全 文 ： 收稿日期: 2001-10-08
基金项目:贵州省医药卫生科学技术支助项目
作者简介:董立莎 ( 1956— ) ,女 ,副教授
中图分类号: R151. 3 文献标识码: A
文章编号: 0512-7955( 2002) -02-0209-03
火棘果实磷脂成分的分析研究
Analysis of Pho spholipids in Pyracantha fortuneana Fruit
董立莎
(贵阳中医学院 ,贵阳 550002)
DONG LI-sha
( Guiyang College of Trad it ional Ch inese Medicine, Guiyang 550002, China )
火棘 [Pyracantha fortuneana ( Maxim. ) Li ]在
我国西南、华南、华中及西北地区分布甚广。成熟果
实呈红色 ,酸甜微涩 ,具有健脾消积 ,生津止渴 ,清热
解毒 ,活血止血的功效 [1 ] ,药理实验结果表明 ,具有
明显的防病保健作用 [2 ]。可鲜食 ,也可干后磨粉代粮
食用 ,故民间又称“救军粮”、“救命粮”。其营养十分
丰富 ,有多种维生素、人体必需微量元素、蛋白质及
人体必需氨基酸、糖类等 [ 3] ,但尚未见有关磷脂成分
的报道。为确定火棘果实的开发价值和有效利用途
径 ,进一步探明其保健营养作用的活性成分 ,本研究
对其磷脂成分进行了分析研究。
1 材 料 与 方 法
1. 1 磷脂标准品
磷脂酰甘油 ( PG) ,磷脂酰肌醇 ( PI) ,磷脂酰胆
碱 ( PC) ,溶血磷脂酰胆碱 ( LPC) ,磷脂酰乙醇胺
( PE)及磷脂酸 ( PA)均为美国 Sigma公司产品。
1. 2 试剂
磷标准液 (a、贮存液:精确称取 105℃干燥 12 h
后的无水磷酸二氢钾 ( A. R. ) 0. 4393 g ,置 100 ml
容量瓶中加蒸馏水溶解并稀释至刻度 ,加入氯仿
1 m l,冰箱保存。 b、应用液: 吸取贮存液 1 m l置
100 ml容量瓶内以蒸馏水稀释至刻度 ,此液含磷
322. 9μmo l /L ,加氯仿 1 ml ,冰箱保存。)。磷显色液
[ 3 mol /L硫酸∶水∶ 0. 1276 mol /L钼酸铵∶
0. 5682 mol /L抗坏血酸 ( 1∶ 5∶ 1∶ 1) ] ,配制时按
顺序加入 ,用前配制 ;消化液 [ 70%高氯酸 (优级
纯 ) ];氯仿∶甲醇 ( 2∶ 1) ; Folch试剂 ; Di t tmer试剂
配制方法参见文献 [4 ];其它试剂均为分析纯。
1. 3 薄层板的制备
在硅胶 H中加入一倍量的 0. 02 mol /L碳酸钠
溶液 (含 0. 3%羧甲基纤维素钠 ) ,调匀后涂于玻璃
板上 ,室温风干 ,硅胶层厚 0. 25 mm ,用前 110℃活
化 2 h。
1. 4 样品
火棘果实由贵阳市药用植物园提供和作者采自
安顺郊区 ,并经作者鉴定。
1. 5 样品处理与提取分离
取 50℃干燥 48 h后的样品粉碎过 40目筛 ,准
确称取 10 g于具塞三角瓶中 ,加入 Fo lch试剂
100 m l,称重后置 H66025T型超声波提取器中震荡
提取 40 min,取出再称重补足减少的溶剂 ,摇匀 ,待
自然澄清后其上清液为样品提取液。
1. 6 总磷脂含量测定
精密吸取样品提取液 1 ml于硬质试管中 ,水浴
上蒸干溶剂 ,另取试管 2支 ,为标准管及空白管 ,其
中 1支中加入磷标准液 0. 4 ml , 3管均分别加入消
化液 0. 25 ml,置电炉上消化使样品由棕黑色变为
无色透明为止。 冷后各管分别加入磷显色液转移并
定容至 10 ml容量瓶中 , 60～ 70℃水浴中恒温
10 min,冷却后以空白管调零 ,于 700 nm处比色测
定磷脂酸 ,根据公式 [5 ]换算成磷脂的含量。
1. 7 磷脂组分的鉴别
吸取提取液 5 ml ,加入 5倍量石油醚混匀 ,离
心除去亲水性杂质 ,清液通氮气减压回收溶剂。将残
留物溶于少量氯仿 ,以微量注射器点于碱性硅胶 H
209营养学报 2002年第 24卷第 2期DOI : 10. 13325 /j . cnki . acta . nutr . si n. 2002. 02. 027
薄层板上 ,同时点磷脂标准品。以氯仿—甲醇—冰醋
酸—无水乙醇—水 ( 25∶ 4∶ 6∶ 2∶ 0. 5)上行展开
