全 文 ：文章编号: 1009 - 5276( 2003) 08 - 1306 - 02 中图分类号:R241. 2 文献标识码:A 收稿日期: 2003 - 01 - 21
垂盆草苷的含量测定与药理研究
赖荣胜1 潘金火2
( 1. 南京中医药大学药学院, 210029, 江苏南京; 2.江苏省杨子江制药厂, 210000,江苏南京 / /
第一作者男, 1976 年生, 2001 级硕士研究生)
关 键 词:垂盆草苷; 化学结构; 定性定量; 药理作用
垂盆草为景天科植物垂盆草 ( Sedum sarmentosum
Bunge)的新鲜或干燥全草, 分布于全国大部分地区, 民间用
于治疗各种肝炎、咽喉肿痛、水火烫伤、蛇虫咬伤。临床应用
表明,垂盆草能显著降低血清谷丙转氨酶。1979 年方圣鼎
等从水溶性部位分离到一种氰苷类成分: 2 -氰基 - 4 - O -
B- D - 葡萄糖反丁烯 - 2 - 醇, 命名为垂盆草苷 ( sarmen-
tosin) ,并指出其为抗肝炎活性成分112。为使大家对该成分
的化学性质和药理活性有更全面的了解,笔者将从以下四个
方面对垂盆草苷的化学、药理等进行综述。
1 化学结构
将新鲜垂盆草 60 e 干燥后粉碎, 用 95% 乙醇回流提取
3 次, 每次 2 小时,提取液回收乙醇后, 加水研磨溶解, 过滤,
滤液用氯仿萃取 3 次,水层减压浓缩, 通过活性炭柱吸附, 然
后先用蒸馏水冲洗, 继而用 70%乙醇洗脱, 收集醇洗脱液,
减压浓缩,得糖浆状残渣, 加适量硅胶搅拌,低温干燥后上硅
胶柱,先用水饱和乙酸乙酯冲洗, 再用乙酸乙酯 ) 甲醇( 8B1)
洗脱,分部收集, 经硅胶薄层层析检查,将含有垂盆草苷的流
份合并,浓缩, 按上法进行两次硅胶柱层析,以乙酸乙酯 ) 甲
醇( 3B2)为洗脱液, 分部收集, 合并垂盆草苷流份, 浓缩后得
糖浆状残渣,此残渣再经硅胶柱层析纯化, 用氯仿 ) 甲醇( 5B
1)洗脱, 合并纯垂盆草苷流份, 减压浓缩即得透明无色胶状
物,得率约 0. 1% ;该物极易溶于水,用各种有机溶剂未能结
晶,味苦, 与A-萘酚呈阳性反应, 不能还原费林试剂, 用酸
水解后则具有还原性,遇碱不稳定, 在稀苛性碱溶液中,室温
放置即能定量地转变成一结晶性化合物,临床试验表明该化
合物无生理活性。122
方圣鼎等对其进行元素及质谱测定, 确定其分子式为:
C11H17O 7N; 通过红外光谱、核磁共振波谱、质谱等手段确认
其结构为 2 -氰基 - 4 - O - B- D - 葡萄糖反丁烯 - 2 -醇,
并命名为垂盆草苷 ( sarmentosin ) 122其立体构象见上图。诸
国华等以 1, 2, 4 - 丁三醇 - 1, 2 - 丙缩酮为原料,经八步反
应完成了天然产物垂盆草苷的人工合成。13 -42
2 定性鉴别152
供试液制备:垂盆草的丙酮提取液,减压回收丙酮至干,
加水适量溶解,滤过, 水液减压蒸干,加甲醇溶解后与适量硅
胶拌匀,上硅胶柱,以氯仿 - 甲醇( 5B1)洗脱弃去初洗液, 收
集后面的洗脱液备用。
展开条件:硅胶 G 板,以氯仿 -甲醇( 8B3)为展开剂, 展
开后取出晾干, 50% 硫酸液显色后, 于 110e 下加热 5~ 10
分钟,供试液在与垂盆草苷相同 Rf值处应显黑色斑点。
3 含量测定
红外光谱法162 仪器与试剂: PE599B型红外光谱仪和
PE3500 红外数据仪,液体可折池, N - 二甲基甲酰胺。样品
