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黄水枝的生药学研究



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分别用3种TLC体系检测均为单一斑点,经与对照
品共薄层,斑点Rf值相同并且混合后熔点不变,故可
以确定化合物3是胡萝卜苷。
化合物4:白色无定形粉末(甲醇-水),分子式:
C48H78O18,相对分子质量:942。易溶于水、微溶于甲
醇。Liebermann-Burchard反应:砖红色→蓝色→蓝
绿色→绿色;Molish反应呈阳性。显示该化合物为
三萜皂苷类化合物。
1 H-NMR(pyridine-d6)δppm:5.313(1H,s,H-
12),0.669(3H,s),0.669(3H,s),0.943(3H,s),
0.992(3H,s),1.216(3H,s),1.283(3H,s),1.551
(3H,s),1.760(3H,s),4.961(1H,d,J=6.5Hz,
glc A H-1),5.793(1H,d,J=7.2Hz,glc H-1),
6.201(1H,s,rha H-1)。
13C-NMR(pyridine-d6)δppm:144.687(C-13),
122.412(C-12),91.699(C-3),75.456(C-22),63.254
(C-22),56.247(C-5),48.313(C-9),46.466(C-19),
45.218(C-18),43.286(C-4),42.217(C-14),39.657
(C-8),39.219(C-1),37.876(C-17),36.208(C-10),
33.165(C-7),32.636(C-29),30.354(C-20),28.478
(C-16),28.392(C-28),26.250(C-15),25.954(C-2),
25.182(C-27),22.658(C-23),21.067(C-30),18.329(C-
6),16.737(C-26),15.648(C-25),105.195(glc A C-1),
172.831(glc A C-6),102.099(rha C-1),101.726(gla C-
1)。与文献结构[6-7]一致,故可鉴定化合物4是大豆苷
元B-3-O-[α-D-鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖基(1→
2)-β-D-葡萄糖醛酸苷。
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(收稿日期:2013-03-20)
黄水枝的生药学研究
岐 琳1,刘 霞1*,刘宇凡2,姜 海1(1.西安交通大学药学院,西安710061;2.西安市第四医院药剂科,西安710004)
摘要:目的 对黄水枝Tiarella polyphylla D.Don进行显微鉴别和总黄酮含量测定。方法 显微鉴别采用形态学和组织学鉴别
方法,总黄酮含量测定采用分光光度法。结果 黄水枝茎薄壁细胞中含草酸钙簇晶;粉末中可见不定式气孔、腺毛和非腺毛。黄
水枝总黄酮含量为2.5%~3.9%。结论 上述显微特征及总黄酮含量测定可用于黄水枝药材的质量鉴定。
关键词:黄水枝;生药学;总黄酮;含量测定
doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2013.05.016
中图分类号:R282   文献标志码:A   文章编号:1004-2407(2013)05-0480-03
Study on the pharmacognosy of Tiarella polyphylla D.Don
QI Lin1,LIU Xia1*,LIU Yufan2,JIANG Hai 1(1.School of Pharmacy,Xi′an Jiaotong University,Xi′an 710061,China;2.Phar-
macy of Xi′an the Fourth Hospital,Xi′an 710004,China)
Abstract:Objective To establish a microscope identification method and to determine the total flavonoids content of Tiarella
polyphylla D.Don.Method Morphological and histological methods were used for microscopic identification.Spectrophotometry
was used for the determination of total flavonoids content.Result There were clusters crystals in stems of Tiarella polyphylla
D.Don.Anomocytic type stomas,glandular hairs and non-glandular hairs were visible in powder.There are many types of ves-
sels.The content of total flavonoids was 2.5%-3.9%.Conclusion The microscopic characteristics and the determination method
of total flavonoids content can be used for the quality evaluation of Tiarella polyphylla D.Don.
