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佛甲草抗炎作用研究



全 文 :[收稿日期] 20100715(003)
[基金项目] 江西省卫生厅中医药科研基金(2006B37)
[第一作者] 廖跃华,大专,实验师,主要从事临床生化研究,
Tel:0797-8208514
[通讯作者] * 周青,大专,高级实验师,研究方向:中药药理,
Tel:0797-8169776,E-mail:zhouqing4819 @ yahoo.
com. cn
佛甲草抗炎作用研究
廖跃华1,吴丽珍2,程赣中2,周俐2,眭荣燕2,周青2*
(1.赣州市立医院检验科,江西 赣州 341000;2.赣南医学院,江西 赣州 341000)
[摘要] 目的:研究佛甲草(Sedum lineare Thunb,SLT)的抗炎作用。方法:采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀、醋酸致小鼠腹腔
毛细血管通透性增加、植入棉球致小鼠肉芽组织增生等炎症模型,观察 SLT的抗炎作用;测定小鼠胸腺、脾脏指数,观察 SLT对
免疫器官质量的影响。结果:SLT可明显抑制二甲苯致小鼠耳廓肿胀、醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加,能显著抑制小鼠
肉芽组织增生,降低胸腺指数,升高脾指数。结论:SLT有明显的抗炎作用,其抗炎机制与调节免疫功能有关。
[关键词] 佛甲草;抗炎作用;小鼠
[中图分类号] R285. 5 [文献标识码] A [文章编号] 1005-9903(2011)03-0142-03
Anti-inflammatory Effect of Sedum lineare in Mice
LIAO Yue-hua1,WU Li-zhen2,CHENG Gan-zhong2,ZHOU Li2,SUI Rong-yan2,ZHOU Qing2*
(1. The Laboratory Department of Municipal Hospital,Ganzhou 341000,China;
2. Gannan Medical College,Ganzhou 341000,China)
[Abstract] Objective:To investigate the anti-inflammatory effect of Sedum lineare Thunb(SLT). Method:
Three models were used to explore the anti-inflammatory effect of SLT. Two acute inflammatory models were made in
mice,one was ear edema induced by d imethylbenzene,and the other was higher permeability of blood capillary
induced by acetic acid. The chronic inflammatory model of granulation tissue was established by cotton pellets
implantation in mice. Result:SLT suppressed the swelling of earflaps induced by dimethylbenzene,decreased the
permeability of blood capillary induced by acetic acid obviously,and it significantly inhibited the proliferation of
granulation tissue. SLT also decreased thoracic gland index and enhanced the spleen index in chronic inflammatory
model. Conclusion:The SLT has obvious anti-inflammatory effect,which may result from modulating immune
function.
[Key words] Sedum lineare Thunb;anti-inflammatory effect;mice
佛甲草(Sedum lineare Thunb,SLT)为景天科植
物佛甲草的全草,味甘、寒、无毒,具有清热、解毒、消
肿、利胆等功效,传统中医用于治疗咽喉肿痛、痈肿、
疔疮、烫伤、蛇咬伤、黄疸、迁延性肝炎等[1]。本课题
组前期研究表明 SLT 具有抗肝损伤[2]、抗疲劳[3]、
