全 文 ：白鹃梅离体快繁技术的研究
周丽艳1 ,秦子禹1 ,张兴霞2 (1.河北科技师范学院生命科学系 ,河北昌黎 066600;2.河北雄县中学 ,河北雄县 071800)
摘要 [目的]探讨白鹃梅离体快速繁殖技术。[ 方法]以MS 为基本培养基 ,附加不同种类、不同浓度细胞分裂素(6-BA、KT)和生长素
(IBA、NAA),诱导离体白鹃梅快速繁殖。[结果]结果表明 ,较低浓度的细胞分裂素 6-BA 、KT和生长素 IBA混合使用 ,有利于诱导芽增殖 ,
其中以MS+0.3mg/L IBA+0.5mg/ L 6-BA配方最佳。用 1/2 MS附加 0.1～ 0.3mg/L NAA、IBA均能诱导生根 ,其中以 1/2 MS+0.3 mg/L
NAA配方最佳。
关键词 白鹃梅;快繁;细胞分裂素;生长素
中图分类号 S 722.3+7 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2008)19-08014-03
Study on Rapid Propagation Technique of Exochorda racemosa in vitro
ZHOU Li-yan et al (Department of Life Science , Hebei Science and Technology Normal University, Changli , Hebei 066600)
Abstract [ Objective] This research aimed to explore the rapid propagation technique of Exochorda racemosa in vitro.[Method] E.racemosa were cul-
tured in the MS medium which contained different kinds and densities cytokinin(6-BA , KT)and auxin(NAA , IBA)to induce the rapid propagation.
[ Result] The results showed that mixed use of lower concentration of cytokinin(6-BA , KT)and auxin(IBA)were helpful for the induction of bud propaga-
tion , and the optimum formula was MS+IBA 0.3 mg/ L+6-BA 0.5 mg/L.Both NAA and IBA with 0.1-0.3 mg/L could induce the root when it was
added into 1/ 2MS medium and the optimum medium was 1/2 MS+0.3 mg/L NAA.
Key words E.racemosa;Rapid propagation;Cytokinin;Auxin
基金项目 河北科技师范学院青年基金项目资助。
作者简介 周丽艳(1968-),女 ,河北唐山人 ,硕士 ,副教授 , 从事生物
统计 、植物细胞工程教学及研究。
收稿日期 2008-04-23
白鹃梅是蔷薇科白鹃梅属落叶灌木或小乔木 ,高 3 ～ 5
m ,总状花序[ 1] 。常用作园林设计 、城市绿化。白鹃梅的根皮
和枝皮可入药[ 2] 。白鹃梅可作为野菜食用[ 3] ,其花蕾和幼叶
均可食用 ,不仅味道鲜美且具有较高的营养价值[ 4] 。用扦
插 、嫁接 、压条等传统方法进行繁殖受季节限制 ,繁殖速度
慢 ,繁殖率低 。白鹃梅种子量少 ,发芽率不高[ 5-6] 。利用组
织培养技术快速繁殖白鹃梅 ,速度快 ,繁殖率高 ,短时间内能
生产大量整齐一致的幼苗 ,满足白鹃梅需求 ,但是到目前为
止 ,国内有关白鹃梅组织培养的研究很少。因此 ,笔者对白
鹃梅快速繁殖技术中幼芽增殖 、生根 、温室移栽各个环节进
行了探讨。
1 材料与方法
1.1 材料 河北科技师范学院园艺标本园的多年生白鹃