Key words:Tiarella polyphylla D.Don;pharmacognosy;total flavonoids;assaying
作者简介:歧琳,女,实验师
*通信作者:刘霞,女,讲师
  黄水枝Tiarela polyphyla D.Don为虎耳草科黄
水枝属植物,主要分布于我国中部至西南部。药用带根
全草,其性寒味苦,无毒,具有清热解毒、活血散瘀、消肿
止痛之效[1-2],用于治疗痈疥肿毒、跌打损伤及咳嗽气喘
等。黄水枝目前的研究报道较少,韩国学者报道了从黄
水枝甲醇提取液中分离得到了7种齐墩果酸皂苷,证明
其具有良好的抗补体作用[3]。张晓丹等从黄水枝中分
离得到了9个黄酮类化合物[4],刘向前等对其挥发性成
分进行了研究[5]。目前,对黄水枝显微鉴别和其所含总
黄酮的测定还未见报道。因此,对黄水枝进行了显微鉴
别研究,对所含总黄酮进行了含量测定,为黄水枝的药
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用开发和药材质量标准的建立提供参考。
1 材料和方法
1.1 实验材料 药材于2010年在陕西省户县及西
安交通大学药学系药圃采集,经鉴定为黄水枝
Tiarella polyphylla D.Don的全草。
1.2 实验方法 药材的显微鉴别分别采用石蜡切
片、徒手切片、表面切片和组织解离的制片方法;显微
结构图使用上海光学仪器厂44XIV型显微扫描仪绘
制;药材中总黄酮的含量测定使用UV-260型紫外可
见分光光度计(日本岛津)。
2 植物形态
多年生草本,具根茎。茎直立,细弱,高15~50cm,
通常不分枝或由基部分枝,被白色粗毛;基生叶心形,
有长柄,长2~8cm,先端急尖,掌状3~5浅裂,具不
规则牙齿,两面密被腺毛;叶柄长2~12cm,密被腺
毛,托叶褐色;茎生叶常2~3片,与基生叶同型,叶柄
较短。总状花序8~25cm,顶生,疏生多数白色小
花,被腺毛;萼片花期直立,狭卵形,长约1~2mm,
先端梢渐尖,具3脉,背部具腺毛;花瓣披针形,比萼
片稍长;雄蕊通常伸出,花丝钻形;心皮2,不等大,下
部合生,子房近上位,花柱2;蒴果长0.7~1.2cm,顶
端具尾尖;种子黑褐色,椭圆形,长约1mm;花果期
6~7月,果期7~9月。生于海拔1 800~2 600m林
下、路旁或阴湿的石壁上。产于陕西、湖北、湖南、四
川、云南和西藏等省区。
3 显微特征
3.1 根横切面 表皮为1~2列切向延长的扁长方
形细胞,细胞壁薄,呈多角形或切向延长,微栓化。皮
层细胞较大,由数层切向延长的薄壁细胞组成。韧皮
部细胞比皮层薄壁细胞明显小,扁平状,排列在木质
部外方。形成层不明显。木质部导管多径向排列,偶
见木纤维。薄壁细胞含少量淀粉粒。见图1。
图1 黄水枝根横切面图
1.表皮;2.皮层;3.韧皮部;4.形成层;5.木质部
Fig.1Root transection of Tiarella polyphylla
1.epidermis;2.cortex;3.phloem;4.cambium;5.xylem
3.2 茎横切面 表皮为2列长方形细胞,下皮细胞
栓化,2~3列,细胞呈切向延长。皮层由数列多角形
薄壁细胞组成。维管束环列,约16束,为有限外韧
型,韧皮部窄小,束间形成层4~5列,不明显,木质部
导管径向排列。维管束外侧具有较多韧皮纤维,木质
部外侧具少量木纤维,髓部宽广。薄壁细胞中可见少
量草酸钙簇晶。见图2。
图2 黄水枝茎横切面图
1.表皮;2.皮层;3.韧皮纤维;4.形成层;5.木质部;6.髓;
7.草酸钙簇晶
Fig.2Stem transection of Tiarella polyphylla
1.epidermis;2.cortex;3.phloem fiber;4.cambium;5.xy-
lem;6.pith;7.cluster crystal of calcium oxalate
3.3 叶横切面 上下表皮细胞1列,横向延长,外被
角质层。栅栏组织为1~2列短柱状细胞,未通过主
脉,与海绵组织区分不明显。维管束为有限外韧型,
木质部导管数个放射状排列。表皮上可见腺毛及非
腺毛。见图3。
图3 黄水枝叶横切面图
1.腺毛;2.上表皮;3.栅栏组织;4.海绵组织;5.下表皮;6.韧
皮部;7.木质部
Fig.3Leaf transection of Tiarella polyphylla
1.glandular hairs;2.upper epidermis;3.palisade tissue;
4.spongy tissue;5.lower epidermis;6.phloem;7.xylem
3.4 粉末 非腺毛1~6细胞,直径8~31μm,长37
~312μm。腺毛头部1~8细胞,直径6~29μm,长
23~159μm。腺鳞较少,头部8细胞。气孔多为不
定式,副卫细胞5~8个。纤维壁厚,纹孔及孔沟不明