15 cm ,取出挥干溶剂 ,喷磷脂特定显色剂 Dittmer
试剂显色定性 ,干后磷脂斑点呈蓝色。
1. 8 薄层扫描—吸光度比例系数校正法定量分析
将显色后的薄层板参照文献 [6 ]法在 CS-930型
薄层扫描仪上扫描。扫描条件:单波长反射法锯齿扫
描 ,线性参数 SX= 3,波长 700 nm ,灵敏度中等。将
微处理机给出的各磷脂组分的吸光度积分值与相应
的比例系数分别代入方程式:
Emo l% Ex× Epn( Ex× Ep)× 100
( E为某种磷脂组分 , Ex为某种磷脂组分的吸光度积
分值 , Ep为某种磷脂组分的吸光度比例系数 ,n为 n种磷
脂组分的总和 ) ,计算各磷脂组分的摩尔百分比 ,然后再根据
总磷脂浓度计算磷脂物质量的浓度。
1. 9 脂肪酸的气相色谱-质谱-计算机联用法分析
1. 9. 1 GC-M S条件: HP-5石英毛细管柱 , 0. 2 mm
× 25 m,涂布 5%苯甲基硅酮 ;载气为氦气 ,流量
32 m l /min, 50∶ 1分流比 ;柱前压 68. 9 k Pa ( 10
psi ) ;进样器温度 280℃ ,柱温为程序升温 , 200℃进
样 ,升温速度 5℃ /min至 280℃。质谱电离方式
EI;电子能量 70 eV;离子源温度 280℃ ;扫描速率
1. 364 s /dec;加速电压 4 kV;分辨率 1 200。
1. 9. 2 气相定量条件: HP-5石英毛细管柱 , 0. 35
mm× 15 m; 检测器: FID; 载气为氦气 , 流量
66 ml /min,柱前压 24. 115 k Pa( 3. 5 psi ) ;对色谱柱
以 150～ 280℃程序升温 ,速率 8℃ /min;脂肪酸百
分含量采用数据处理机峰面积归一化法测定。
1. 9. 3 样品甲酯化处理:吸取样品提取液 3 m l于
10 ml具塞试管中 ,通氮气吹干溶剂 ,加入三氟化硼
—甲醇试剂 1 ml,混匀后于 80～ 85℃水浴中加热
20 min,冷却后加入 1 m l正已烷和 5 m l蒸馏水 ,摇
匀后于 3 000 r /min条件下离心 5 min,上层相移入
另一试管中即可应用 GC-M S-DC法对脂肪酸进行
定性和定量分析。
2 结果与讨论
2. 1 磷脂成分的分析结果
火棘果总磷脂及各磷脂组分与含量 (表 1)
薄层层板定性结果显示 ,火棘果实中均含有各
磷脂组分 (图 1)
1. Phospha tidic acid ( PA )
2. Phospha tidylethanolamine ( PE)
3. Phospha tidylinositol ( PI)
4. Py racantha fo rtuneana
5. Phospha tidylglycer ol ( PG )
6. Ly sopho spha tidy lcho line ( LPC)
7. Phospha tidylcho line ( PC)
Fig . 1 TCL of standard phosphol ipids and several
phospholipids in dried fruit of Pyracantha fortuneana
Table 1 Composition and content of phospholipids in dried fruit of Pyracantha fortuneana ( x± s,n= 4)
Origin
Total
ph ospholipids( mol /L)
Composi tion of phospholipids ( mol /L)
LPC PE PC PA
Anshun 8. 341× 10- 2± 1. 87 4. 446× 10- 3± 0. 24 2. 736× 10- 3± 0. 58 7. 974× 10- 3± 0. 33 6. 825× 10- 2± 0. 72
Guiyang 9. 050× 10- 2± 2. 11c 4. 616× 10- 3± 0. 55 3. 349× 10- 3± 0. 46 7. 738× 10- 3± 0. 25a 7. 480× 10- 2± 0. 85
Note: PG and PI wi ll not g ran t integ ral value for th e slender conten t.
