／Ｌ。
３ 结论与讨论
垂丝海棠属于木本花卉，对其进行组织培养的难度
大于草本植物，尤其在外植体灭菌方面，该试验从多方
面研究垂丝海棠外植体灭菌的影响因素，研究表明，外
植体幼嫩程度、取材时期，消毒剂种类、消毒时间都会影
响消毒效果。试验中取材于４～８月间的垂丝海棠的幼
嫩外植体消毒效果较好；在选择消毒剂和消毒时间时，
由于７５％酒精对植物细胞和组织具有很大的损伤性，消
毒时间不宜过长，常与其它消毒剂配合使用［７］，试验设
计７５％酒精分别配合３０％Ｈ２Ｏ２、２％ＮａＣｌＯ、０．１％
ＨｇＣｌ２，设置不同消毒时间对３种外植体消毒，结果表
明，在供试的３种垂丝海棠外植体中，消毒效果由好到
劣依次为幼嫩单芽茎段＞幼嫩叶片＞花瓣；其中单芽茎
段用７５％酒精３０ｓ＋０．１％ ＨｇＣｌ２消毒６ｍｉｎ、叶片采用
７５％酒精３０ｓ＋０．１％ ＨｇＣｌ２消毒８ｍｉｎ效果最佳，花瓣
用７５％酒精３０ｓ＋０．１％ＨｇＣｌ２消毒６ｍｉｎ相对较好，无
菌存活率为５０％，但是花瓣整体消毒效果较叶片和茎段
差，不利于无菌体系的建立。
植物激素是影响组织培养快速繁殖的重要因素［８］，
其成分、配比和浓度会对试验结果产生较大的影响［９－１３］，
通过正交实验设计，确定６－ＢＡ和 ＮＡＡ在垂丝海棠芽
诱导启动中的作用大小为ＮＡＡ＞６－ＢＡ，芽诱导启动以
６－ＢＡ １．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．５ｍｇ／Ｌ效果最好，其萌芽较
快且出芽率最高，可达８７％；此外，基本培养基也会对试
验结果产生影响，不同植物组织培养所需最佳培养基不
同［１４］，试验采用 ＭＳ、１／２ＭＳ、ＷＰＭ ３种基本培养基，结
果发现芽诱导启动效果由好到劣依次为 ＷＰＭ＞
１／２ＭＳ＞ＭＳ，这说明垂丝海棠芽诱导启动萌发更适宜低
盐浓度培养基。
垂丝海棠的组培机制还不够成熟，还需更多相关方
面的研究，该试验探索出垂丝海棠外植体消毒的影响因
素、提高芽启动效率的培养基和激素浓度配比，为快速建
立无菌体系提供了系统依据，可大大缩短垂丝海棠组织培
养试验时间，减少试验成本，节省优良垂丝海棠种质资源，
为组培相关方面进行深入研究奠定了扎实的基础。由于
条件限制，所研究的外植体还有局限，对于是否可以发展
更多的垂丝海棠外植体类型，还需进一步研究。
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Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ｏｆ Ａｓｅｐｔｉｃ Ｓｙｓｔｅｍ ｏｆ Ｍａｌｕｓ ｈａｌｉａｎａ
ＺＨＡＮＧ Ｌｉｎｇ－ｌｉｎｇ，ＧＵＯ Ｊｕｎ－ｚｈａｎ，ＺＨＡＮＧ Ｍｉｎ，ＹＡＮＧ Ｍｅｉ，ＪＩＡＮＧ Ｘｉａｏ－ｄａｎ
（Ｃｏｌｅｇｅ ｏｆ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ，Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｇｌｉｎｇ，Ｓｈａａｎｘｉ ７１２１００）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔａｋｉｎｇ Ｍａｌｕｓ ｈａｌｉａｎａａｓ ｔｅｓｔ ｍａｔｅｒｉａｌ，ｅｘｐｌａｎｔ ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒｓ ｏｆ Ｍａｌｕｓ ｈａｌｉａｎａａｎｄ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ
ｏｆ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｄｉｕｍ ａｎｄ ｐｌａｎｔ ｇｒｏｗｔｈ ｈｏｒｍｏｎｅｓ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｂｕｄ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ
ｔｈｅ ｅｘｐｌａｎｔｓ ｏｆ ｂｅｓｔ ｄｉｓｉｎｆｅｃｔａｎｔ ｅｆｅｃｔ ｗｅｒｅ ｔｈｏｓｅ ｗｈｉｃｈ ｗｅｒｅ ｙｏｕｎｇ ａｎｄ ｓａｍｐｌｅｄ ｉｎ Ａｐｒｉｌ ｔｏ Ａｕｇｕｓｔ ｅｖｅｒｙ ｙｅａｒ；ｔｈｅ ｂｅｓｔ
ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｓｔｅｍ ｓｅｇｍｅｎｔ ｗｉｔｈ ｓｉｎｇｌｅ ｂｕｄ ｗａｓ ７５％ａｌｃｏｈｏｌ ３０ｓｗｉｔｈ ０．１％ＨｇＣｌ２６ｍｉｎ，ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ
ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｌｅａｆ ｗａｓ ７５％ａｌｃｏｈｏｌ ３０ｓｗｉｔｈ ０．１％ ＨｇＣｌ２８ｍｉｎ，Ｂｅｃａｕｓｅ ｏｆ ｈｉｇｈ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ，ｉｔ ｗａｓ ｔｏｏ ｈａｒｄ ｆｏｒ Ｐｅｔａｌ ｔｏ
ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａｓｅｐｔｉｃ ｓｙｓｔｅｍ；Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｄｅｓｉｇｎ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｄｉｕｍ ａｎｄ ｐｌａｎｔ
ｇｒｏｗｔｈ ｈｏｒｍｏｎｅｓ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｂｕｄ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｗａｓ ＷＰＭ＋６－ＢＡ １．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．５ｍｇ／Ｌ，ａｎｄ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｒａｔｅ
ｗａｓ ８７％．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｍａｌｕｓ ｈａｌｉａｎａ；ｅｘｐｌａｎｔ ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ；ｂｕｄ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
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