梅 ,于 2003年 5月上旬取当年生的幼嫩枝条。
1.2 方法
1.2.1 材料处理方法。将白鹃梅嫩枝在流水下用毛笔充分
刷洗 ,用滤纸吸去枝条表面的水分 ,在超净工作台上将带腋
芽的茎段放入 0.1%升汞溶液中浸泡 9 min ,期间轻轻翻动 ,
使枝条充分消毒 ,然后用无菌水冲洗 5次 ,剪成长 2.5 cm左
右带腋芽的茎段 ,用于接种。将上述消毒茎段接种于MS培
养基上诱导芽。待幼芽长至 2.5～ 3.0cm时剪下接种于诱导
芽增殖的培养基上。每个处理接 8瓶 ,每瓶 2个芽。将同一
培养基诱导的“丛生芽”切下转接到不同的生根培养基上诱
导生根 ,每个处理接 8瓶 ,每瓶 4株 。把已经生根的无菌苗炼
苗 3 d ,然后用流水缓缓冲去培养基 ,然后栽入基质中 ,放入
温室中培养 。统计移栽成活率。
1.2.2 试验设计及分析方法。试验采用单因素完全随机设
计 ,8次重复。试验数据利用DPS统计软件分析。
1.3 培养基
1.3.1 诱导芽增殖培养基。诱导芽增殖的培养基以MS为
基本培养基 ,附加不同浓度 、不同种类植物生长调节剂
(表 1)。
1.3.2 生根培养基。以 1/2 MS为基本培养基 ,附加不同激
素 ,诱导生根(表 2)。
表 1 诱导白鹃梅芽增殖培养基
Table 1 The media for inducing the bud propagation of Exochorda race-
mosa
处理
Treatment
培养基∥mg/ L
Media
处理
Treatment
培养基∥mg/ L
Media
1 MS+NAA 0.1+6-BA 0.3 11 MS+IBA 0.3+6-BA 0.1
2 MS+NAA 0.5+6-BA 0.3 12 MS+IBA 0.3+6-BA 0.3
3 MS+NAA 1.0+6-BA 0.3 13 MS+IBA 0.3+6-BA 0.7
4 MS+NAA 0.1+6-BA 0.5 14 MS+IBA 0.3+6-BA 1.0
5 MS+NAA 0.5+6-BA 0.5 15 MS+IBA 0.3+KT 0.1
6 MS+NAA 1.0+6-BA 0.5 16 MS+IBA 0.3+KT 0.3
7 MS+IBA 0.1+6-BA 0.5 17 MS+IBA 0.3+KT 0.5
8 MS+IBA 0.3+6-BA 0.5 18 MS+IBA 0.3+KT 1.0
9 MS+IBA 0.5+6-BA 0.5 19 1/ 2MS+IBA 0.3+6-BA 0.5
10 MS+IBA 1.0+6-BA 0.5
表 2 诱导白鹃梅生根培养基
Table 2 The media for inducing the rooting of Exochorda racemosa
处理
Treatment
培养基∥mg/L
Media
处理
Treatment
培养基∥mg/ L
Media
20 1/2 MS+NAA 0.5+6-BA 0.3 25 1/ 2MS+NAA 0.3
21 1/2 MS+NAA 1.0+6-BA 0.3 26 1/ 2MS+NAA 0.5
22 1/2 MS+NAA 0.5+6-BA 0.1 27 1/ 2MS+IBA 0.3
23 1/2 MS+NAA 1.0+6-BA 0.1 28 1/ 2MS+IBA 0.5
24 1/2 MS+NAA 0.1 29 MS+NAA 0.3
1.4 培养条件 培养温度:(25±2)℃。光照强度:诱导芽
增殖为 1 800 ～ 2 000 lx ,诱导生根为 1 000～ 1 500 lx。光照时
间:诱导芽增殖为 12 h/d ,诱导生根为 10 h/d;培养室内相对
湿度为 60%～ 80%。
1.5 统计标准 增殖率为增殖段数占接种段数的百分数 。
增殖系数为增殖芽数占增殖段数的比值 。生根率为生根段
数占接种段数的百分数。移栽成活率为成活棵数占移栽棵
安徽农业科学 , Journal of Anhui Agri.Sci.2008 ,36(19):8014-8016 责任编辑 王淼 责任校对 傅真治
数的百分数[ 7] 。
2 结果与分析
2.1 诱导白鹃梅芽增殖培养基的选择
2.1.1 6-BA 浓度一定 ,不同浓度 IBA对芽增殖的影响。由