a P < 0. 05, c P < 0. 001 compared wi th An shun
从图和表 1中可以看出 ,火棘果实中共检出 6
个磷脂组分 ,其中以 PA为主 ,占总磷脂的 80%以
上。磷脂是构成神经组织 ,特别是脑脊髓的主要成
分 ,具有改进机体神经功能障碍和紊乱、恢复脑功
能、增强记忆力及抗衰老等功效 ,同时也是血球及其
它生物膜的重要构成材料。它可促进机体免疫功能 ,
增强人体淋巴细胞 DNA的合成 ,增高血红蛋白量 ,
增强胰岛素、骨细胞及神经的功能 ,参与机体的脂肪
代谢 ,降低胆固醇和抗脂肪肝 [7, 8 ]。
2. 2 脂肪酸的 GC-MS -DL分析结果 (表 2)
210 Acta Nutrimenta Sinica, Jun. 2002, Vo l. 24 No. 2
Table 2 Composi tion and content of fatty acids
in dried frui t of Pyracantha for tuneana
Compound Molecular w eigh t Content (% )
My ris tic acid 228 0. 70
Pen tadecaenoic acid 254 0. 30
Palmitic acid 256 9. 22
Stearic acid 284 0. 62
Oleic acid 282 28. 82
Linoleic acid 280 24. 61
Linolenoic acid 278 2. 55
Arachidic acid 312 0. 66
Arachidonic acid 304 1. 99
Beh enic acid 340 19. 70
Erucic acid 338 10. 78
从表 2中可见 ,火棘果实含有 11种以上的脂肪
酸 ,其中不饱和脂肪酸占 69% ,此具有降血脂和血
小板聚集的作用 ,防止动脉硬化 ,改善大脑机能 ,并
具一定的抗癌活性 [8 ]。
脂类化合物 ,是构成生物膜的重要物质 ,根据上
述药理作用 ,火棘果实中含有较多的磷脂和不饱和
脂肪酸 ,因而可以认为这些成分是火棘果营养保健
的主要物质基础之一。
关键词: 火棘 ; 磷脂 ; 脂肪酸
Key words: Pyracantha fortuneana ; phosphol ipids ;
fatty acid
〔参 考 文 献〕
[ 1] 贵州省中药研究所 .贵州中药资源 [ M ].北京: 中国医
药科技出版社 , 1992. 702.
[2 ] 柴立 ,邱德文 ,王和生 ,等 .赤阳子营养成分及保健作用
研究 [ J].贵阳中医学院学报 , 1988, 1: 39- 40.
[3 ] 董立莎 ,纪燕 ,陈建伟 ,等 .赤阳子的鉴定研究 [ J].贵阳
中医学院学报 , 1994, 16( 2): 62- 64.
[4 ] Dittmer JC, Lester RL. A simple specific spra y fo r
the detection of pho spholipids on thin la yer chro-
matog r ams [ J]. J Lipid Res, 1964, 5: 126- 128.
[5 ] 上海市医学化验所编 .临床生化检验 .上册 [M ].上海:
上海科技出版社 , 1979. 185- 187.
[ 6] 鲍风 ,张克 ,许永瑞 .生物膜磷脂组成的快速定量分析
[ J].科学通报 , 1985, 30( 20): 1574- 1576.
[7 ] 顾学裘 .从提高免疫功能角度设计的抗癌药物新剂型 -
多相脂质体 [ J].中成药研究 , 1982, 12: 4- 6.
[ 8] 顾学裘 .抗癌药物新剂型 - 多相脂体的研究 [ J].沈阳
药学院学报 , 1982, 15: 1- 3.
中国营养学会第五届老年营养学术会议在杭州举行
中国营养学会第五届老年营养学术会议 ,于 2002年 5月 14-17日在杭州举行。浙江科协学会部高部长 ,
浙大营养研究所张爱珍所长 ,中国营养学会荣誉理事顾景范、陈孝曙教授出席开幕式。 浙江省营养学会副理
事长凌诚德教授主持开幕式 ,中国营养学会老年营养专业委员会主任史奎雄教授致开幕词。
大会收到论文 51篇 ,顾景范、陈孝曙、凌成德、陆瑞芳、程五凤五位教授作了专题报告 , 13篇论文在会上
进行了交流。 (题录见本刊 199页 )。 讨论热烈 ,学术空气十分浓厚。
与会代表一致认为:自第四届老年营养会议以来 ,营养工作取得了可喜进展和成绩 ,如运用基因工程重
组技术制成瘦素进行降脂作用研究 ;运用诱导全血清脂蛋白氧化修饰模型研究大豆异黄酮的作用 ;在宏观社
区营养工作中已从社区营养调查、分析疾病与营养的关系来指导社区慢性病的防治。但在我国步入老龄社
会 ,老年营养越来越受到关注的今天 ,老年营养的基础研究还需更深入。 须采用新技术 ,提高研究水平 ,须加
强延缓衰老及营养素代谢关系、老年保健品功能因子的探索 ,须将平衡膳食纳入为社区老年服务内容。总之 ,
老年营养工作任重道远 ,须我们大家共同努力。
本次会议前获喜讯。老年营养专业组已升格为老年营养专业委员会 ,全体代表对老年营养科学的发展充
满信心。
(老年营养分会 )
211营养学报 2002年第 24卷第 2期