的处理:取垂盆草干浸膏加少量甲醇和硅胶拌匀, 在 70 e 烘
干,用丙酮提取, 蒸干丙酮, 加水溶解, 滤过, 水溶液减压蒸
干,加甲醇溶解, 拌入适量硅胶, 70 e 烘干,加到湿法装成的
硅胶柱上 ,以氯仿 - 甲醇( 8B3)洗脱, 收集第一色带部分弃
去,然后收集后几份流份, 以薄层定性,合并含垂盆草苷的流
份,减压蒸干。标准曲线绘制: 精密称取垂盆草苷对照品, 以
N -二甲基甲酰胺溶解并稀释至刻度(原液)。分别取不同
量原液和 N -二甲基甲酰配成几个不同浓度的标准溶液。
装池,在仪器上记录其图谱并存于磁盘, 选择 2215. 5cm - 1的
氰基伸缩震谱带为分析谱带,确定其各个参数,经计算, 应采
用浓度与峰面积关系的标准曲线作定量的标准曲线, 样品按
标准曲线项下之方法进行测定, 记录图谱, 经计算机计算即
可。
RP - HPLC 法172 仪器: PE100 型 HPLC 仪, CC - 12 型
微处理机;固定相: Kromasil C18柱( 5L, 250mm @ 3. 9mm 大连
化学物理研究所 ) ; 流动相: 甲醇 -乙腈 - 水( 8B10B82) , 流
速: 0. 8ml /分钟;检测波长: 260mm; 柱温: 30e ; 垂盆草苷对
照品由中科院上海药物所提供 (面积归一化法测得纯度为
97. 60% )。样品测定: 精密称取垂盆草药材粗粉 ( 20 目 )约
10g,置索氏提取器中,用乙醚提取至无色(约 8~ 10 小时) ,
减压回收乙醚后,加 H2O 溶解, 抽滤, 滤液拌适量硅胶 H, 真
空干燥,上硅胶小柱, 以 CHCl3 - MeOH ( 8B2)洗脱, 前 20ml
弃去,收集后面含指标成分的所有流份,合并后, 低温挥尽溶
剂, MeOH 溶解并定容至 100ml, 进样前用 0. 45L滤膜压滤。
线性范围为: 1. 06~ 5. 28Lg。
仪器: Perkin Elmer series Ó 型高压液相色谱仪, SPD -
1型检测器,岛津 C - RIA 色谱处理机, TOYO - KS - 13 型
样品过滤器。固定相: Lichroso rb RP - 18, RP - 8 键合苯基、
氰基及氨基色谱柱 ( 10Lm, 25cm @ 4. 6mm, 预柱 5cm @
4. 6mm,柱和预柱均为高压匀浆填充)。流动相: 乙腈- 甲醇
-水( 6B2B100) , 流速: 0. 5 ~ 1ml/分钟; 检测波长: 225nm。
#1306#
中 医 药 学 刊 2003年 8月第 21卷第 8期
DOI：10.13193/j.archtcm.2003.08.88.lairsh.049
对照液: 称垂盆草苷对照品, 加水溶解, 配制成约 0. 6mg /ml
溶液。供试液准确称取生药( 70 e 以下干燥, 粉碎,过 40 目
筛) 10g 或相当于垂盆草苷 5~ 10mg 的浸膏,冲剂及片剂, 置
脂肪提取器中, 加丙酮 150ml, 80e 水浴回流提取至垂盆草
苷提尽, 滤过,回收丙酮至约 1ml, 加水 10ml振摇; 滤过; 滤
液减压蒸干,加甲醇溶解, 滤入 10ml容量瓶中, 并定容至刻
度;或取新鲜植物研磨成匀浆, 称取约含有效苷 5mg 的匀浆
液,过滤, 以热水洗涤。进样量约相当于有效苷 4Lg 至 8Lg,
以外标二点法计算有效苷含量。
气相色谱法18 - 92 垂盆草烘干, 粉碎,置索氏提取器中,