显,直径5~12μm,长51~216μm。导管主要为网
纹导管和螺纹导管。薄壁细胞中含有草酸钙簇晶,直
径12~36μm,棱角宽钝或尖。见图4。
4 总黄酮含量测定
4.1 对照品溶液制备 精密称取105℃干燥至恒质
量的芦丁对照品10.0mg,置于100mL量瓶中,加体
积分数60%乙醇适量,振摇使溶解,并稀释至刻度,
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摇匀,即得每1mL含芦丁0.1mg的对照品溶液。
图4 黄水枝粉末图
1.非腺毛;2.腺毛;3.气孔;4.导管;5.纤维;6.草酸钙簇晶
Fig.4Powder of Tiarella polyphylla
1.non-glandular hair;2.glandular hair;3.stoma;4.vessel;
5.fiber;6.cluster crystal of calcium oxalate
4.2 供试品溶液制备 取黄水枝药材粗粉约1.0g,
精密称定,置于索氏提取器中,加入石油醚(60~90℃)
100mL,回流提取8h除杂;药粉挥干石油醚,用体积
分数60%乙醇50mL,同法提取2次(1.5和1h),过
滤,合并滤液,回收乙醇;残渣用体积分数60%乙醇溶
解并移入10mL量瓶中,用体积分数60%乙醇稀释至
刻度,摇匀;精密吸取1mL,置于50mL量瓶中,用体
积分数60%乙醇稀释至刻度,摇匀,滤过,即得。
4.3 线性关系考察 精密吸取对照品溶液0.5,1,
2,3,4和5mL,分别置于10mL量瓶中,加体积分数
60%乙醇至5mL,精密加入50g·L-1亚硝酸钠溶
液1mL,摇匀,放置6min;精密加入100g·L-1的
硝酸铝溶液0.3mL,混匀,放置6min;精密加入氢氧
化钠试液2mL,用体积分数60%乙醇稀释至刻度,
摇匀,放置10min。空白对照加入同样试剂,采用紫
外-可见分光光度计,选择510nm为测定波长,测定
不同质量浓度对照品溶液的吸光度值。以芦丁对照
品质量浓度Y 为横坐标、对照品溶液吸光度值X 为
纵坐标,做标准曲线,回归方程:Y=11.526 X+
0.039,r=0.999 9,结果表明,芦丁对照品质量浓度
在5~50μg·mL
-1范围内,芦丁对照品质量浓度与
吸光度值之间呈良好的线性关系。
4.4 精密度实验 精密吸取配制好的芦丁对照品溶
液(质量浓度为100μg·mL
-1)2mL,按4.3项下方
法操作,连续6次在510nm波长处测定对照品溶液
吸光度值,结果RSD为0.52%,实验结果表明仪器
精密度良好。
4.5 稳定性实验 取同一批制备好的供试品溶液,
在0,15,30,60,90和120min的时间点,分别测定供
试品溶液吸光度值,结果RSD为0.71%。实验结果
表明,在放置120min内,供试品溶液稳定性良好。
4.6 重复性实验 取同一批号样品粉末1.0g,共6
份,按样品测定方法平行测定,计算总黄酮含量,结果
RSD为1.20%,实验结果表明,方法重复性良好。
4.7 加样回收率实验 取已测定含量的样品粉末
0.5g,共6份,精密称定,分别精密加入一定质量浓
度的芦丁对照品溶液,挥干溶剂,按供试品溶液制备
方法制备样品,空白对照加入同样试剂,采用紫外-可
见分光光度计,选择510nm为测定波长,测定样品
溶液的吸光度值,采用建立的标准曲线计算样品溶液
质量浓度,计算样品加样回收率,平均回收率为
98.8%,RSD为2.5%。
4.8 样品测定 测定样品为采集于陕西省户县和西
安交通大学药圃的8个批次样品,供试品溶液制备方
法按4.2项下操作,采用紫外-可见分光光度计,测定
供试品溶液的吸光度值,采用建立的标准曲线计算样
品含量。户县5批野生黄水枝药材总黄酮的含量分
别为3.3%,3.9%,3.5%,3.1%和3.6%,药圃栽培
的3批黄水枝药材总黄酮含量分别为2.8%,2.5%
和2.9%。
5 讨论
黄水枝的茎的薄壁细胞中含草酸钙簇晶;粉末中
可见不定式气孔、腺毛和非腺毛。以上可作为黄水枝
的主要显微鉴别特征。
黄水枝中含有多种黄酮类化合物,因此,参考文
献进行了药材中总黄酮的含量测定[6-7]。对总黄酮的
测定波长选择进行了实验,分别精密吸取对照品溶
液、供试品溶液适量,分别置于10mL量瓶中,加体
积分数60%乙醇至5mL,精密加入50g·L-1亚硝
酸钠溶液1mL,摇匀,放置6min,精密加入100
g·L-1的硝酸铝溶液0.3mL,混匀,放置6min,精
密加入氢氧化钠试液2mL,用体积分数60%乙醇稀
释至刻度,摇匀,放置10min。以相应试剂为空白,
照紫外-可见分光光度法,在300~600nm进行扫描。
由紫外吸收图谱可知,样品溶液和对照品溶液在
510nm处有最大吸收,故选择510nm为测定波长。
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