表 3可知 ,MS+0.3mg/L IBA+0.5mg/L 6-BA ,MS+0.5 mg/L
IBA+0.5mg/L 6-BA芽增殖系数比MS+0.1mg/L IBA+0.5
mg/L 6-BA ,MS+1.0mg/L IBA+0.5mg/L 6-BA诱导的芽增殖
系数高。经方差分析可知 ,芽增殖率之间差异不显著。
2.1.2 IBA浓度一定 ,不同浓度 6-BA对芽增殖的影响。由
表 4可知 ,MS+0.3mg/L IBA+0.5 mg/L 6-BA诱导的芽增殖
系数最高 ,与其他处理有很大差异。在接种后 14～ 28 d ,在所
有培养基中MS+0.3mg/L IBA+0.5mg/L 6-BA诱导增殖芽
数总是最多 ,其优势随培养天数的增加日益明显。经方差分
析芽增殖率之间差异不显著。
2.1.3 IBA浓度一定 ,不同浓度的KT对芽增殖的影响 。由
表 5可知 ,当 IBA为 0.3mg/L时 ,附加 0.3～ 1.0mg/L KT ,白
鹃梅的芽增殖率及增殖系数显著好于附加 0.1 mg/L KT的
组合 。
表 3 不同浓度 IBA对芽增殖的影响
Table 3 Effects of IBA at different concentrations on bud propagation
培养基∥mg/ L
Media
接种段数
Inoculation segment number
增殖段数
Propagation segment number
增殖率∥%
Propagation rate
增殖芽数
Propagation bud number
增殖系数
Propagation coefficient
MS+IBA 0.1+6-BA 0.5 16 15 93.75 36 2.40 b
MS+IBA 0.3+6-BA 0.5 16 16 100.00 76 4.75 a
MS+IBA 0.5+6-BA 0.5 16 16 100.00 62 3.88 a
MS+IBA 1.0+6-BA 0.5 16 16 100.00 39 2.44 b
注:表中数据均为培养 28 d后 ,同列不同小写字母表示在 0.05水平上有显著差异 ,下同。
Note:The data in the table were determined after culturing 28 days.Different small letters mean significant difference at 0.05 level.The same as below.
表4 不同浓度 6-BA对芽增殖的影响
Table 4 Effects of 6-BA at different concentrations on bud propagation
培养基∥mg/ L
Media
接种段数
Inoculation segment number
增殖段数
Propagation segment number
增殖率∥%
Propagation rate
增殖芽数
Propagation bud number
增殖系数
Propagation coefficient
MS+IBA 0.3+6-BA 0.1 16 15 93.75 36 2.40 c
MS+IBA 0.3+6-BA 0.3 16 16 100.00 61 3.81 b
MS+IBA 0.3+6-BA 0.5 16 16 100.00 78 4.88 a
MS+IBA 0.3+6-BA 0.7 16 16 100.00 5 3.63 b
MS+IBA 0.3+6-BA 1.0 16 16 100.00 39 2.44 c
表5 不同浓度 KT对芽增殖的影响
Table 5 Effects of KT at different concentrations on bud propagation
培养基∥mg/ L
Media
接种段数
Inoculation segment number
增殖段数
Propagation segment number
增殖率∥%
Propagation rate
增殖芽数
Propagation bud number
增殖系数
