全 文 ：第 30卷 ,第 6期 光　谱　实　验　室 Vol . 3 0 , No . 6
2 0 1 3年 1 1月 Chinese Journal of Spectroscopy Laboratory November , 2 01 3
陕西山楂总黄酮的含量测定①
① 西安市科技计划项目 CX12189WL35
② 联系人 ,手机: ( 0) 13259756557; E-mail: happych kk@ 163. com
作者简介:陈克克 ( 1981— ) ,女 ,山东省青岛市人 ,讲师 ,硕士 ,主要从事植物产品分离与检测的研究工作。
收稿日期: 2013-06-18;接受日期: 2013-06-28
陈克克②　强 毅a
(西安文理学院生物技术学院　西安市太白南路 168号　 710065)
a(陕西师范大学生命科学学院　西安市长安南路 199号　 710062)
摘　要　为确定陕西产山楂总黄酮的含量 ,以芦丁为对照 ,采用 NaNO2-A l( NO3 )3-NaO H分光光度法
510nm波长下测定了陕西产山楂总黄酮含量。 回归方程为 y= 0. 0159x+ 0. 0019,相关系数 r= 0. 9908,陕
西产山楂总黄酮含量为 ( 17. 52± 1. 42) mg /g。该试验方法简便灵敏 ,结果准确可靠 ,可用于陕西山楂总黄酮
的测定。
关键词　陕西 ;山楂 ;总黄酮 ;分光光度法
中图分类号: O657. 32; Q946. 8　　　文献标识码 : A　　　文章编号: 1004-8138( 2013) 06-3013-04
1　引言
山楂为蔷薇科植物 ( Rosaceae )山楂 ( Crataegus pinnati f ida Bge. )或山里红 ( Crataegus
pinnatif ida Bge. var. major N. E. Br. )的干燥成熟果实 [1 ] ,药食兼用。研究发现 ,山楂具有降血压、降
血脂、舒张血管、抗氧化、抗心率失常等作用 [2, 3 ] ,对高血压、高血脂、冠心病、心绞痛等均有较好的疗
效。黄酮类化合物是山楂发挥有效作用的最主要成分 ,是一类具有 C6-C3-C6基本母核的天然有色
产物 ,广泛存在于中药、天然产物和食物 (蔬菜和水果 )中 [4 ]。近年来 ,黄酮类化合物以其天然的生物
活性正逐渐应用于食品、医药和保健方面 ,已成为当前研究的热点。
山楂在全国各地均有分布 ,植物资源丰富。 陕西广大地区是山楂的适生区 [5 ] ,但目前尚未见对
陕西地区山楂中黄酮类化合物含量研究的报道。为了明确陕西地区山楂中黄酮类化合物含量及其
品质质量状况 ,有效控制山楂质量 ,更好地综合利用山楂植物资源 ,我们采用分光光度法测定了陕
西地区山楂的总黄酮含量 ,以期为陕西山楂产业发展提供基础研究数据和理论依据。
2　实验部分
2. 1　材料、仪器与试剂
2. 1. 1　材料
山楂采自陕西省西安市 ,经西安文理学院生物技术学院植物学教研室鉴定为蔷薇科山楂属植
物山楂。
2. 1. 2　仪器与试剂
TU-1800型紫外-可见分光光度计 (北京普析通用仪器有限责任公司 ) ; BS223S型电子分析天
平 (北京赛多利斯仪器系统有限公司 ) ; ZD-85型恒温震荡摇床 (江苏常州国华电器有限公司 )。
芦丁标准品 (中国药品生物制品检定所 ,批号为 111521-200303,供含量测定用 ) ;无水乙醇、亚
硝酸钠等所用试剂均为国产分析纯。 实验用水为蒸馏水。
2. 2　方法
2. 2. 1　样品溶液的处理和制备 [6 ]
将山楂 30℃烘干后粉碎 ,过 40目孔径筛 ,置于通风干燥处保存备用。
准确称量山楂样品 5g,加入 60%乙醇溶液 100mL,于摇床 30℃浸提 24h,过滤 ,取滤液 ,即得样
品溶液。
2. 2. 2　芦丁校准曲线的制备
准确称取 105℃烘干至恒重的芦丁标准品 12mg ,置于 50mL容量瓶中 ,用甲醇溶解并稀释至
刻度 ,摇匀 ,即得芦丁标准品溶液 ,浓度为 0. 24mg /mL。
分别准确吸取芦丁标准品溶液 0、 0. 5、 1. 0、 2. 0、 4. 0、 6. 0mL置于 25mL容量瓶中 ,向容量瓶中
依次加入 6. 0mL蒸馏水、 5% NaNO2 1. 0mL,摇匀 ,放置 6min,加入 10% Al( NO3 ) 3 1. 0mL,摇匀 ,
放置 6min,再分别加入 1mol /L NaOH溶液 8. 0mL,最后用蒸馏水分别稀释至刻度 ,摇匀。以第 1瓶
溶液为空白对照 ,于 510nm波长处测定吸光度。
2. 2. 3　样品总黄酮的含量测定
取样品溶液 1mL,按照 2. 2. 2项下的方法 ,在 510nm波长处测定吸光度 ,做 3次平行 ,以吸光
度的平均值代入回归方程计算样品中总黄酮的含量。
3　结果与讨论
图 1　芦丁校准曲线
3. 1　芦丁校准曲线绘制
以芦丁质量浓度 (μg /mL)为横坐标 ,对应吸光
度值为纵坐标 ,绘制芦丁的校准曲线 ,结果见图 1。
