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燕山2号欧李组织快繁技术研究



全 文 :河北林业科技第 5期 2011年 10月
燕山 2号欧李组织快繁技术研究
张建英 1,2
(1.河北省林木良种工程技术研究中心,河北 石家庄 050061;
2.河北省林业科学研究院,河北 石家庄 050061)
摘要:通过对燕山 2号欧李启动、增殖、生根适宜培养基的筛选试验,选出了燕山 2号欧李快繁适宜的启动培养基
MS+6-BA1.0+IBA0.2;增殖培养基 MS+BA0.3+IBA0.1;生根培养基 1/2MS+IBA0.5。
关键词:欧李;快繁;培养基
中图分类号:S723.137 文献标识码:A 文章编号:1002-3356(2011)05-0012-02
欧李属蔷薇科桃李属樱桃亚属,多年生落叶
小灌木。果实含钙量高,俗称“钙果”,含有丰富的
氨基酸,是一种新兴的保健水果,其营养价值、经
济价值和生态价值均较高,属多用途树种。欧李
常规繁殖多采用扦插和分株方法,繁殖系数较
低,不能充分满足生产需要。组织培养繁殖速度
快,整齐度高,植株寿命长,是欧李快速繁殖的最
佳方式,但欧李在组织培养过程中容易出现生长
势弱,生根效果差,组培苗移栽成活率低等问题,
本项研究旨在探讨其组织培养过程中各环节的
培养基配方,建立适宜的快速繁殖体系。
1 试验材料
试材为燕山 2号欧李。
2 研究方法
2.1 外植体材料、消毒时间及诱导培养基的选择
于 6月中旬晴天的下午采集半木质化枝条,
除去叶子,用洗洁精清洗干净,再用流水冲洗
30min,把枝条分上、中、下 3 个部位剪成 1 个芽
的茎段放于广口瓶中;在超净工作台上用 75%的
酒精浸泡 20s,无菌水冲洗 1~2 次后,倒入 0.1%
的 HgCl2溶液进行消毒(注意材料要完全浸入,期
间摇晃数次,消毒时间设 5、8、10min3个处理);
最后用无菌水冲洗 4~6次,晾干水分后接入诱导
培养基中,放入培养室培养,诱导培养用 MS+6-
BA1.0 +IBA0.2、MS +6 -BA2.0 +IBA0.2、MS +6 -
BA3.0+IBA0.2培养基。培养条件:温度(25±2)℃,
光照强度 2000~3000lx,光照时间 12h/d,空气相
对湿度 70%左右,pH值 5.8。
30d后统计污染率、存活率、萌芽率。
2.2 增殖培养基的筛选
启动成功的试管苗经过几代培养后,选长势
较一致的瓶苗剪取 1~2cm茎尖,接入添加了不同
成分的分化培养基中进行增殖培养基的筛选,培
养 30d后,调查分化株率和分化系数。
2.3 生根培养基的筛选
生根培养基以 1/2MS为基本培养基,激素为
NAA、IBA 和 IAA,其中添加 0.1、0.3、0.5、0.7mg/L
的 NAA 4 个处理 1、2、3、4;添加 0.5、1.0、1.5、
2.0mg/L的 IBA 处理标记为处理 5、6、7、8;添加
0.4、0.7、1.0mg/L的 IAA标记为处理 9、10、11。
选长势壮且较一致的瓶苗,剪取 2cm左右茎
尖,转入添加了不同激素的生根培养基中培养,
25d后调查其生根株率和生根数。
3 结果与分析
3.1 枝条不同部位萌芽情况
枝条不同部位外植体萌发情况见表 1。
外植体存活率以枝条中部茎段最高,为
72.22%,萌芽率以上部茎段最好,达到了 76.32%。
综合考虑存活率和萌芽率两方面的因素,外植体
适宜选择发育较充实的枝条上部茎段,枝条发育
程度较低的可选择枝条中部茎段。
3.2 消毒时间对外植体萌发的影响
不同消毒时间外植体萌发情况见表 2。收稿日期:2011-08-11
表 1 枝条不同部位萌发情况
材料
枝条上部
枝条中部
枝条下部
接种株数/个
90
90
90
存活率/%
60.00
72.22
52.22
萌芽率/%
76.32
69.62
66.67
12- -
DOI:10.16449/j.cnki.issn1002-3356.2011.05.040
河北林业科技第 5期 2011年 10月
表 2 不同消毒时间外植体萌发情况
消毒时间/min
5
8
10
接种株数/个
90
90
87
污染率/%
52.22
48.89
39.08
萌芽率/%
58.14
58.33
43.40
外植体材料的污染率随着消毒时间的延长而
降低,消毒 10min时污染率最低,为 39.08%,但萌
芽率也最低,只有 43.4%,说明消毒时间过长,影响
了腋芽的萌发。消毒 5min 时,污染率最高达
52.22%,但萌芽率达到了 58%。消毒 8min与消毒
5min的萌芽率差别不大,因此其消毒时间以 5~
8min为宜。
3.3 不同成分培养基对外植体萌发的影响
外植体在不同培养基上的萌发情况见表 3。