Propagation coefficient
MS+IBA 0.3+KT 0.1 16 3 18.75 b 3 1.00 b
MS+IBA 0.3+KT 0.3 16 7 43.75 ab 15 2.14 a
MS+IBA 0.3+KT 0.5 16 11 68.75 a 20 1.82 ab
MS+IBA 0.3+KT 1.0 16 6 37.50 ab 11 1.83 a
2.1.4 6-BA与KT诱导芽增殖效果比较 。由表 6可知 ,凡是
附加 6-BA的培养基白鹃梅芽增殖率及增殖系数均高于附加
KT的培养基 ,因此用 6-BA作细胞分裂素与 IBA搭配使用诱
导白鹃梅芽增殖较好。
表6 不同浓度 6-BA、KT对芽增殖的影响
Table 6 Effects of 6-BA and KT at different concentrations on bud propagation
培养基∥mg/ L
Media
接种段数
Inoculation segment number
增殖段数
Propagation segment number
增殖率∥%
Propagation rate
增殖芽数
Propagation bud number
增殖系数
Propagation coefficient
MS+IBA 0.3+6-BA 0.1 16 15 93.75 ab 36 2.40 c
MS+IBA 0.3+6-BA 0.3 16 16 100.00 a 61 3.81 b
MS+IBA 0.3+6-BA 0.5 16 16 100.00 a 78 4.88 a
MS+IBA 0.3+6-BA 0.7 16 16 100.00 a 58 3.63 b
MS+IBA 0.3+6-BA 1.0 16 16 100.00 a 39 2.44 c
MS+IBA 0.3+KT 0.1 16 3 18.75 d 3 1.00 e
MS+IBA 0.3+KT 0.3 16 7 43.75 cd 15 2.14 cd
MS+IBA 0.3+KT 0.5 16 11 68.75 bc 20 1.82 de
MS+IBA 0.3+KT 1.0 16 6 37.50 d 11 1.83 cd
2.1.5 用NAA做生长素诱导芽增殖。因为NAA和 IBA均为
生长素类物质 ,所以用NAA代替 IBA做增殖试验。将芽接种
到表 1中 1 ～ 6号培养基中 ,所接的无菌苗全部脱分化变成坚
硬绿色愈伤组织 ,没有芽增殖。
801536卷 19期 周丽艳等 白鹃梅离体快繁技术的研究
2.1.6 基本培养基浓度对芽增殖的影响。用 1/2 MS+0.3
mg/L IBA+0.5mg/L 6-BA培养基与MS+0.3mg/L IBA+0.5
mg/L 6-BA培养基比较 ,看诱导芽增殖的效果。结果表明后
者诱导芽增殖的效果好于前者。二者的增殖率及增殖系数
均达 0.05显著水平 ,说明诱导白鹃梅增殖芽需要较高水平的
基本培养基 。
2.2 白鹃梅生根培养基的选择
2.2.1 NAA与 6-BA混合使用诱导白鹃梅生根 将幼芽接
种到表 2所列 20～ 23号培养基上 ,诱导生根。结果观察到这
4个处理的芽全部脱分化成致密绿色的愈伤组织 ,没有分化
根。这表明细胞分裂素 6-BA和生长素NAA混合使用只能诱
导形成致密绿色愈伤组织。
2.2.2 单独使用NAA或 IBA诱导白鹃梅生根。将幼芽接种
到表 2所列 24 ～ 28号培养基中。由表 7可知 , 1/2 MS+0.3
mg/L NAA诱导生根效果最好。试验中观察到 ,用 0.1 ～ 0.5
mg/L NAA诱导生根时 ,在接种 7 d后就有根生成。根多而整
齐 ,根粗 ,颜色为白色。用 IBA诱导生根时 ,在接种 14 d后才
有根生成。根少而且长短不一 ,根细 ,颜色发暗。因此低浓
度的NAA诱导白鹃梅生根效果较 IBA好 。
表7 不同浓度 IBA/NAA对生根的影响
Table 7 Effects of IBA and NAA at different concentrations on the rooting
培养基∥mg/ L
Media
接种段数
Inoculation