结果表明 ,芦丁标准品溶液浓度在 4. 4— 52. 8
μg /mL范围内呈良好的线性关系。 得回归方程:
y= 0. 0159x+ 0. 0019,相关系数 r= 0. 9908。
3. 2　精密度试验
准确吸取样品溶液 1mL,在相同的条件下平
行测定 3次吸光度 ,计算 RSD,考察其精密度。
RSD在 0. 31%— 0. 47%范围 ,表明仪器精密度良好。
3. 3　稳定性试验
将样品溶液每隔 1h测定 1次吸光度 ,连续测定 3次 ,计算 RSD,考察样品的稳定性。 RSD在
0. 50%— 0. 57%范围 ,表明待测样品溶液在 3h内稳定。
3014 光谱实验室 第 30卷
3. 4　重复性试验
对同一批样品按 2. 2. 1项下的方法平行制备 3份 ,分别测定吸光度 ,计算 RSD,考察其重复
性。 RSD在 0. 12%— 0. 47%范围 ,表明方法重复性良好。
3. 5　加标回收率
准确吸取 1m L已知浓度的样品溶液各 3份 ,各组分别准确加入已知含量芦丁标准品溶液
1mL,按照上述方法显色后测定吸光度 ,计算回收率。结果见表 1,平均回收率为 104. 3% , RSD为
5. 51% ,表明方法的准确率较高 ,适用于山楂总黄酮的测定。
表 1　总黄酮加标回收率试验结果 (n= 3)
序号 样品中芦丁含量
( mg)
标准芦丁加入量
( mg)
测得总量
( mg)
回收率
(% )
平均回收率
(% )
RSD
(% )
1 0. 9631 0. 24 1. 2512 104
2 0. 7985 0. 24 1. 1424 110 104. 3 5. 51
3 0. 9151 0. 24 1. 1435 99
3. 6　样品测定
根据芦丁校准曲线的回归方程计算供试品溶液中芦丁的浓度 ,本品按干燥品计算 ,根据公式:
总黄酮含量= 芦丁量 /干材料质量 ,算出陕西产山楂总黄酮的平均含量为 17. 52± 1. 42mg /g
(n= 3)。
3. 7　讨论
对于植物提取物中总黄酮含量的测定 ,一般采用传统的紫外分光光度法 (或者称为化学比色
法 ) [7 ] ,该方法是药典中测定总黄酮的常用方法 ,操作简单方便、稳定性好、精密度高、准确可靠 ,可
用于山楂的检验和质量控制。
4　结论
本实验以芦丁为标准品 , 510nm测定吸光度 ,所得校准曲线线性关系良好 ,实验精密度、稳定
性和重复性均良好 ,平均加标回收率为 104. 3% ,测定结果表明 ,陕西产山楂总黄酮的平均含量为
17. 52± 1. 42mg /g。本文首次测定了陕西山楂中的总黄酮含量 ,该结果为陕西山楂的进一步开发和
综合利用提供理论依据。
参考文献
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3015第 6期 陈克克等:陕西山楂总黄酮的含量测定
Determination of Total Flavonoids in Hawthorn from Shaanxi
CHEN Ke-Ke　 Q IANG Yia
( School of Biological Technolog y, X i’ an University of Arts and Science,X i’ an, Shaanxi 710065,P . R.Ch ina )
a (College o f Life Science, Shaanxi Normal University, X i’ an , Shaanxi 710062, P. R. China )
Abstract　 The content of to tal flavonoids in haw thorn f rom Shaanxi was determined at 510 nm
by NaNO2-Al( NO3 ) 3 -NaOH colorimetric assay wi th rutin as reference substance. The results show
that the reg ression equation of rutin w as y= 0. 0159x+ 0. 0019, r= 0. 9908. The content of total
f lavonoids in haw thorn w as 17. 52± 1. 42mg /g. The method is simple and sensitiv e, and that can be
applied to determine the content of total f lav onoids in haw tho rn f rom Shaanxi.
Key words　 Shaanxi; Haw thorn; Total Flav onoids; Spect rophotometry
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3016 光谱实验室 第 30卷