燕山 2号欧李外植体的启动较为容易,在 3
种培养基上均能正常启动,但以 MS+6-BA1.0+
IBA0.2培养基表现最佳,存活率最高,萌芽率也
最高。3种培养基的萌芽率差别不大,说明该品种
对 6-BA浓度的高低不太敏感,考虑经济方面的
因素,宜选择 MS+6-BA1.0+IBA0.2培养基作启动
培养基。
3.4 分化培养基的筛选
根据初步试验的经验,选用 IBA作为分化培
养基的激素类型,共设 9种培养基,不同培养基
配方对瓶苗分化情况的影响见表 4。
燕山 2号欧李分化较为容易,选择的 9种培
养基其分化株率最低的也达到了 69.23%,最高的
MS+BA0.3+IBA0.1培养基达到了 94.2%,其分化
系数为 4.04,为 9个处理中的最高值,而且在培
养时间延长到 50d时,其分化系数可达到 10以
上。因此,燕山 2 号欧李的分化增殖以 MS+
BA0.3+IBA0.1最佳。但在用此培养基连续继代的
过程中发现由于分化系数高,极易导致试管苗弱
小和玻璃化现象的出现,在转接过程中采用 MS+
BA0.3+IBA0.1 和 MS+BA0.1+IBA0.05 交替使用
的方法可有效克服这一现象的发生。
3.5 生根培养基的筛选
试验设 11个处理,每处理 6瓶,每瓶 5株,3
次重复,接种 25d时,调查生根株率和生根数,结
果如表 5。
由表 5可知,各处理间生根株率差异不显
著,以处理 5生根株率最高,达到 84%。各处理间
平均根数也以处理 5最好,为 3.56根,且与处理
1、2、3、4间差异达到了极显著水平。因此,燕山 2
号欧李的生根培养基可选用处理 5(1/2MS+
IBA0.5)。但调查中发现,许多根长在了愈伤组织
上,不利于瓶苗的移栽成活,通过进一步的试验,
把需要生根的瓶苗接入生根培养基培养 4~6d
后,再转接入不含激素的 1/2MS中培养,可减少
愈伤的产生,利于瓶苗的生根和移栽苗的成活,
具体在含激素培养基中的培养时间以及适宜培
养基的筛选有待于进一步的研究。
4 结论
(1)燕山 2号欧李的外植体应用当年枝条的
中上部,消毒 5~8min,然后接种在 MS+6-BA1.0+
IBA0.2培养基上进行启动培养。
(2)燕山 2 号欧李的分化增殖可采用 MS+
BA0.3+IBA0.1和 MS+BA0.1+IBA0.05交替使用的
方法,以降低分化系数,防止玻璃化现象的发生。
(3)燕山 2号欧李的生根培养基以 1/2MS+
IBA0.5表现最好,为了减少生根时愈伤组织的产
生,可把瓶苗接入生根培养基培养 4~6d后,再转
接入不含激素的 1/2MS中继续培养。
表 4 燕山 2号欧李分化试验调查
培养基类型
MS+BA0.5+IBA0.2
MS+BA0.5+IBA0.1
MS+BA0.5+IBA0.05
MS+BA0.3+IBA0.2
MS+BA0.3+IBA0.1
MS+BA0.3+IBA0.05
MS+BA0.1+IBA0.2
MS+BA0.1+IBA0.1
MS+BA0.1+IBA0.05
分化株率/%
84.87ab
85.07ab
88.73ab
91.1a
94.2a
78.0ab
87.03ab
81.8ab
69.23b
分化系数
2.57b
2.53b
3.18ab
3.46ab
4.04a
3.14ab
4.04a
3.16ab
2.75b
表 3 不同培养基对外植体萌发的影响
培养基种类
MS+6-BA1.0+IBA0.2
MS+6-BA2.0+IBA0.2
MS+6-BA3.0+IBA0.2
接种株数/个
90
90
90
污染率/%
16.67
20.00
24.44
存活率/%
72.22
54.44
57.78
萌芽率/%
76.00
65.28
72.06
表 5 燕山 2号欧李生根株数和平均根数调查
处理
5
9
1
10
2
8
11
4
7
3
6
生根株率均值
84.00a
82.67a
81.33a
80.30a
80.00a
80.00a
80.00a
78.00a
77.33a
73.33a
69.33a
处理
5
9
8
10
6
7
11
1
3
4
2
平均根数
3.56A
2.93AB
2.87 AB
2.71 AB
2.60 AB
2.55 AB
2.53 AB
2.31 B
2.05 B
1.90 B
1.83 B
注 1:1/2MS +NAA0.1、2:1/2MS +NAA0.3、3:1/2MS +NAA0.5、4:1/2MS +
NAA0.75:1/2MS +IBA0.5、6:1/2MS +IBA1.0、7:1/2MS +IBA1.5、8:1/2MS +
IBA2.09:1/2MS+IAA0.4、10:1/2MS+IAA0.7、11:1/2MS+IAA1.0
13- -