抗脂质过氧化[4]以及对心、脑缺氧具有保护作用[5],
SLT的抗炎作用尚未见报道,故本文采用多种动物
炎症模型,初步探讨 SLT的抗炎作用。
1 材料
1. 1 动物 昆明种小鼠,体重(20 ± 2)g,雌雄各半,
由赣南医学院实验动物中心提供。
1. 2 药品 佛甲草提取液:佛甲草晒干后粉碎至粗
粉,取适量蒸馏水加热提取 3 次,每次 30 min,过滤,
合并 3 次滤液并浓缩至适量,加入相当浓缩液 3 倍
量 95%乙醇,放置冰箱 48 h 后减压过滤,滤液回收
乙醇至无醇味并浓缩成 2. 5 g·mL -1的溶液,实验前
用生理盐水稀释至所需浓度供用;醋酸地塞米松,安
·241·
第 17 卷第 3 期
2011 年 2 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 17,No. 3
Feb.,2011
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2011.03.050
徽金太阳生化药业有限公司,批号 0904082;依文思
蓝,Fluka进口分装品;其余试剂均为分析纯。
1. 3 仪器 722N 可见分光光度计,上海精密科学
仪器有限公司;KDC-2046 低速冷冻离心机,合肥科
大创新股份有限公司中佳分公司;TG328B型光学分
析天平,湘仪天平仪器厂;打孔器,上海奉贤南桥机
械厂。
2 方法
2. 1 二甲苯致小鼠耳廓炎症实验[6] 取健康小鼠
44 只,随机分成 4 组,每组 11 只,分别为生理盐水对
照组、阳性对照组(醋酸地塞米松 2. 25 mg·kg -1)及
SLT 4,8 g·kg -1组,ig,每日 1 次,连续 5 d。末次给
药 30 min后每只小鼠均在左耳两面各涂二甲苯 20
μL致炎。致炎后 1 h处死动物,沿耳廓基线剪下两
耳,用 9 mm 直径打孔器取对称处的圆耳片,称质
量,以耳片肿胀度(左右耳片质量差)作为炎症指
标,计算肿胀抑制率。
肿胀抑制率 = (1 - 给药组肿胀度 /生理盐水组肿胀
度)× 100%
2. 2 醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性实验[7] 取
健康小鼠 48 只,随机分成 4 组,每组 12 只,动物分
组、给药周期及给药剂量同 2. 1。末次给药后 1 h,
各组小鼠尾静脉注射伊文思蓝 50 mg·kg -1,随即 ip
0. 6%醋酸 10 mL·kg -1,30 min 后,断头放血处死小
鼠,剖腹,用 6 mL蒸馏水多次冲洗腹腔,收集冲洗液
并稀释至 10 mL,3 000 r·min -1离心,取上清液于
722N可见分光光度计 590 nm 处测定吸收度,于伊
文思蓝标准曲线上查出每只小鼠腹腔渗出之染料
量,并计算其腹腔染料渗出抑制率。
渗出抑制率 =(1 -给药组染料渗出量 /生理盐水组染料
渗出量)× 100%
2. 3 小鼠肉芽组织增生及对小鼠免疫器官质量指
数影响实验[8] 取昆明种小鼠 40 只,ip戊巴比妥钠
45 mg·kg -1麻醉,在无菌操作下将 15 mg 灭菌脱脂
棉球一只植入小鼠右肩皮下(每只棉球滴 2%氨苄
青霉素钠 50 μL预处理)。术后小鼠随机分为 4 组,
每组 10 只,动物分组及给药剂量同 2. 1。待其清醒
后,分别灌胃给药,1 次 /d,共 7 d。于第 8 d 断头放
血处死小鼠,剥离棉球肉芽肿,于 80 ℃烘箱干燥后
称质量,减去原棉球质量并计算抑制率。剥离棉球
肉芽肿后,立即摘取各鼠脾脏及胸腺,称质量,称体
重计算其脏器指数。
肉芽组织增生抑制率 =(1 -给药组肉芽组织干质量 /生
理盐水组肉芽组织干质量)× 100%
2. 4 统计学处理 应用 Prism 4. 0 统计学软件进行
统计学分析。各测量指标的数据资料以 珋x ± s 表示,
各组间测定指标的总体比较采用单因素方差分析,
组内各指标的多重比较采用 SNK-q 检验,P < 0. 05
有统计学意义。
3 结果
3. 1 SLT对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响 结果
表明,SLT 4,8 g·kg -1组对二甲苯引起的耳廓肿胀均
有明显的抑制作用,与生理盐水组比较差异有统计
学意义(P < 0. 01)。结果见表 1。
表 1 SLT对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响(珋x ± s,n = 11)
组别
给药剂量
/ g·kg -1
耳廓肿胀度
/mg
肿胀抑制率
/%
生理盐水 - 16. 55 ± 5. 89 -
SLT 4 10. 27 ± 5. 062) 37. 95
8 9. 64 ± 4. 592) 41. 75