segment number
生根段数
Rooting seg-
ment number
生根率
Rooting
rate∥%
生根总条数
Number of
rooted branches
1/ 2MS+IBA 0.3 32 6 18.75 c 18
1/ 2MS+IBA 0.5 32 8 25.00 c 22
1/ 2MS+NAA 0.1 32 17 53.13 bc 47
1/ 2MS+NAA 0.3 32 28 87.50 a 93
1/ 2MS+NAA 0.5 32 19 59.38 ab 58
2.2.3 基本培养基浓度对诱导生根的影响。同时设置培养
基MS+0.3mg/L NAA与 1/2 MS+0.3mg/L NAA比较 ,结果
1/2 MS+0.3 mg/L NAA诱导生根效果显著好于 MS +0.3
mg/L NAA。
2.3 移栽 打开三角瓶口炼苗 3 d ,然后将生根的试管苗取
出 ,洗去根部的培养基 ,进行移栽 。移栽温度分为(25±2)
℃,光照强度为 5 000 ～ 10 000 lx ,空气相对湿度为 60%～
70%。分别移栽至蛭石 、蛭石∶河沙(1∶1)中。遮盖塑料薄膜 5
d ,移栽 35 d调查计算移栽成活率。
2.3.1 移栽基质对成活率的影响。由表 8可以看出 ,以蛭石
作为移栽基质成活率明显高于蛭石∶河沙(1∶1)。原因可能是
河沙吸水性好 ,基质紧实 ,不利于根的生长因而移栽成活率
低。而蛭石的保水性 、通透性都比较好 ,不仅有利于根的呼
吸 ,也有利于根的生长 ,因而移栽成活率高。
3 结论与讨论
(1)试验结果表明 ,MS+0.3mg/L IBA+0.5mg/L 6-BA为
较好的芽增殖培养基。1/2 MS+0.3 mg/L NAA为较好的生
根培养基 。移栽时 ,可在 25 ℃条件下 ,以蛭石为移栽基质。
表 8 不同处理在不同基质中移栽成活情况
Table 8 Transplanting survival rate of Exochorda racemosa in different ma-
trix under different treatments
生根培养基
Rooting media
mg/ L
移栽成活率∥%
Transplanting survival rate
蛭石∶河沙(1∶1)
Vermiculite∶Riversand(1∶1) 蛭石Vermiculite
1/ 2 MS+IBA 0.3 66.67 66.67
1/ 2 MS+IBA 0.5 66.67 75.00
1/ 2 MS+NAA 0.1 66.67 75.00
1/ 2 MS+NAA 0.3 77.78 88.89
1/ 2 MS+NAA 0.5 66.67 80.00
MS 50.00 77.78
MS+NAA 0.3 50.00 50.00
注:为移栽 35 d后。
Note:The data were determined after transplanting 35 days.
(2)芽增殖培养一般多用生长素NAA或 IBA与一种细胞
分裂素配合使用[ 8] 。在诱导白鹃梅芽增殖试验过程中 ,用
IBA配合 6-BA诱导芽增殖效果较好。而用NAA代替 IBA与
6-BA配合使用 ,却长出愈伤组织 ,不能增殖芽 。这与Waring
PP 、裴东等的观点一致[ 9-10] 。MS+0.3mg/L IBA+0.5mg/L
6-BA比MS+(0.5 ,1.0)mg/L IBA+0.5 mg/L 6-BA诱导芽增
殖效果好 。这一结果与生长素/细胞分裂素比值低有利于分
化出芽的结论不一致[ 11] 。
(3)IBA 、NAA均能诱导白鹃梅茎段生根 ,但 IBA诱导生
根率低。原因可能是 IBA能刺激形成层细胞的活性 ,间接产
生促进不定根生成的主要内源物质 IAA ,而 IAA活性低 ,同时
在根原基形成过程中不断被氧化而降低含量 ,由此造成生根
率低。而NAA 则较稳定 ,不易分解 ,所以诱导生根率较高 。
此试验结果与徐继忠的研究结果一致[ 12] 。
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8016 安徽农业科学 2008年