以丙酮回流提取,减压回收丙酮至少量, 加入等体积的水, 减
压抽尽丙酮,加水热溶, 过滤,水洗 1~ 2 次, 合并水液, 减压
蒸干,加入少许甲醇溶解, 吸取此液少量于反应试管中,用水
泵抽去溶剂,置 P 2O5 干燥器中过夜 ,次日加入硅醚化试剂,
盖紧,于 60e 加热 1 小时, 冷后直接进样,作标准曲线,求出
斜率 Q, 用外标法计算含量。
4 药理研究
保肝作用 垂盆草对动物实验性肝损伤有明显的保护
作用。小鼠口服垂盆草提取物相当于原生药 0. 33g /日, 连
续6 日, 可明显减轻 CCl4 引起的小鼠肝坏死。垂盆草对
CCl4引起的大鼠亚急性肝损伤也有明显的保护作用, 治疗
组的C- 球蛋白显著低于对照组,肝脏纤维化程度也比对照
组轻。1102垂盆草稀醇提取物能降低亚急性肝损伤大鼠血清
ALT及磺溴酚钠滞留率, 并认为降酶成分是垂盆草苷。1112
垂盆草的水提物与大鼠肝微粒体体外温孵,对 NADPH - Vic
所致微粒体脂质过氧化和 Fe2+ -半胱氨酸所致大鼠肝细胞
的脂质过氧化损伤也有明显的保护作用。1152另有报道认为,
垂盆草降低血清谷丙转氨酶的作用不是直接的, 而是通过抑
制炎性渗出,减少肝细胞损伤来实现的。
从垂盆草中提取垂盆草苷制成垂盆草片, 按每天每只小
鼠 0. 5~ 1. 0mg 灌胃,结胃表明其对 CCl4性肝损伤有明显的
保护作用,可使肝细胞内糖元和葡萄糖 - 6 -磷酸酶、乳酸脱
氢酶含量增加,肝细胞内琥珀酸脱氢酶和 ATP 酶的活性增
强,显示垂盆草苷的保肝作用可能与此有关。1122
免疫抑制作用 垂盆草苷在大剂量时 ( 500mg /kg)对小
鼠的细胞免疫有明显的抑制作用,可使 C37纯系小鼠的胸腺
细胞减少,为对照组的 62% ; 能抗大鼠移植排斥反应, 即受
脾大鼠的淋巴结增大指数低于对照组,抑制 74% ; 还抑制小
鼠的脾脏斑形成细胞数,为正常对照组的 42% ~ 46% ;试验
中还发现,垂盆草苷能使外周血中白细胞数和中性粒细胞比
例增高, 另外还可见到给药组小鼠中 T 淋巴细胞比例显著
升高, 故推测垂盆草苷的作用可能类似类固醇甾体激素, 能
使外周 T 淋巴细胞转移至骨髓。1132
5 结 语
由于垂盆草苷为一水溶性氰苷类化合物, 稳定性差,
100e 以上受热分解, 贮藏过程中也可酶解, 因而, 各种制剂
中垂盆草苷的含量相差较大: 片剂含量差达 4. 3 倍, 糖浆剂
差达 3. 4 倍,颗粒剂差 3. 3 倍, 而浸膏剂甚至高达 7 倍172。
有文献报道112, 垂盆草苷的临床有效剂量为一日 100mg, 各
种垂盆草制剂中的垂盆草苷含量明显偏低, 按常规服药量,
其剂量均达不到有效剂量,这给质量控制及临床应用带来了
诸多不便。虽然如上所述,垂盆草苷在不同制剂中有的含量
存在很大差异,但在临床应用中却发现共制剂仍然有很好的
抗肝炎活性,并广泛被临床医生推荐使用。临床证明为降低
血清谷丙转氨酶的有效成分有报道称垂盆草苷并不是垂盆
草中惟一的抗肝炎活性成分,通过提取、净化、分离及各阶段
产物的保肝降酶试验 ,确认垂盆草药材的主要活性部位为 n
- BuOH 部分和 H2O部分, 这两部分的活性组分分别为总黄
酮和大极性苷类,这似乎说明除垂盆草苷等大极性苷外, 垂
盆草中的黄酮类成分也是抗肝炎的活性组分。1142
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