地塞米松 2. 25 × 10 -3 5. 18 ± 2. 683) 68. 70
注:与生理盐水组比较1)P < 0. 05,2)P < 0. 01,3)P < 0. 001(表
2 ~ 4 同)。
3. 2 SLT对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性的影
响 由表 2 可知,SLT 4,8 g·kg -1组与生理盐水组比
较,伊文思蓝的渗出量显著下降(P < 0. 01),提示
SLT能显著抑制醋酸致小鼠毛细血管通透性增加。
表 2 SLT对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性的影响(珋x ± s,n = 12)
组别
给药剂量
/ g·kg -1
染料渗出量
/mg
渗出抑制率
/%
生理盐水 - 0. 50 ± 0. 09 -
SLT 4 0. 15 ± 0. 102) 70. 00
8 0. 21 ± 0. 132) 58. 00
地塞米松 2. 25 × 10 -3 0. 16 ± 0. 082) 68. 00
3. 3 SLT对小鼠肉芽组织增生的影响 由表 3 可
知,SLT 4,8 g·kg -1组与生理盐水组相比,小鼠肉芽
肿质量显著降低(P < 0. 01,P < 0. 05),提示 SLT 能
有效抑制小鼠肉芽组织增生。
表 3 SLT对小鼠肉芽组织增生的影响(珋x ± s,n = 10)
组别
给药剂量
/ g·kg -1
肉芽肿质量
/mg·(10 g)- 1
增生抑制率
/%
生理盐水 - 13. 66 ± 4. 52 -
SLT 4 9. 03 ± 4. 181) 33. 89
8 6. 95 ± 2. 542) 49. 12
地塞米松 2. 25 × 10 -3 9. 27 ± 4. 501) 32. 14
3. 4 SLT 对小鼠免疫器官的影响 结果表明,SLT
·341·
廖跃华,等:佛甲草抗炎作用研究
4 g·kg -1组明显下调小鼠胸腺指数,与生理盐水组
比较差异有统计学意义(P < 0. 01);SLT 4,8 g·kg -1
组均有上调小鼠脾脏指数的趋势,但与生理盐水组
比较差异无统计学意义。结果见表 4。
表 4 SLT对小鼠免疫器官的影响(珋x ± s,n = 10)
组别
给药剂量
/ g·kg -1
胸腺指数
/mg·(10 g)- 1
脾脏指数
/mg·(10 g)- 1
生理盐水 - 39. 37 ± 9. 00 31. 26 ± 10. 36
SLT 4 26. 38 ± 7. 532) 39. 21 ± 13. 09
8 34. 60 ± 7. 44 40. 24 ± 11. 54
地塞米松 2. 25 × 10 -3 21. 36 ± 11. 693) 38. 45 ± 11. 58
4 讨论
炎症是机体对各种物理、化学、生物等有害刺激
所产生的一种以防御为主的病理反应。炎性渗出、
组织肿胀是炎症早期的重要指标,在炎症晚期和慢
性炎症期,巨噬细胞和淋巴细胞浸润及小血管和结
缔组织增生,形成肉芽组织[9-10]。二甲苯致小鼠耳
廓肿胀、醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性实验是以
局部充血、渗出、水肿为特征的急性炎症动物模型,
棉球肉芽肿实验是以炎性增生为特征的慢性炎症动
物模型,为目前筛选抗炎新药最常用的方法。本实
验结果显示,SLT能抑制小鼠耳廓肿胀、降低毛细血
管通透性,表明 SLT 对急性炎症早期的毛细血管扩
张、渗出和水肿有明显抑制作用;SLT 能减轻小鼠肉
芽肿,表明 SLT对慢性炎症有明显的抑制作用。
胸腺和脾脏作为机体中枢免疫器官和外周免疫
器官,不仅是 T、B 淋巴细胞分化成熟的场所,也是
产生特异性免疫应答的场所。二者的脏器指数是反
映机体免疫功能最基本和最常规的指标,已被广泛
用于评价机体的整体免疫状态。药物对动物胸腺、
脾脏质量的影响,可作为免疫药理机制的初步指
标[11]。实验结果表明 SLT 4 g·kg -1组能明显下调小
鼠胸腺指数,SLT 4,8 g·kg -1组对脾脏指数均有上调
趋势。提示 SLT可能通过调节机体的免疫状态来发
挥抗炎作用。
综上所述,SLT 具有较强的抗炎作用。其抗炎
机制与免疫调节功能有关,至于 SLT 如何影响免疫
调节功能,有待于进一步的深入研究。
[参考文献]
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[责任编辑 聂淑琴]
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第 17 卷第 3 期
2011 年 2 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 17,No. 3
Feb.,2011